簡(jiǎn)介：分類號(hào)S855密級(jí)公開(kāi)不加密UDC619編號(hào)2015120906010862012級(jí)攻讀碩士學(xué)位研究生畢業(yè)論文青海部分地區(qū)藏羊膈肌住肉孢子蟲感染情況調(diào)查青海部分地區(qū)藏羊膈肌住肉孢子蟲感染情況調(diào)查及分子生物學(xué)種屬鑒定及分子生物學(xué)種屬鑒定INFECTIONINVESTIGATIONANDMOLECULARIDENTIFICATIONOFSARCOCYSTISFROMDIAPHRAGMOFTIBETANSHEEPINPARTSOFQINGHAIPROVINCE論文起止時(shí)間20121020154指導(dǎo)教師康明教授學(xué)生姓名張洪波張洪波學(xué)科專業(yè)名稱學(xué)科專業(yè)名稱基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)研究方向高原畜禽生理學(xué)高原畜禽生理學(xué)學(xué)院學(xué)院系、部系、部農(nóng)牧學(xué)院農(nóng)牧學(xué)院

簡(jiǎn)介：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文豬囊尾蚴發(fā)育過(guò)程中的超微形態(tài)學(xué)和膜分子生物學(xué)及其藥物影響姓名郝艷紅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師李慶章20000101翌笙羔～墨一蘭塑蘭～。翌簍LTRAMICROMORPHOLOGYANDMEMBRANEMOLECULARBIOLOGYOFCYSTICERCUSCELLUTOSAEANDEFFECTSOFDRUGSABSTRACLQV口LERCOSIACEHDOIOEISANL硝事洲撕虻P瑟ASITICZOONOSTSENDANGEANGTHEHCAL蕩EFHUMA“ANDDEVEIOPALENT0RP哩BREEDINGNORA凼。PCR蠡搿PREY髑“。NANDTHERAP3，DRUGSSAITLLACKTH。AUTHORSTUDIEDFIRSTHSSTEMATLCALLANDREUNDL4OILTHEULTRAMICROMORPHOLOGYANDMEMBRANEMOLECULARBIOLCGJ毹CVS“C2WSCELLULOSAEANDEFFECTSOFDRUGSDURINGDEVELOPMENT㈤ITREA娃D(zhuǎn)弧”VOT汝RESULTSW∞SHOWEDAS科】O、惦L弧ES靠W。LU津OFLHEEMBRYOMERABRMM。F稚￡H口踟蹦豫囂SWASDEFINEDFIRSTLYIT啪4LAYERSINCLUDINGCUTERMEMBRANEIAYERIOMLVITELLINE1A、’EFVL，EMBVOPHONELAYERET1ANDONCOSPHERALMEMBRANELOM，ANDTHEOUTERLAYER、、。ASAFIBRWNLELUBLRRETOPROTECTTHEEGGS2THESCOLEXWITHHOOKSOFTGENLA5鎦7F口|NONOOSPHEREWAS小C。、一ORODFIRSTLYAFTERCULTARED島R5DAYS3確SURFACEU1RAMIEROMARPHOLEGY靠QLLHCERCWSCELLOSAEWASOBSERVEDFIRSTH；S3STEMTLAALL3ANDMUNDL3’I【、’ASFOUNDTHATITSCER、’IXMIEROPROCESSESDISTRIBUTEDENFLIENGA們幽8IOFTHEBLADDERCLUSTERTHEBLADDERH，89OOMPOSEDOFTWODISTRICTS、NOARTHECERVLXANDFARFROMTHEE群V伐。ANDTHEMO嬸FOOESSESTILE出STRICTILEBT“譙ECERVIXDLS峨BNTEDDENSENESSLYTHEOUTWARDHOIEOFSHEDRAINAGESYSTEMOFCYSTICEMUSCEFSSOEWASDISCOVEREDANDHEHOLEⅥASMORELLLTHEDISLRIETEARFROMTHECE“，IXTHISJNDICALEGTHATTHE如NOTIONOF“VODISTRI文SLODLFIERENT4弧ESLRAEPDREOFTHEBLADDERWASDEFIN耐FIRSTIXTOBE6LAYERS，TUGUM黜“T，EXTERIORMESENEHYMAEM，PNCNCHYR“AIAYERPL，IRTTERIOR諾CS鼢C盼MAL融，IMERIORM砸XZ∞瑚固ANDINTERIORLAYERILTHEGTRNETUREOFTHECERVIXWAS3LAYERSTEGUMENTD，MESENEHYM截MANDPARENEH、，MAPL5THEAUTHORSTUDIEDFISTHS、STEMTICALL3RANDROUNDH，ONTHEMEMBRANEMELEEUIARBLUING醯C％T。TC∞CERULOSAEDUNNGDEWLOPMENKANDPILLFONVARDTHEBIOMEMHRNNESYSTEMEHEMIEAT。OMP。5皂THEPITTASS。F毋ESPHORLAAME|ABRAIXM嘲BIOMEMHRANEC醅疆?？dES矗魯黼DTHEIRCHANGESDURINGDEVELOPMENT6THEAUTHORSELECTEDTHEDRUGSAGAINSTCEELH_FSAEANDSTUDIEDITSMACKAUISMOFACTIONON轡。ULTRAMICROMORPHO。GYANDMTRNBRATMME|EEUARBIOLOGYIEVETTHERESUHSSHOWEDNXLWSEFFECTIVEAGAINSTIMMATUREANDMANLRECCEHFLOSAEITMTFIBITEDTHEPHESPHOIIPIDMCTABOHSMOFFWOSTAGESNX。WASONLYEFFCCTLXCAGAINSTMATURECCE，／MSOE，ITDAMAGEDDIRECTHTHESTRTLEEUREOFTHESOLEXNXTWASINCFROCLNE

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)博士學(xué)位論文果樹(shù)提早開(kāi)花的分子生物學(xué)基礎(chǔ)研究姓名劉淑芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)果樹(shù)學(xué)指導(dǎo)教師陳力耕200151■構(gòu)特性，分別用XHOI單酶切、XHOI和NOTI雙酶切，結(jié)合圖譜分析得到的是部分插入的LFY基因片段。亞克隆后連接到PBS質(zhì)粒中，得LFY同源基因片段CSLFY9914。序列測(cè)定結(jié)果反應(yīng)仍然是終止在342BP后的高GC區(qū)，且這段序列與用UNEVENPCR得到的克隆片段序列互相重疊。在己知的342BP序列中不存在內(nèi)含予，且根據(jù)外顯子序列推導(dǎo)的氨基酸序列與已知的其它幾種植物L(fēng)EAFY及其同源基因的同源性高達(dá)8098％，核苷酸序列達(dá)88％左右。，1基因轉(zhuǎn)化方面建立了葡萄高效穩(wěn)定的離體再生系統(tǒng)，為開(kāi)展LFY基因?qū)ζ咸堰z傳轉(zhuǎn)化研究奠定基礎(chǔ)。F分別采用葉片和帶芽莖段為外植體，接種于添JI；FET同成分的培養(yǎng)基GSZT20ME／LIBA0IMG／LPH60中，25℃，光照強(qiáng)度約20003000LX，光暗周期為16H／8H條件下培養(yǎng)2周后，發(fā)現(xiàn)葉片做外植體以生根為主，且根系長(zhǎng)勢(shì)很好，而以帶芽莖段為外植體則可誘導(dǎo)成完整植株，且根、莖生長(zhǎng)平衡且長(zhǎng)勢(shì)良好。實(shí)驗(yàn)使用了ZT和6一BA兩種細(xì)胞分裂素，同時(shí)使用了IBA、NAA和IAA三種生長(zhǎng)素，不同激素配比對(duì)莖段繼代10天后生長(zhǎng)情況的影響表明，培養(yǎng)基GSZV20ME／LIBA01ME／LPH6062中激素比例既適合莖段增殖，也利于根系生長(zhǎng)，后續(xù)實(shí)驗(yàn)的基本轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基。此外，根據(jù)資料還建立了高效穩(wěn)定的柑桔再生體系。7。利用已知全序列的擬南芥菜LEAFY基因序列，設(shè)計(jì)合成兩個(gè)特異性引物。匍用凍融法，將攜帶有擬南芥的LEAFY全長(zhǎng)EDNA基因的載體PDC202，轉(zhuǎn)化到土壤農(nóng)桿菌GV3103中，用葉盤法轉(zhuǎn)化葡萄和柑桔再生體系受體植株的帶芽莖段和子葉，通過(guò)初步抗性篩選、及包括PCR方法、SOUTHERN雜交等分子生物學(xué)方法檢測(cè)，成功地得到了轉(zhuǎn)基因植株；葡萄和柑桔兩種果樹(shù)受體植物轉(zhuǎn)化擬南芥菜LEAFY基因后，都具有較高的轉(zhuǎn)化頻率，其轉(zhuǎn)化芽再生頻率分別為38％和25％。廣一一／利用微體嫁接方式初步解決了柑桔轉(zhuǎn)基因植株生根難的問(wèn)題。隧個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程要求嚴(yán)格，為避免由于人為、自然因素而導(dǎo)致得來(lái)不易的轉(zhuǎn)基因植株嫁接失活，本實(shí)驗(yàn)在微體嫁接支持物的選用上做了適當(dāng)改進(jìn)，用與試管口等大的滅菌海錦做支撐物，既可起穩(wěn)定支架作用，又可保證植株吸收充分的液體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供其生長(zhǎng)，同時(shí)極大地避免了操作過(guò)程中的污染。成功的得到了轉(zhuǎn)基因植株的微體嫁接苗。，2

簡(jiǎn)介：摘要松樹(shù)萎蔫病自上世紀(jì)以來(lái)一直是林業(yè)上的毀滅性病害。一般認(rèn)為，松樹(shù)萎蔫病的病原微生物為松材線蟲BURSAPHELENCHUSXYLOPHILUS。由于目前對(duì)于松材線蟲的防治尚無(wú)經(jīng)濟(jì)有效的措施，嚴(yán)格檢驗(yàn)檢疫是阻止該病的發(fā)生、傳播和蔓延最重要的途徑之一。由于擬松材線蟲BURSAPHELENCHUSMUCRONATUS具有和松材線蟲極其相似的外形特征，而難以將這兩種線蟲區(qū)分，針對(duì)這個(gè)問(wèn)題，本文對(duì)這兩種線蟲的形態(tài)學(xué)以及分子生物學(xué)的鑒定方法進(jìn)行比較研究，以便找出一種準(zhǔn)確、便捷的檢驗(yàn)檢疫方法。本研究分別收集了不同來(lái)源的40種松材線蟲和擬松材線蟲，并進(jìn)行了形態(tài)學(xué)鑒定。雖然兩種群之間根據(jù)雌蟲的尾尖突的不同可以將其粗略區(qū)分開(kāi)來(lái)，但由于這一特征的不穩(wěn)定性，并不能將兩種線蟲準(zhǔn)確的區(qū)分。在ITSRFLPRESTRICTIONFRAGMENTLENGTHPOLYMORPHISIM研究中，首先探討了線蟲DNA的最佳提取方法，確認(rèn)采用SDS法提取線蟲基因組DNA，并以ITS區(qū)特異性引物分別對(duì)松材線蟲和擬松材線蟲擴(kuò)增，均獲得了950BP左右的擴(kuò)增片段。進(jìn)一步利用AIULHINFIMSPIHAEIII和RSAL五種內(nèi)切酶分別對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行酶切鑒定。結(jié)果表明，五種酶的任何一種都能區(qū)分松材線蟲和擬松材線蟲，而內(nèi)切酶HAEIILRSAL還能準(zhǔn)確區(qū)分亞洲型和歐洲型的擬松材線蟲群體。此外，本文還利用6種不同的隨機(jī)引物，通過(guò)RAPDRANDOMAMPLIFIEDPOLYMORPHICDNA技術(shù)對(duì)松材線蟲和擬松材線蟲的基因組DNA進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增，以探討區(qū)分種間及種內(nèi)群體的親緣關(guān)系的簡(jiǎn)便方法，結(jié)果顯示利用OPB07和OPX01為隨機(jī)引物，RAPD法可以明顯區(qū)分松材線蟲和擬松材線蟲并與形態(tài)學(xué)分類結(jié)果相吻合以O(shè)PY01為隨機(jī)引物擴(kuò)增后進(jìn)行聚類分析的結(jié)果也表明，線蟲種內(nèi)和種間均存在差異，同種線蟲在同一地區(qū)或臨近地區(qū)的同源性明顯高于其它地區(qū)，而同一地區(qū)內(nèi)寄主對(duì)線蟲同源性的影響較小。另外，系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的研究結(jié)果顯示出我國(guó)松材線蟲和北美松材線蟲群體有較高的同源性，表明我國(guó)部分地區(qū)的松材線蟲可能來(lái)源于北美大陸。關(guān)鍵詞松材線蟲擬松材線蟲ITSRFLPRAPD第一部分綜述一松材線蟲概述P1松樹(shù)萎蔫病是20世紀(jì)發(fā)生的林業(yè)上的毀滅性病害，具有易傳播，發(fā)病速度快，難以防治等特點(diǎn)，被稱為“沒(méi)有硝煙的大火’，。到目前為止其病因基本確認(rèn)為是由于松材線蟲BURSAPHELENCHUSXYLOPHILUSSTEINER陰門開(kāi)口于蟲體中后部約75處。上覆以陰門蓋。后子宮囊長(zhǎng)190PM，約為陰肛距的34雌蟲尾亞圓錐形，末端寬圓，少數(shù)有微小的尾尖突。雄蟲交合刺大，弓狀，成對(duì)，嚎突顯著，交合刺遠(yuǎn)端膨大如盤。雄蟲尾似鳥爪，向腹面彎曲，尾端為小的卵狀交合傘包裹，退化的交合傘在光學(xué)顯微鏡下不易看見(jiàn)，交合傘尾翼是尾的角質(zhì)膜的延伸，在尾端呈鏟狀，由于邊緣向內(nèi)卷曲，從背面觀呈卵形，從側(cè)面觀呈尖圓形。病材中的幼蟲蟲體前部和成蟲相似，但其后部則因腸內(nèi)積聚大量顆粒狀內(nèi)含物，以至于呈暗色并且結(jié)構(gòu)模糊，幼蟲尾亞圓錐形。

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)博士學(xué)位論文家蠶繭質(zhì)性狀DNA標(biāo)記的分子生物學(xué)研究姓名SATEESHKUMAR申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師徐孟奎200241標(biāo)記等研究的現(xiàn)代生物學(xué)工具BACKMEN＆SOLLARL983BARRETA11988。從遺傳本質(zhì)上理解蠶繭和繭絲的經(jīng)濟(jì)性狀或家蠶生命周期的特點(diǎn)對(duì)蠶絲產(chǎn)業(yè)是非常有意義的。在家蠶分子生物學(xué)方面所做的研究還很有限，但各種現(xiàn)代分子工具的發(fā)展開(kāi)闊了這個(gè)研究領(lǐng)域，將有更多有意義的研究可做，而要利用這些現(xiàn)代分子工具首先要得到合適的DNA標(biāo)記。除了果蠅之外，馴化的家蠶是遺傳學(xué)研究最多的昆蟲之一，已有200多種基因突變?cè)谶B鎖圖上定位，并且作為遺傳資源而被保存DOIRA，1992。最早建立的家蠶分子連鎖圖是運(yùn)用了RFLP技術(shù)SHIETAL1995。PROMBOON等在1995年用RAPDS技術(shù)建立了另一個(gè)平行的分子連鎖圖，總計(jì)圖距為900CM。目前，一個(gè)高密度的連鎖圖在家蠶中被建立起來(lái)，這個(gè)圖譜包括了1018基因標(biāo)記，包括了所有27個(gè)常染色體和Z染色體，分布在約2000CM上的絕大部分標(biāo)記是用140個(gè)十個(gè)核苷酸序列的商品引物進(jìn)行多態(tài)性DNA隨機(jī)擴(kuò)增獲得，這些分子標(biāo)記之間的平均間隔約為2CM，約等于500KB。這個(gè)連鎖基因圖是第一個(gè)具有染色體數(shù)量多N28并覆蓋所有染色體而沒(méi)有空缺的昆蟲基因連鎖圖。在許多國(guó)家保存的家蠶遺傳資源有待適當(dāng)?shù)拈_(kāi)發(fā)以培育優(yōu)良的蠶品種使之能適應(yīng)不同國(guó)家的農(nóng)業(yè)生態(tài)氣候條件，如印度。主要是沒(méi)有有效的方法來(lái)揭示家蠶有用遺傳變異性的本質(zhì)。分子標(biāo)記被認(rèn)為能夠清晰的評(píng)估出群體中非環(huán)境引起的遺傳變異，因?yàn)樗?dú)立于不確定的環(huán)境效應(yīng)。運(yùn)用建立在RAPD技術(shù)基礎(chǔ)上和根據(jù)金環(huán)蛇小衛(wèi)星DNABKM28探針的DNA指紋分析，在DNA水平上成功的區(qū)分了不同家蠶的基因型NAGARAJUETA1。HWANGJAESAM等用RAPD技術(shù)建立了家蠶原種和一代雜交種之間的遺傳關(guān)系。他對(duì)韓國(guó)的20個(gè)通過(guò)審定的原種之間的遺傳關(guān)系用RAPDSPCR技術(shù)進(jìn)行了評(píng)價(jià)。用26個(gè)不同的含10個(gè)低聚核苷酸的引物進(jìn)行篩選遺傳性狀，有24個(gè)引物在這些品種中形成條帶多態(tài)性，根據(jù)這些RAPD圖譜，用UPGMA方法分析這些品種之間的遺傳關(guān)系。家蠶W染色體上的隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA的核苷酸序列已經(jīng)被測(cè)定。218個(gè)隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA的序列也已被測(cè)定。它包括815個(gè)基礎(chǔ)堿基對(duì)，不含有長(zhǎng)的開(kāi)放式閱讀框。根據(jù)計(jì)算機(jī)分析發(fā)現(xiàn)這個(gè)序列和家蠶中已經(jīng)報(bào)道的另外四個(gè)序列有部分的同源性ABEH；SHIMADATETA1。關(guān)于家蠶Y、N1L基因和，Z染色體的RAPD標(biāo)記研究，發(fā)現(xiàn)有獨(dú)特的RAPD標(biāo)記OZ。XIAQINGYOU，吖本研究的目的是通過(guò)RFLP和RAPD技術(shù)輕松鑒別家蠶品種遺傳性狀。本研究的供試材料是在浙江大學(xué)和印度MYSORE中央蠶業(yè)研究所CSRTI保存的

簡(jiǎn)介：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文湖北省玉米粗縮病病原分子生物學(xué)鑒定及玉米抗感病性研究姓名燕永亮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)植物病理學(xué)指導(dǎo)教師侯明生于嘉林200251ABSTRACTMAIZEISONEOFTHEMAINCROPSINCHINA，ANDISALSOTHEIMPORTANTSUSCEPFIDEMATERIALFORFORAGE，LIGHTINDUSTRYANDMEDICINENOTONLYTHETOTALPLANTATIONAREABUTALSOTHEYIELDAREALLINTHETHIRDPLACE，ONLYBELOWTHATOFRICEANDWHEATINRECENTYEARS，WITHTHECHANGEOFTHECULTIVATEHABBITTHEPLANTATIONARCABECOMEBIGERANDBIGERANDTHESPECIESCHANGINGFIEQUENTLYOWINGTOTHEFARMERSIMPLYSEEKHIGHYIELDANDPLANTSENSITIVEMAIZESPEIEES，THUSCAUSEASERIESOFDISEASESBECOMEHIGHERTHANEVERWHILE，THEDISEASESNEVERHAPPENEORSELDOMHAPPENBEFOREONEOFTHESEEXAMPLESISTHEMAIZEROUGHDWARFDISEASEIT’SREPORTEDTHATTHEPATHOGENYCAUSEDTHEDISEASEISMRDVANDWHICHBELONGSTOTHEREOVIRIDAEFIJIVIRUSTHEVIRUSISSOSIMILAR誦也ANOTHER丘JIVIRUSRBSDVINBIOLOGIEALANDIMMANITICALCHARACTERTHATMANYSPECIALISTSREGARDTHESETWOVIRUSESASONETHROUGHANALYZINGTHENUCLEOTIDESSEQUENCEOFTHESEVIRUSES，WECANCLASSFYTHEMCORRECTLYONEISOLATEOFTHEPATHOGENYFROMHUBEIWASANALYZEDATTHEMOLECULARLEVELTHEGENOMICRNAELEETROPHORETICPROFILESSHOWEDTHEGENOMECOMPOSED10DSRNASEGMENTSSELECTTHES7，CLONETHEEDNABYRTPCRAMPLICATION，ANDTHENSEQUENCETHECLONEWHICHHASREGISTEDINTHEGENBANKANDTHENUMBERAF397874THERESULTOFTHESEQUENCEANALYSISDEMONSTRATEDTHATTHEGANOMEOFHUBEIISOLATEHASTHEHOMOLOGY、訪TLLMRDVIANDRBSDVJFOR853％AND937％ALSOTHETWOORFSINTHISSEQUENCEHASTHEHOMOLOGYWITHTHATOFMRDVIANDRBSDVJFORORFL，908％AND98％；ORF2，854％AND957％THERESNLTINDICATEDTHATTHEVIRUSWHICHCAUSETHISMAIZEDISEASEINHUBEIISRICEBLACKSTREAKEDROUGHVIRUSBASINGONTHESTUDYATMOLECULARLEVEL，WEALSOIDENTIFIEDTHERESISTENCEANDSENSITIVETOTHEDISEASEWITH64MAIZESPECIESINFIELDINTIANMENANDHANCHUANWHERETHEDISEASEWASVERYHEAVYFORSEVERALYEARSTHESEMAIZESPECIESWERECOLLECTEDFORMLIAONINGBEIJING，SICHUANANDSHANDONGPROVINCESTHERESULTSHOWSTHATTHEREARE21SPEIEESHAVE1LIGHRESISTENEETOTHEDISEASE，2SPEICESHAVEHIGHSENSITIVETOTHEDISEASE，THEOTHERSAREINTHEMIDDLEINASENSE，THERESULTISVERYIMPORTANTBECAUSEITMAYHELPTHEFARMERTOSELECTTHESUITABLESEEDKEYWORDSRICEBLACKSTREAKEDDWARFVIRUSMAIZEROUGHDWARFDISEASEEDNACLONINGSEQUENCEANALYSIS2

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)博士學(xué)位論文CPPU誘導(dǎo)瓠瓜單性結(jié)實(shí)生理和分子生物學(xué)機(jī)制研究姓名李英申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)蔬菜學(xué)指導(dǎo)教師喻景權(quán)朱祝軍200241株光合作用增強(qiáng)，且CPPU處理株光合作用的增加更為顯著。這可能與CPPU處理后庫(kù)強(qiáng)的增強(qiáng)有關(guān)。4未授粉果和授粉果中的IAA和TZEATIN濃度在花后9D內(nèi)均呈上升趨勢(shì)，而在CPPU誘導(dǎo)的單性結(jié)實(shí)果中IAA濃度則呈明顯的下降趨勢(shì)，其濃度明顯低于未授粉果和授粉果實(shí)中的濃度，TZEATIN濃度則在花后3天達(dá)到最大值隨后快速下降。5NAA和GA3處理未經(jīng)授粉的瓠瓜子房不能顯著促進(jìn)其細(xì)胞分裂和膨大而不能產(chǎn)生單性結(jié)實(shí)果，而CPPU處理未經(jīng)授粉的瓠瓜子房則使其細(xì)胞數(shù)目和大小以及單果重都顯著高于未授粉和人工授粉果。6測(cè)定了瓠瓜果實(shí)組織中的兩條D一型周期蛋白同源基因的CDNA全長(zhǎng)序列。經(jīng)序列的同源性及系統(tǒng)發(fā)生分析比較，它們均屬D3周期蛋白基因，且分別命名為L(zhǎng)AGLE；CYCD3；1和LAGLE；CYCD3；2。其推測(cè)的氨基酸序列都含有一個(gè)RETINOBLASTOMABINDINGMOTIF和PESTDESTRUCTIONMOTIF。授粉受精后，LAGLE；CYCD3；12轉(zhuǎn)錄水平增加。CPPU處理也使其轉(zhuǎn)錄水平增加且作用效果更為迅速顯著。7測(cè)定了瓠瓜果實(shí)組織中的一條酸性轉(zhuǎn)化酶基因的CDNA全長(zhǎng)序列，長(zhǎng)2164BP，含1992BP的編碼框，編碼663個(gè)氨基酸。經(jīng)序列的同源性及系統(tǒng)發(fā)生分析比較，該酸性轉(zhuǎn)化酶基因?qū)儆谝号菪退嵝赞D(zhuǎn)化酶，并命名為L(zhǎng)IAL。CPPU處理或授粉受精都促進(jìn)了酸性轉(zhuǎn)化酶的轉(zhuǎn)錄水平和酶活性。關(guān)鍵詞CPPU，瓠瓜，單性結(jié)實(shí)，座果率，果實(shí)發(fā)育，細(xì)胞分裂，內(nèi)源激素，源庫(kù)關(guān)系，光合作用，14C小乜物，C02加富，酸性轉(zhuǎn)化酶，C≯CD3

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)博士學(xué)位論文二化螟中腸BT毒蛋白CRYLAB受體基因的分子生物學(xué)研究姓名吳志平申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)生物物理學(xué)指導(dǎo)教師陳子元徐步進(jìn)2002101機(jī)溶劑的濃度超過(guò)某一閩值后熒光發(fā)射波長(zhǎng)不再藍(lán)移；丙酮能完全猝滅毒蛋白CRYTAB的熒光，丙烯酰胺能猝滅CRYLAB86％的熒光而KI對(duì)毒蛋白無(wú)猝滅作用，由此推斷CRYLAB的大部分色氨酸殘基位于分子表面富含負(fù)電荷的區(qū)域中；CRYLAB在所研究的四種不同的緩沖溶液中，殺蟲毒性相似。3二化螟中腸CRYLAB受體蛋白的鑒定、受體基因的克隆及其核苷酸序列特征二化螟中腸蛋白質(zhì)提取物，經(jīng)SDSPAGE75％電泳后電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，然后用125I放射性標(biāo)記的CRYLAB蛋白為探針進(jìn)行WESTERN結(jié)合實(shí)驗(yàn)，證實(shí)二化螟中腸存在一種分子量約為195KDA的特異性結(jié)合蛋白。根據(jù)已克隆到的BT受體蛋白BTR1及BTR175保守區(qū)域的氨基酸序列設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，用分子生物學(xué)方法克隆到一個(gè)全長(zhǎng)為5551BP的CDNA序列，其ORF編碼一個(gè)由1715個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的蛋白。將該基因命名為BTR3，對(duì)其核苷酸序列特征進(jìn)行了分析。4BT受體基因BTR3在桿狀病毒一昆蟲系統(tǒng)中的表達(dá)利用桿狀病毒一昆蟲BACTOBAC系統(tǒng)表達(dá)了BTR3基因的胞外結(jié)構(gòu)片段，并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了WESTERNBLOT結(jié)合實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明表達(dá)產(chǎn)物能有效地結(jié)合BT毒蛋白CRYLAB，從而證明BTR3確實(shí)是CRYLAB的受體基因；它們的結(jié)合部位位于BTR3蛋白的胞外結(jié)構(gòu)域中。S二化螟中腸M受體基因BTR3蛋白序列的生物信息學(xué)分析將BTR3蛋白氨基酸序列用BLAST軟件對(duì)G髓BANK／DDBJ厄MBL、SWISSPROT、PIR、PDB等數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行同源性搜索，用有關(guān)生物信息學(xué)軟件分析了所得同源性蛋白質(zhì)序列，得到了BTR3蛋白的結(jié)構(gòu)特性、系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，分析了其可能的生物功能；用多重聯(lián)配法分析了該蛋白的保守區(qū)域及有關(guān)功能結(jié)合位點(diǎn)的特性。BTR3受體蛋白是鈣粘蛋白超級(jí)家族中的～員，BTR3基因表達(dá)的前體膜蛋白中含一由21氨基酸殘基構(gòu)成的信號(hào)肽其成熟蛋白胞外區(qū)域由9個(gè)類似于鈣粘蛋白重復(fù)單元EC及一近膜結(jié)構(gòu)MPR組成，BT毒蛋白特異性結(jié)合序列位于EC5結(jié)構(gòu)域中，每2個(gè)重復(fù)單元的交界處總會(huì)出現(xiàn)12個(gè)PRO殘基；近膜結(jié)構(gòu)下游有一由22個(gè)氨基酸殘基組成的跨膜結(jié)構(gòu)域，成熟蛋白共有6個(gè)潛在的N_糖基化位點(diǎn)。BTR3受體是一個(gè)較強(qiáng)的酸性蛋白，和BTR175親緣性最近；已克隆到的四種BT受體及舞毒蛾LYMANTRIADISPAR相關(guān)蛋白構(gòu)成

簡(jiǎn)介：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文盾殼霉真菌病毒（CMRV）基因組的分子生物學(xué)特性研究姓名程家森申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)植物病理學(xué)指導(dǎo)教師姜道宏20030501華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2003屆碩士學(xué)位論文MOLECULARCHARACTERIZATIONOFADSRNATOTIRIVUSINFECTINGTHESCLEROTIALPARASITECONIOTHYRIUMMINITANSABSTRACTCONIOTHYRIUMMINITANS，ANIMPORTANTSCLEROTIALMYCOPARASITEOFSCLERO“NIASCLEROTIORUMWITHWORLDWIDEDISTRIBUTIONHASGREATPOTENTIALFORBIOLOGICALCONTROLOFPLANTDISEASESCAUSEDBYSSCLEROTIORUMANDOTHERSCLEROHNIASPPTHECOMPLETENUELEOTIDESEQUENCE，4975BP，OFTHEDOUBLESTRANDEDRNADSRNAMYCOVIRUSINFECTINGTHESELEROTIALPARASITECONIOTHYRIUMMINITANSCMRVWASDETERMINEDSEQUENOEANALYSISREVEALEDTHEOCCURRENCEOFTWOOVERLAPPINGOPENREADINGFRAMESORFSTHE5’PROXIMALLARGEORFOVWL；NUCLEOTIDEPOSITIONS622389ENCODESAPUTATIVECOATPROTEINCPWITHAPREDICTEDMOLECULARMASSOF80344DA，ANDTHE3’一PROXIMALORFORF2，NUCLEOTIDEPOSITIONS23864875ENCODESAPUTATIVERNADEPENDENTRNAPOLYMERASERDRPWITHAPREDICTEDMOLECULARMASSOF82551DATHETETRANUCLEOTIDEAUGAATNUCLEOTIDEPOSITIONS23862389INCLUDESTHEPREDICTEDSTARTCODONOFORF2，WHICHOVERLAPSWITHTHESTOPEODONFOROKFL，BASEDONGENOMEORGANIZATIONANDSEQUENCEANALYSISENCODEDPROTEINS，THEVIRUSINFECTINGCMINITANSSTRAINCHYL，DESIGNATEDCMINITANSRNAVIRUSCN餓V，BELONGSTOTHEFAMILYTOTIVIRIDAEPAIRWISESEQUENCECOMPARISONSOFTHEDEDUCEDAMINOACIDSEQUENCESENCODEDBYCMRVASWELLASPHYLOGENTICANALYSISINDICATEDTHATITISMORECLOSELYRELATEDTOTHETOTIVIRUSESTHATINFECTFILAMENTOUSFUNGITHANTOTHOSEINFECTINGPROTOZOA，YEASTANDSMUTFUNGITOTESTTHESTABILITYOFC刪INCMINITANS100SINGLECONIDIUMISOLATIONCULTURESWEREOBTAINEDANDOBSERVEDFORDEVELOPMENTOFCOLONYMORPHOLOGYALLOFTHE100CULTURESHADASIMILARCOLONYMORPHOLOGYCOMPAREDTOTHEORIGINALSTRAINCHYI，AMONGTHEM32CULTURESRANDOMLYSELECTEDWEREPROVEDTOCALTYDSRNAGENOMEOFCMRVSPORESOFCHY1WEREBURIEDINTOFIELDSOILFORTWOMONTHS。AND8CULTURESWERERECOVEREDFROMSOILWITHSCLEROTIALBAITINGALLTHE8CULTURESHADTHESAMEPHENOTYPEOFCHYL，ANDVIRALDSRNAWASEXTRACTEDFROMALLTHE8CULTURESNORTHEMBLOTTINGSSHOWEDTHATALLTHEVIRAIDSRNAOFTHE8CULTURESWERETHEVIRALGENOMEOFCMRVTHESERESULTSSUGGESTEDTHATCMRVINEMINILAMWASSTABLETWENTYEIGHTCMINITANSARAINSINCLUDING5FROMUNITEDKINGDOMAND3WTREATEDCHY一1WEREUSEDTOCHECKTHEDSRNAOFMYCOVIRUS，AMONGTHEM12STRAINSWEREPROVEDINFECTEDBYMYCOVIRUSNORTHERNBLOTTINGANALYSISREVEALEDTHATTHEVIRALDSRNAINALLTHESETENSTRAINSCOULDBEHYBRIDIZEDWITHTHEPROBEMADEFROMACDNACLONEDERIVEDFROMCMRVDSRNASUGGESTINGTHATTHOSEVIRUSESMIGHTBEINTHESAMEGROUPFSPECIESITINFERREDTHATVIRUSINCMINITANSMIGHTBEVERYCOMMONKEYWORDSCONIOTHYRIUMMINITANS，DSRNAELEMENT，CMRVMYCOVIRUS，TOTIVIRUS2

簡(jiǎn)介：廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文傳染性法氏囊病病毒的分子生物學(xué)快速鑒別診斷技術(shù)的研究姓名龍進(jìn)學(xué)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師韋平李康然200351震P大警2003屆碩士學(xué)位論文義的兩種限制性內(nèi)切酶SACI和SSPI建立的REA，對(duì)5株屬于CLBDV的疫苗株和6株標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株；屬于VVLBDV的毒株GXL0、YLL、YL2和YLZ等分離毒；屬于VLBDV的美國(guó)變異E株進(jìn)行酶切分析，結(jié)果與前人的研究相符。另外，針對(duì)不同強(qiáng)弱毒株的IBDV的VP2高變區(qū)序列的差異設(shè)計(jì)合成了VVLBDV的型特異性引物VVLBDAVVIBDS，建立型特異的RTPCR，只需一次反應(yīng)即可區(qū)分CLBDV和VVLBDV。第三，應(yīng)用本研究建立的REA和VVLBDV型特異性RTPCR技術(shù)，對(duì)34份采自廣西不同地區(qū)的IBDV病料，其中PCR反應(yīng)陽(yáng)性的23份的PCR產(chǎn)物，進(jìn)行酶切分型和特異性引物擴(kuò)增。結(jié)果發(fā)現(xiàn)1993年至2003年的病料或分離的毒株中，有8株確定為VVIBDV，13株確定為CLBDV，另外，有兩株不能確定。關(guān)鍵詞IBDV，‘RTPCR／NESTEDPCR快速診斷病毒分離限制性酶切分析型特異性引物

簡(jiǎn)介：揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文犬細(xì)小病毒VP2基因的分子生物學(xué)特性的研究姓名楊玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師劉秀梵張如寬20020401ABSTRACTAPAIROFPRIMERSWEREDESIGNEDANDSYNTHESIZEDBASEDONVP2GENEOFCPVFROMGENEBANKTHEGENOMICDNASAMPLESOFCANINEPARVOVIRUSSTRAINISOLATEDINYANGZL30UWEREEXTRACTEDANDUSEDASTEMPLATESFORPOLYMERASECHAINREACTIONPCRTOAMPLIFYTHEVP2GENETHESPECIFIC1740BPBANDWASAMPLIFEDANDCLONEDINTOPUCL8VECTORATTHERESTRICTIONENDONUCLEASEECORIANDSALISITESTHERECOMBINANTPALSMIDSWEREIDENTIFIEDBYRESTRICTIONENDONUELEASEANALYSISTHEEXOGENOUSINSERTOFRECOMBINANTPLASMIDWASFURTHERCONFIRMEDBYSEQUENCEANALYSISAFTERSEQUENCING，VV2GENEOFYANGZHOUISOLATIONWASCOMPAREDWITHTHATOFAMERICANREFERENCESTRAINSCPVDTYPE2，CPV15TYPE2A，CPV39TYPE2BTHERESULTSSHOWED995％，997％997％HOMOLOGYAMONGTHESEDIFFERENTSTRAINSVP2FRAGMENTSFIROMCPVYANGZHOUSTRAINWEREAMPLIFIEDWITHANOTHERTWOPAIRSOFPRIMERSPCRFRAGMENTSWERECLONEDTOTHEDOWNSTREAMOFGSTGENEACCORDINGTOTHEFIGHTOPENREADINGFRAMEINPGEX6P1VECTORAFTERINDUCINGWITH10MMIPTGAND37。CTHEINSERTSWEREEXPRESSEDASTWOFUSIONPROTEINSCONTAININGTHEGSTPROTEINACCORDINGTOSDSPAGEANALYSISTWOGSTVP2FUSIONPROTEINSWEREFOUNDAS54KDAND61KDBANDSRESPECTIVELYTHEEXPRESSEDPRODUCTSⅥ啪EXTRACTEDFROMTHEGELANDADDED髂IMMUNOGENTOIMMUNIZEMICEINTRAPEDTONEALLY5DOSESWITHONEWEEKINTERVALSTHESPECIFICITYOFANTIBODYW觴DETECTEDPOSITIVELYAGAINSTCPVINFECTEDFK81CELLINTHEINDIRECTINAMUNOFLUORESCENTASSAYIFATHERESULTSOFTHESTUDYSHOWEDTHATTHEINVITROEXPRESSEDPRODUCTSOFVP2GENEMAINTAINEDTHENAIVEANTIGENICITYOFCPVTHESEQUENCEANALYSISOFVP2GENEWILLCONTRIBUTETOTHESTUDYOFANTIGENICDRIFT，ANDTHEFUSIONPROTEINSWILLBEUSEFULFORTHEGENERATIONOFSPECIFICMONOCLONALANTIBODIESANDRECOMBINANTVACCINESKEYWORDSCANINEPARVOVIRNS；POLYMERASECHAINREACTION；VP2GENE；SEQUENCEANALYSIS；HOMOLOGY；EXPRESSION；INDIRECTIMMUNOFLUORESCENTASSAY

簡(jiǎn)介：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文鴨對(duì)體吸蟲形態(tài)、生物學(xué)、致病性及分子遺傳學(xué)研究姓名楊光友申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師郭萬(wàn)柱20030501性螺作遮光處理和晚上進(jìn)行人工光照對(duì)尾蚴從陽(yáng)性螺體內(nèi)的逸出沒(méi)有明顯的影響。將鴨對(duì)體吸蟲尾蚴放在4℃條件下，尾蚴漸停止活動(dòng)并沉入試管底部但當(dāng)水溫升高時(shí)又可活動(dòng)起來(lái)，24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后尾蚴的存活率分別為83．72％、68．62％、53．66％，120小時(shí)后尾蚴仍有25．93％的存活率。在自然變溫2326。C條件下，24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后尾蚴的存活率分別為88．57％、82．22％及57．89％，至96小時(shí)仍有LO．42％的存活率。而在恒溫30℃時(shí)，尾蚴在12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)后的存活率分別為89．47％、47．27％及13．33％。鴨對(duì)體吸蟲尾蚴在PH值為4、LO、12的環(huán)境條件F10分鐘后尾蚴全部死亡；在PS值為8的水體中，6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)后尾蚴的存活率分別為69．76％、48．00％、31．92％在PH值為6．5的水體中，24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后尾蚴的存活率分別為86．21％、52．78％、12．50％，96小時(shí)后尾蚴全部死亡；而在PH值為7．2的水體中，48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)后尾蚴的存活率分別為51．28％、37．50％及25．00％，至120小時(shí)后尾蚴全部死亡。鴨對(duì)體吸蟲尾蚴感染魚后在魚體的頭部、軀干背部、軀干腹部及尾部均查到囊蚴，其中以軀干背部寄生的囊蚴最多占44．14％，軀干腹部次之占29．42％13雷蚴、尾蚴及不同日齡蟲體的體被超徽結(jié)構(gòu)雷蚴鴨對(duì)體吸蟲的成熟雷蚴呈長(zhǎng)囊袋狀，內(nèi)含多個(gè)大小不等的胚細(xì)胞團(tuán)?？诔蕡A形位于蟲體頭部的頂端，口孔周圍未見(jiàn)有乳突分布。雷蚴缺乏圍領(lǐng)及附肢狀運(yùn)動(dòng)器或稱肌肉足、足突。在雷蚴的前1／5部，可見(jiàn)散在分布的圓丘型乳突。在低倍2000X下觀察，雷蚴的體表呈縱行或斜行的條索狀，在中、高倍5000．10000X下觀察時(shí)雷蚴的整個(gè)體表為絨毛樣構(gòu)造，其中以中部及后部最為發(fā)達(dá)。在雷蚴的中部及后部體表上亦可見(jiàn)少量散在分布的微孔。鴨對(duì)體吸蟲雷蚴體表絨毛樣構(gòu)造可能也與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收有關(guān)。本次觀察12條鴨對(duì)體吸蟲的成熟雷蚴，均未觀察到產(chǎn)孔，這可能與產(chǎn)孔在尾蚴未逸出時(shí)處于緊閉狀態(tài)有關(guān)。尾蚴鴨對(duì)體吸蟲尾蚴呈蝌蚪狀，尾蚴由體部和尾部組成?？谖P呈圓形或類圓形，位于蟲體前端，口吸盤唇部不光滑，其上著生有短而基部較粗的尖刀形棘，棘的尖端指向口孔的外側(cè)。IZL吸盤的唇部及口孔內(nèi)壁上未見(jiàn)有乳突分布。在口吸盤的背部?jī)蓚?cè)可見(jiàn)穿刺腺的開(kāi)口，腺管開(kāi)IZL的排列方式為“3443”。腹吸盤較小，呈圓形或類圓形，腹吸盤上不規(guī)則地分布有尖刀形的小棘。尾蚴由皮層隆起的橫行嵴所環(huán)繞，嵴上覆蓋有呈圓形或不正形的結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)上可見(jiàn)點(diǎn)狀小突起。尾蚴體部背面的前部著生有2

簡(jiǎn)介：華南理工大學(xué)碩士學(xué)位論文致病弧菌溶血素基因分子生物學(xué)原位檢測(cè)方法的研究姓名吳彩云申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生物化工指導(dǎo)教師楊汝德20030501華南理工大學(xué)工學(xué)碩士學(xué)譴論文瞧的攫楚。援羚，渡法在浚露瘓警蒡鞋微生物生態(tài)學(xué)方瑟靛磷究一乏患是蠢重要熟學(xué)術(shù)蠢義。關(guān)鍵鑭基透零平轉(zhuǎn)移；蔽搜聚合酶縫式艇寢；熒光菝豫雜交；滾式綱疆紋Ⅱ

簡(jiǎn)介：漸；工大學(xué)博士論文摘要以浙江省的水稻黑條矮縮病、河北省的小麥綠矮病和湖北省的玉米粗縮病的病毒分離物為材料，對(duì)我國(guó)3個(gè)病毒分離物進(jìn)行了系列比較研究A3個(gè)病毒分離物粒子大小形態(tài)相似，且在血清學(xué)上密切相關(guān)；三者的介體、寄主相同，并引起相同的癥狀。提純3個(gè)病毒分離物的基因組片段，凝膠電泳顯示它們相應(yīng)的基因組片段之間大小極其相似，推測(cè)3個(gè)病毒分離物可能是同一種病毒。然后根據(jù)水稻黑條矮縮病毒RICEBLACKSTREAKED咖口礦VIRUS，RBSDV日本分離物的S10設(shè)計(jì)一對(duì)引物，利用RTPCR技術(shù)，以3個(gè)中國(guó)分離物基因組片段S10為模板，均特異擴(kuò)增到預(yù)期大小的片段?？寺?個(gè)中國(guó)分離物基因組片段S10并測(cè)定其全序列，比較分析發(fā)現(xiàn)3個(gè)中國(guó)分離物基因組片段S10相應(yīng)部分之間的核苷酸同源性為979％～989％，和日本RBSDV分離物基因組片段S10的相應(yīng)部分核苷酸同源性為928％一931％，和意大利的玉米粗縮病毒MAIZEROUGHAW口RFV／RUS，MRDV基因組片段SIO相應(yīng)部分的核苷酸同源性分別為876％～883％，因此，3個(gè)中國(guó)分離物都應(yīng)該是RBSDV，而不是MRDV也就是說(shuō)中國(guó)不同地區(qū)發(fā)生的水稻黑條矮縮病、玉米粗縮病和小麥綠矮病都是由RBSDV引起的。緊接著在克隆基因組片段S10中間部分序列的基礎(chǔ)上，采取了一種基于RTPCR技術(shù)的簡(jiǎn)便方法克隆了河北分離物基因組片段S7～S10、浙江分離物的S7～S10以及湖北分離物的S9～S10，并測(cè)定了它們的全序列FEMBL／DDBJ。＼／GENBANK數(shù)據(jù)庫(kù)的登錄號(hào)分別為AJ297427RBSDVZJS7、A3297431RBSDVZJS8、AJ297430RBSDVZJS9、AJ297433RBSDVZJS10、A3297428ITBSDVHEBS7、AJ297432RBSDVHEBS8、A3297429RBSDVHEBS9、A3297434RBSDVHEBS10、AJ291706RBSDVHUBS9、A3291707RBSDVHUBS10。3個(gè)中國(guó)RBSDV之間的同源性最高核苷酸同源性940％99O％，氨基酸同源性963％～100％，與RBSDVJAD的同源性次之核苷酸同源性90O％～949％，氨基酸同源性911％～986％，與意大利MRDV的同源性較低核苷酸同源性851％～881％，氨基酸同源性855％943％。進(jìn)一步明確了在中國(guó)發(fā)生的小麥綠矮病、玉米粗縮病、水稻黑浙江大學(xué)博士淪文ABSTRACTTHREEISOLATESOFPLANTREOVIMSESCAUSINGSEVERESTUNTINGANDDARKLEAFSYMPTOMSOILWHEATINHEBEIPROVINCE，ONRICEINZHEJIANGPROVINCEANDONMAIZEINHUBEI，CHINA，HAVEBEENCHARACTERIZEDTHE、IRUSPARTICLESOFTHREEISOLATESWEREABOUT60RIMINDIAMETERANDCLOSELYRELATEDSEROLOGICALLYTHEIRDSRNAELECTROPHORETICPROFILESINAGAROSEGELWERESIMILARTHE3、、EREBOTHTRANSMITTEDEFFICIENTLYBYTHEPLANTHOPPERLAODELPHAXSTRIATELLUSTOMAIZEANDRICEFROMTHEIRORIGINALHOSTSBUTMAIZEWASNOTAVERYSUITABLEHOSTFORTHEVECTORANDⅥ’ASAPOORSOURCEOFVIRUSTHEFRAGMENTSCORRESPONDINGTOGENOMESEGMENTS10OFRICEBLACKSTREAKED咖萬(wàn)V批RBSDVWEREAMPLIFIEDBYRTPCRFROMTHREECHINESEISOLATESANDSEQUENCEDTHEREWERE979％一989％IDENTICALNUCLEOTIDESBETWEENTHETHREECHINESEISOLATESWHICHAPPEARTOBERBSDV92_8％。931％IDENTICALNUCLEOTIDESTOJAPANESEISOLATERATHERTHANMAIZEROUGHDWARFVIRUSMRD＼7876％。883％IDENTICALNUCLEOTIDESTOITALIANISOLATETHEREFORE，ALLTHREECHINESEISOLATESSHOULDBECLASSIFIEDASRBSDVTHATIS，THEDWARFDISEASEONMAIZE，WHEAT，RICEINDIFFERENTREGIONINCHINAISCAUSEDBYRBSDVAFTERTHEINTERNALREGIONOFGENOMESEGMENTSS10OFTHREECHINESEISOLATESWASDETERMINED，GENOMESEGMENTSS7’SIOOFRBSDVZJ，S7一S10OFRBSDVHEB，ANDS9～S10OFRBSDVHUBHADBEENCLONEDANDSEQUENCEDUSINGASETOFSTRATEGYBASEDONTHERTPCRTHECOMPLETENUCLEOTIDESEQUENCESOFEACHGENOMESEGMENTWEREASSEMBLEDANDDEPOSITEDINTHEGENBANK／EMBL／DDBJDATABASESTHEACCESSIONNUMBERSAREAJ297427RBSDVZJS7，AJ297431RBSDVZJSS，AJ297430RBSDVZJS9，AJ297433BSDVZJS1O，AJ297428RBSDVHEBS7，AJ297432RBSDVHEBSS，AJ297429RBSDVHEBS9，AJ297434RBSDVHEBS10，AJ291706RBSDVHUBS9，AJ291707RBSDVHUBS10，RESPECTIVELYGENOMESEGMENTOFTHREECHINESEISOLATESSHARED94O％～99O％AND963％一100％HOMOLOGYATLEVELOFNUCLEOTIDEANDAMINOACIDSEQUENCE，RESPECTIVELYTHEYSHARED90O％’949％AND911％’988％HOMOLOGYWITHTHOSEOFRBSDVJAPATLEVELOF3

簡(jiǎn)介：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文利用分子生物學(xué)與細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)小型昆蟲的共生微生物沃爾巴克氏體（WOLBACHIA）姓名張照琳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治指導(dǎo)教師叢斌200361沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)硬士學(xué)位論文攘要沃爾巴克氏體WOLBACHIA是廣泛分布于節(jié)肢動(dòng)物體內(nèi)的～類共生菌，通過(guò)生殖細(xì)胞盼細(xì)胞質(zhì)傳播，參與多種調(diào)控其宿主生糠活動(dòng)的稅鑭，W隧誘導(dǎo)宿主發(fā)生生殖不親和、產(chǎn)雌弧雌生娥、雌性化等現(xiàn)象。研究沃爾巴克氏體對(duì)于了解昆蟲瓣生殖生物學(xué)、住剮決定稅制、物種遴純及天工調(diào)控昆蟲生殖行為方面意義麓大。試驗(yàn)驀在建立沃爾澄克氏侮WOLBACHIA懿PCR技術(shù)襝溺體系，利用這一體系檢測(cè)沃爾巴克氏體在不同分類階元的小型昆墩中的分布；利用細(xì)胞學(xué)技術(shù)麓察沃爾巴克氐俸的努酃形態(tài)。附試驗(yàn)綴采進(jìn)行分拆，德弱戳下結(jié)論1利用三種昆蟲總DNA攝取的方演一SDS法、單個(gè)昆蟲總DNA提取法、CTAB法分裂褥蘩供試琵蟲卷娥券眼蜂TRICHOGRAMMACACOECIAE、食憝赤眼蜂TEMBRYOPHAGUM、玉米蠛赤眼蜂TOSTRINIAE、稻水象甲LISSORHOPTRUSORYZOPHILUSKUSCHE玟瀣室自羧氳TRIALEURODESVAPORARIORUMWESTWOOD、桃蚜MYZUSPERSICAESULZER和煙蚜黻蜂APHIDIUSGIFUENSISASHMEAD的總￡雕A。2三種昆蟲總DNA提取方法的OD比值和DNA濃度P∥P1的結(jié)果如下，SDS法138、066，L，57、14，L。43、06，154、L。2，L。38、0。54，L。56、150；單個(gè)昆煦總DNA提取法195、129，L，79、O75，150、O54，152、0。96，18E、O27，194、105；CTAB法16、ET3；L。9、L。77，L。57、O99，166、228，171、144。雖然三種方法的結(jié)果與研磨稷度、昆搬種類、蟲體大，L、稆個(gè)數(shù)套一定關(guān)系，但綜會(huì)寒說(shuō)，CTAB法在試驗(yàn)成本、聯(lián)提取惑DNA的濃度和質(zhì)量、PCR反應(yīng)的效果和重復(fù)性三方砸優(yōu)于其他兩種方法，怒一種適臺(tái)提毅小型瞧蟲惑DNA的遙熙方法。3建立并驗(yàn)證了沃爾巴克氏體的PCR技術(shù)檢測(cè)體系。PCR反應(yīng)體系的終髂積為209L，含騫TUTAQDNA聚合酶期50～200NG模扳DNA。反應(yīng)程序94。C3MIN94℃LMIN，55℃LMIN，72℃1RAIN，循環(huán)30次_72℃7MIN。4利用沃爾豈克氏體WSP基因的一對(duì)通用弓|物81F，691R，以7葶孛供試?yán)ハx的總DNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。從卷蛾赤眼蜂TCACOECIAP、食胚赤跟蜂TEMBRYOPHAGUM和稻水象甲三ORYZOPHILUS的總DNA中擴(kuò)增到