簡介：白細胞介素1受體拮抗劑INTERLEUKIN1RECEPTANTAGONIST，IL1RA是天然的受體拮抗劑，可與白細胞介素1INTERLEUKIN1，IL1的受體結合但不引起信號轉導，從而競爭性抑制IL1與其受體結合所產生的生物學效應，有效降低IL1表達過多導致的不良反應。本文研究了重組人白細胞介素1受體拮抗劑RECOMBINANTHUMANINTERLEUKIN1RECEPTANTAGONISTRHIL1RA的畢赤酵母工程菌在不同規(guī)模下的表達條件、分離純化工藝以及生物學作用。首先，本文研究了1L搖瓶規(guī)模下不同誘導溫度和PH對RHIL1RA表達量的影響，結果發(fā)現，RHIL1RA在PH為55、誘導溫度28℃條件下表達量達到最高，兩種形式（糖基化和非糖基化）的RHIL1RA表達量分別為12和10MGL。其次，本文在搖瓶條件基礎上對3L發(fā)酵罐規(guī)模下RHIL1RA的最優(yōu)表達條件進行研究，包括起始誘導菌體密度、溶氧、溫度、PH、甲醇濃度和誘導時間。確定的最佳表達條件為起始誘導時發(fā)酵液光密度OD600為600，溶氧為20％，誘導溫度28℃，誘導PH50，誘導時間6D，甲醇濃度025％。在最優(yōu)條件下，糖基化和非糖基化RHIL1RA的表達量分別達到110和90MGL。再次，本文對RHIL1RA的分離純化工藝進行了研究。確定的最優(yōu)工藝為低溫離心→雙水相萃取→超濾→DEAE陰離子交換層析→SP陽離子交換層析等，最終得到純度大于95％，收率分別達到56％、40％的糖基化和非糖基化RHIL1RA。最后，本文利用MTT和HOECHST33258染色分別測定了糖基化和非糖基化RHIL1RA對RHIL1Β促進B16細胞凋亡的拮抗作用。結果表明，兩種形式的RHIL1RA對RHIL1Β均有拮抗作用，且隨著RHIL1RA濃度的升高，對IL1Β的拮抗作用越明顯。綜上，本文研究了RHIL1RA的畢赤酵母工程菌在不同規(guī)模下表達條件優(yōu)化，RHIL1RA的分離純化和生物學作用，并首次研究了糖基化和非糖基化RHIL1RA的生物學作用差異。其中，糖基化和非糖基化RHIL1RA在3L規(guī)模下均得到較高的表達量110和90MGL，建立了糖基化和非糖基化RHIL1RA的分離純化工藝，獲得純度大于95％，收率達到56％的糖基化RHIL1RA，純度大于95％，收率達到40％的非糖基化RHIL1RA對糖基化和非糖基化RHIL1RA的生物學作用測定發(fā)現，兩種RHIL1RA對RHIL1Β促進B16細胞凋亡均有拮抗作用，且糖基化和非糖基化RHIL1RA的生物學作用沒有明顯差異。本文為RHIL1RA的作用機理研究提供了理論支持，并為其產業(yè)化奠定了基礎。

簡介：近年來世界范圍內大氣污染程度加劇，中國大部分地區(qū)大氣污染嚴重。污染氣體中PM25（細顆粒物）的含量對空氣質量起著決定作用，已經引起人們的注意。有關資料表明PM25具有致癌性，而PM25中含碳成分占據主要比例，約40％左右，因此對相關碳基材料的生物安全性研究非常重要。該課題選取三種碳基納米材料進行研究，包括石墨烯片狀結構，D＜500NM、單壁碳納米管（長度10～100ΜM）和多壁碳納米管（長度10～100ΜM）。實驗以雄性SD大鼠為染毒模型，結合透射電子顯微鏡技術、光學顯微鏡技術、同步輻射技術和分子生物學技術主要從形態(tài)學的角度研究經呼吸系統(tǒng)引起的大鼠靶向組織（肺組織、肝組織和腦組織）的損傷效應。取得的主要研究結果如下1、石墨烯、單壁碳納米管和多壁碳納米管各材料低濃度染毒組大鼠組織損傷不顯著，高濃度組有顯著損傷，損傷效應隨材料濃度增大呈現正相關性。隨著染毒濃度的升高，大鼠組織的形態(tài)學損傷加重，在肺組織中發(fā)現部分納米材料顆粒的沉積，腦組織中部分有益微量元素含量減少2、對比各染毒組結果發(fā)現，碳基納米材料對大鼠肺組織、肝組織和腦組織的損傷作用程度呈現逐漸減弱的趨勢，這與實驗由肺通過插管染毒，肺組織為直接暴露對象，以及肝和腦距離肺臟生理位置的不同導致的有關聯(lián)。

簡介：克羅諾桿菌是一種腸桿菌科的食源性致病菌，其感染能夠導致腦膜炎，小腸結腸炎和敗血癥，致死率為50％80％僥幸存活者依然會遭受終生的神經系統(tǒng)后遺癥?？肆_諾桿菌主要感染人群為各個年齡階段的免疫力低下人群，尤其以低體重，出生不足月的新生兒為甚。目前通過流行病學的研究，已經將新生兒感染與被污染的嬰幼兒配方奶粉聯(lián)系起來。因此2004年FAOWHO在日內瓦的一次會議中將克羅諾桿菌和沙門氏菌列為嬰幼兒配方奶粉中存在的兩種A類致病菌。目前我國對于克羅諾桿菌的檢測主要依賴于常規(guī)的生理生化檢測方法，該方法步驟繁瑣，耗費時間長，至少需要5天才能獲得結果。此外，這種檢測方法主要是對克羅諾桿菌屬的檢測，而本屬的菌株在自然界中的分布，致病性和毒力均存在著差異，阪崎克羅諾桿菌是分離出來的菌株中數量最多的，約占本屬的23，并且阪崎克羅諾桿菌CSAKAZAKIIST4在歐洲大陸的爆發(fā)案例中扮演了重要角色。因此有必要發(fā)展快速準確的克羅諾桿菌乃至阪崎克羅諾桿菌檢測方法。本論文中，主要從以下幾個部分對克羅諾桿菌的快速檢測方法進行了研究1抗克羅諾桿菌單鏈抗體SCFVH81的構建及表達提取實驗室保存的雜交瘤細胞RNA，并反轉錄為CDNA，使用通用引物組擴增，并選擇符合大小的序列測序。通過IMGTVQUEST對這些序列進行分析，最終選擇了符合開放閱讀框的H81和L11序列作為構建單鏈抗體的重鏈和輕鏈基因。通過SOEPCR的方法將H81，L11和一個柔性LINKER連接起來構建為單鏈抗體，并命名為SCFVH81。使用包涵體變性復性的方法制備單鏈抗體，其步驟簡單，過程極短，僅僅需要5天即可制備出大量的單鏈抗體。制備的單鏈抗體具有較好的特異性，其親和力常數為239±006106M1。2抗克羅諾桿菌單鏈抗體SCFVH81生物信息學分析通過IMGTVQUEST分析序列，分析單鏈抗體SCFVH81，分析其VDJ重排機制，及其胚性基因來源，劃分出單鏈抗體SCFVH81可變區(qū)和骨架區(qū)。使用PROTPARAMTOOL分析單鏈抗體SCFVH81，其等電點為705，因此選擇包涵體的復性液PH為80，有利于單鏈抗體的復性。使用SOPMA和ITASSAR預測單鏈抗體SCFVH81的二級結構和3D模型，并進行對接，找到了抗原抗體結合界面的關鍵氨基酸，這些關鍵氨基酸通常位于二級結構的Β轉折附近。結合單鏈抗體3D模型空間結構并錯開其關鍵氨基酸引入二硫鍵，以減少對單鏈抗體SCFVH81活性的影響，但單鏈抗體SCFVH81特異性發(fā)生變化，這證明二硫鍵的引入還需要考慮其他因素的影響。3克羅諾桿菌特異性靶點的篩選及其PCR檢測方法的建立以阪崎克羅諾桿菌CSAKAZAKIIATCCBAA894基因組序列為模板，使用生物信息學對克羅諾桿菌特異性靶點進行了篩選，共篩選出了22個特異性靶點，根據這些特異性靶點設計特異性引物，最終獲得了一對特異性引物N2。以該對引物為基礎建立具有較好的抗干擾能力的PCR檢測方法，其純茵培養(yǎng)物檢測限為102CFUML基因組DNA檢測限為128FGΜL。該檢測方法在人工污染實驗中，經過8H的培養(yǎng)，可以檢測出人工污染奶粉中接種量為35100CFU的克羅諾桿菌。4阪崎克羅諾桿菌特異性靶點的篩選及其PCR檢測方法的建立以阪崎克羅諾桿菌CSAKAZAKIIATCCBAA894基因組序列為模板，使用生物信息學工具，篩選出了38組阪崎克羅諾桿菌特異性靶點，以這些特異性靶點為基礎，篩選出來了3對特異性引物（CS14，CS21和CS38）并建立了具有較好的抗干擾能力的PCR檢測方法，其基因組靈敏度分別為135PGΜL，135FGΜL，和135FGΜL其純菌培養(yǎng)物靈敏度為55105CFUML，55103CFUML，55103CFUML。經過8H的預培養(yǎng)，引物對CS21和CS38在人工污染奶粉中的檢測限為55101CFU10G。5阪崎克羅諾桿菌種熒光定量PCR檢測方法的建立本研究以前一章篩選的特異性靶點和特異性引物CS38為基礎，建立了熒光定量PCR檢測方法，并以PMD19T上與特異性靶點相似性最小的序列構建了擴增內標。該方法基因組DNA檢測靈敏度達到33FGΜL，純菌培養(yǎng)物檢測靈敏度達到47101CFUML。經過6H增菌培養(yǎng)，該檢測方法能夠檢測到接種量為35100CFUML的嬰幼兒配方奶粉中的阪崎克羅諾桿菌。

簡介：目的電化學沉積法中不同的電化學參數可制備形成不同空間結構的礦化膠原涂層。本實驗嘗試通過觀察MC3T3E1前成骨細胞的黏附、增殖和分化狀況，分析電化學沉積的礦化膠原涂層對前成骨細胞的影響及其機制，并探討有利于成骨的電化學參數。方法在電化學沉積法中選用不同參數制備鈦表面礦化膠原涂層，以掃描電鏡觀測表面形貌。在礦化膠原涂層及HA涂層、純鈦對照組表面培養(yǎng)MC3T3E1前成骨細胞。在培養(yǎng)24H和72H時行MTS檢測，分析細胞黏附和增殖情況。培養(yǎng)24H時，以掃描電鏡觀察涂層表面細胞的形態(tài)和黏附情況。在培養(yǎng)一周和兩周時，通過WESTERNBLOTTING法檢測成骨前體細胞ALP、COL1的表達水平，分析比較不同涂層對細胞分化能力的促進作用。結果1、前成骨細胞在各涂層上培養(yǎng)24H、72H時，其MTS值均逐漸增長，說明細胞在涂層表面發(fā)生了增殖反應。礦化膠原涂層的MTS值最高，且與純鈦組存在顯著性差異P＜001，表明礦化膠原涂層能顯著促進細胞增殖。2、掃描電鏡觀察顯示前成骨細胞在培養(yǎng)24H時可在各涂層表面生長。在致密型礦化膠原涂層組，細胞伸展良好并伸出了偽足，固定在材料表面，生長情況較其他組更優(yōu)。3、WESTERNBLOTTING檢測成骨前體細胞在相應基板表面培養(yǎng)一周時多孔型礦化膠原涂層和致密型礦化膠原涂層ALP、COL1表達程度均高于純鈦組，且結果有顯著性差異此外，致密型涂層組ALP多于多孔型涂層組，并具有顯著性差異，而兩者的COL1表達水平無顯著差異。兩周時，多孔型礦化膠原涂層、致密型礦化膠原涂層及純鈦組ALP表達水平基本無差異，多孔型涂層組及致密型涂層組COL1表達水平均顯著高于純鈦組，但卻略低于培養(yǎng)一周時。結論基于礦化膠原涂層修飾的鈦植入體能顯著促進成骨前體細胞MC3T3E1的黏附、增殖和分化。其中致密型礦化膠原涂層效果更加理想。

簡介：海洋芽孢桿菌BACILLUSMARINUS是芽孢桿菌屬BACILLUS中的一個種，因其生長環(huán)境的特殊性而可以產生一些結構新穎的生物活性物質，海洋芽孢桿菌活性代謝產物的研究目前已成為國內外研究的熱點。我國是海洋大國，擁有遼闊的海域和豐富的海洋微生物資源，充分利用我國海洋微生物的優(yōu)勢資源，研究開發(fā)海洋微生物天然活性物質，可以從中發(fā)現很多對人類有益的微生物活性代謝產物。本文對所采集的海泥樣品進行生物活性測試和活性組分理化性質鑒定，最終選擇GS5菌株作為研究對象，通過PCR擴增16SRDNA序列，BLAST比對并構建進化樹，最終初步鑒定GS5菌株為海洋芽孢桿菌BACILLUSMARINUS。采用薄層色譜、硅膠柱色譜和高效液相色譜等分離技術對菌株GS5菌株的發(fā)酵液進行了化學成分的提取和分離，從中分離得到14個單體化合物，并利用質譜、核磁共振等現代波譜技術鑒定了他們的結構，分別為膽甾醇CHOLEST4EN3ONE1、鄰苯二甲酸二異丁酯DIISOBUTYLPHTHALATE2、7羥基34羥苯基異黃酮7糖苷7DGLUCOPYRANOSYLOXY34HYDROXYPHENYL4H1BENZOPYRAN4ONE3、環(huán)（纈脯）二肽CYCLOVALPRO4、N苯乙基異戊酰胺NPHEHYLISOVALERAE5、3苯基丙酸3PHENYLPROPIONICACID6、環(huán)（亮羥脯）二肽CYCLOLEUHYDROXYPRO7、環(huán)（苯丙羥脯）二肽CYCLOPHEHYDROXYPRO8、4，7二羥基異黃酮4，7DIHYDROXYISFLAVONE9、環(huán)（亮脯）二肽CYCLOLEUPRO10、環(huán)（苯丙脯）二肽CYCLOPHEPRO11、2苯乙胺2PHENYLETHYLAMINE12、環(huán)（酪脯）二肽CYCLOTYRPRO13、4，5，7三羥基異黃酮4，5，7TRIHYDROXYISFLAVONE14。采用紙片法對獲得的6個環(huán)二肽類化合物進行生物學活性檢測，結果發(fā)現化合物4、7、8、11對大腸桿菌ESCHERICHIACOLI的活性具有抑制作用。綜上所述，本研究工作從海洋芽孢桿菌GS5中分離得到14個化合物，其中化合物4、7、8、11具有抑制大腸桿菌的作用。本實驗為海洋芽孢桿菌次級代謝產物中抗生素類生物活性物質的開發(fā)利用奠定了一定的生物學和化學基礎。

簡介：近年來，憑借其獨特的理化特性，氧化石墨烯及其衍生物在微生物學領域的研宄倍受人們關注。但關于其與微生物尤其是細菌的相互作用尚存在較大爭議，且具體作用機制尚不清楚。基于此，我們對氧化石墨烯進行了功能化修飾，得到了在生理溶液中穩(wěn)定存在的氧化石墨烯衍生物。同時探索了該種功能化氧化石墨烯對細菌活性的影響并對其機理進行了系統(tǒng)的研宄，且通過這個實驗性的證據將功能化氧化石墨烯運用到了大量重組蛋白的表達中。本文首先通過改進后的HUMMERS法合成氧化石墨烯，并進一步堿化后得到中間產物GOCOOH修飾上分子量為10KD的氨基化聚乙二醇（10K6BRPEGNH2）。以1∶11∶25，1∶5的投料比合成三種不同比例的NGOPEG。以革蘭氏陰性菌大腸桿菌作為模式菌，采用多種方法研究了關于功能化氧化石墨烯對微生物活性的影響，我們發(fā)現未經修飾的氧化石墨烯對于細菌的生長活性影響傲乎其微，而這一現象也與我們之前的研究成果相符合。低濃度的聚乙二醇（投料比為1∶1，濃度為20ΜGML）接枝上的氧化石墨烯刺激細菌生長的功能最強，而對于增加聚乙二醇的濃度其刺激細菌生長效果不顯著。因此，我們選擇該條件下的功能化氧化石墨烯進一步系統(tǒng)深入研究了NGOPEG1∶1促進細菌增長的潛在作用機制。FTSZRING實時觀測細菌分裂的結果顯示出經過NGOPEG1∶1處理的細菌FTSZRING形成所需要的準備時間P1明顯縮短，而這一階段與DNA復制，蛋白質合成以及細胞延伸有關。進一步分析可以得知NGOPEG1∶1能夠有效促進細胞DNA復制以及大量分泌胞外聚合物的功能。DNA重組技術在生物工程領域是一次突破式的技術革新，由此而衍生的重組蛋白在生物醫(yī)藥，發(fā)酵工程等得到了重要且廣泛地應用。如何更好更有效的促進蛋白表達也成為科研工作者關注的焦點。在本實驗中我們還將該種材料用于蛋白表達系統(tǒng)，對于低拷貝質粒的重組蛋白來說，仍能促進蛋白表達增加接近30％，相對于高拷貝質粒的重組蛋白而言，蛋白表達量則以成倍增加方式顯著提高。由于這種穩(wěn)定表達，快速獲取的特點使功能化氧化石墨烯在生物發(fā)酵工程以及生物材料方面具有潛在性應用。

簡介：河南農業(yè)大學碩士學位論文山茱萸生物學特性及加工工藝研究姓名吳衛(wèi)剛申請學位級別碩士專業(yè)農業(yè)推廣指導教師張重義；孫耀志200903山茱萸的最佳初加工工藝為，采摘后的鮮果凈選后，沸水燙煮4分鐘，經淘洗、瀝水后，攤晾24小時，機械去核，果肉裝盤至盤高2／3，溫度調至6570“C，每隔80分鐘翻炕一次直至烘干。關鍵詞山茱萸；生物學特性；采收期初加工工藝；有效成分2

簡介：人白細胞介素1ΑHIL1Α在抗腫瘤等方面具有潛在的應用價值。目前，重組HIL1ΑRHIL1Α表達主要是通過大腸桿菌表達系統(tǒng)，但大腸桿菌表達系統(tǒng)存在蛋白分離純化工藝復雜等缺點。酵母表達系統(tǒng)具有蛋白表達后修飾及分離純化工藝簡單等優(yōu)點，本文構建了RHIL1Α畢赤酵母工程菌，挑選表達量高的菌株，在1L搖瓶和3L發(fā)酵罐規(guī)模下進行了表達條件的優(yōu)化，在10L和50L發(fā)酵罐規(guī)模進行了樣品的獲取、產物純化工藝以及初步的活性研究。為RHIL1Α的產業(yè)化研究奠定了基礎。主要研究包括1、本研究對HIL1Α的CDNA序列進行設計和優(yōu)化，采用PPICZΑA作為目的基因的表達載體，通過電轉化法將重組質粒轉化至X33畢赤酵母。通過基因組PCR鑒定，MM和MD平板篩選，SDSPAGE鑒定等方法篩選得到高表達且遺傳穩(wěn)定的RHIL1Α工程菌。2、在1L搖瓶規(guī)模下對RHIL1Α工程菌的發(fā)酵條件進行優(yōu)化。結果表明，在PH55、26℃、甲醇濃度025％條件下，RHIL1Α的表達量最高19MGL。3、在3L發(fā)酵罐規(guī)模下對RHIL1Α工程菌的發(fā)酵條件進行優(yōu)化。結果表明，在PH55、26℃、甲醇濃度025％條件下，RHIL1Α的表達量最高180MGL。4、擴大發(fā)酵規(guī)模獲取樣品。在PH55、26℃、甲醇濃度025％條件下，10L和50L發(fā)酵罐中的表達量分為251MGL和307MGL。5、對RHIL1Α的分離純化條件進行摸索。通過高速低溫離心、雙水相、超濾以及DEAE陰離子交換層析處理后，獲得了純度高于90％，收率大于50％的目的蛋白。6、采用MTT法檢測RHIL1Α對人肝癌細胞BEL7402的作用并證明RHIL1Α能夠抑制人肝癌細胞7402的增殖。為進一步研究RHIL1Α對腫瘤的臨床治療奠定了理論基礎。

簡介：目的腫瘤光學治療是目前臨床上繼外科手術治療、化學治療、放射治療之外的新型治療手段。其治療原理是先給予對腫瘤組織有選擇性的光敏劑，然后使用特定波長的激光輻照腫瘤區(qū)域，從而使光敏劑高效地催化組織中的氧分子轉化為對細胞結構、功能有損害的活性氧物質，或者使光敏劑吸收光能并轉化為局部高熱，最終實現治療腫瘤的目的。相對于腫瘤手術治療、化療、放療等目前臨床上采用的主要治療手段，腫瘤光學治療具有損傷部位小、選擇性高、安全性好等優(yōu)勢，可望在腫瘤治療中發(fā)揮重要作用。根據不同的作用原理，腫瘤光學治療主要分為光動力學治療PDT和光熱治療PTT。無論是PDT或者PTT治療，決定它們療效的關鍵在于制備理想的光敏劑。理想的光敏劑至少應同時具有兩種特性高效的光敏特性和良好的腫瘤選擇性。1為了提高光敏特性一方面，許多研究者分別將具有光熱作用的光敏劑與光動力作用的光敏劑組裝或偶聯(lián)在一起，制備出了多種同時具有PDT和PTT治療效應的納米材料類的光敏劑，大大提高了腫瘤光學治療的療效另一方面，由于生物組織對近紅外波段700900NM的光吸收較弱，因此選擇近紅外類的光敏劑可實現更深層組織的光學治療，顯著地推進了光學治療的應用前景。2為了增強光敏劑對腫瘤細胞的選擇性，最常采用的策略是通過化學方法將光敏劑與靶向配體進行連接，使光敏劑能夠被腫瘤細胞膜上特異性表達的受體識別并高效地結合，從而賦予了光敏劑的靶向性。然而，納米材料類的光敏劑將面臨很多難題，比如難以大規(guī)模地制備、易被網狀內皮組織器官截留、潛在毒性等，導致大部分納米材料類的光敏劑還停留在早期開發(fā)階段。同時，基于化學連接策略開發(fā)靶向性光敏劑可能會改變靶向配體的結構與功能、增加額外的合成步驟和成本，這些影響因素同樣會妨礙它們的實際應用。鑒于目前常用光敏劑的以上不足，研發(fā)不依賴于納米高分子材料、也不需要復雜的化學連接，而是基于本身化學結構內在的多功能特性的小分子類靶向光敏劑，可望避免上述問題，提高臨床轉化應用的潛力，推進和擴大腫瘤光學治療的前景。線粒體是細胞生存的重要細胞器，其在能源制造和細胞凋亡通路中發(fā)揮著核心作用。因此，線粒體一直被認為是抗腫瘤治療的理想靶點。尤其是最近研究表明，線粒體對過量的活性氧物質及高熱非常敏感使得靶向腫瘤細胞線粒體的PDT、PTT療效非常顯著。本課題組前期研究發(fā)現了一類具有腫瘤靶向性的吲哚七甲川花菁類近紅外熒光小分子。它們表現出不需要化學連接靶向配體，即能夠被多種腫瘤細胞選擇性攝取，同時蓄積于腫瘤細胞的線粒體中。某些花菁類近紅外熒光小分子化合物已經被證明具有一定的光敏效應。據此本研究設想以前期獲得的線粒體靶向染料分子為基礎，通過化學結構修飾，可望制備合成同時具有靶向腫瘤細胞線粒體和整合PDT和PTT雙模態(tài)光學治療的吲哚七甲川花菁類近紅外熒光小分子光敏劑，顯著提高光學治療的療效。方法與結果根據前期的構效關系研究及其它研究報道，親脂性陽離子特性的吲哚七甲川鏈是對這類小分子的腫瘤細胞線粒體靶向特性起到至關重要作用的官能團。同時，文獻報道花菁類小分子的光敏效應與它們的脂水分布系數（LOGP）、極性、摩爾吸光系數等密切相關。因此，為了制備一種靶向腫瘤細胞線粒體，同時整合了PDT和PTT雙模態(tài)光學治療的小分子類光敏劑，本論文主要從以下三個方面開展研究，且主要結果如下一、腫瘤細胞線粒體靶向化學小分子類光敏劑的設計與合成在前期構效關系研究基礎上，以吲哚七甲川鏈為線粒體靶向的母核結構，通過改變吲哚環(huán)上的N烷基側鏈的鏈長（碳數N15）、改變側鏈末端的官能團（以甲基、甲氧基、羧基、芳香基、羥基、磺酸基、氨基酸等進行取代），合成了27個具有不同LOGP、極性以及摩爾吸光系數的新型吲哚七甲川花菁類近紅外熒光小分子，為獲得同時具有腫瘤細胞線粒體靶向、同步光熱和光動力治療的多功能小分子提供了候選化合物。二、目標光敏劑的篩選及體外多種腫瘤細胞中的光熱和光動力作用研究從合成的27個代表性吲哚七甲川花菁類近紅外熒光小分子中，通過腫瘤靶向（腫瘤組織與肌肉組織的蓄積差別）、光熱特性（溶液升溫情況）、光動力特性（單態(tài)氧、ROS生成水平），篩選獲得了具有顯著腫瘤靶向特性、光熱和光動力作用的新型多功能小分子化合物7。進一步在A549、H460、MCF7、4T1等多種腫瘤細胞株上驗證了化合物7的光誘導殺傷作用通過冰浴處理或加入NAC（自由基清除劑）進行干預，證實化合物7具有光熱、光動力協(xié)同的殺傷效應通過將化合物7與兩種線粒體探針MITOTRACKER、RHO123進行共染，確證了其線粒體靶向蓄積特性通過流式細胞分析和WESTERNBLOT檢測結果發(fā)現腫瘤細胞線粒體途徑的細胞調亡可能是化合物7發(fā)揮光療效果的作用機制。三、體內多種荷瘤動物模型上驗證目標光敏劑7的光學治療作用化合物7的靶向光學治療腫瘤的效果依次在多種皮下移植瘤、原位移植瘤動物模型上進行了驗證。通過近紅外熒光成像，結果發(fā)現其在A549、4T1皮下及4T1原位移植瘤模型中均表現出良好的腫瘤選擇性蓄積特性向腫瘤部位給予808NM、08WCM2的激光照射作用5分鐘，然后分別通過紅外熱成像儀監(jiān)測腫瘤部位的溫度變化或檢測腫瘤組織中的ROS生成水平，在體內模型中進一步證實了化合物7的光熱、光動力協(xié)同治療作用通過測量腫瘤體積、動物體重變化情況及動物的生存率，結果證實化合物7顯著地抑制了腫瘤的生長，在監(jiān)測期間動物的生存率為100％并且沒有動物出現腫瘤復發(fā)通過血常規(guī)、肝腎功能生化指標的測量及主要臟器的病理切片觀察，結果發(fā)現與正常對照組相比，化合物7沒有引起明顯的毒副作用。另外，本研究還在基于臨床病人的腫瘤標本建立的PDX動物模型上確證了化合物7的優(yōu)秀的腫瘤光學治療療效，進一步探索了其臨床轉化應用的前景。結論本研究工作通過合理設計與化學合成，成功篩選獲得了同時具有腫瘤細胞線粒體靶向特性和PDT與PTT協(xié)同治療作用的多功能近紅外小分子化合物7。這種具有近紅外熒光成像功能的靶向光敏劑還能夠進行腫瘤及腫瘤邊界光學顯像，為實現成像引導的精確光學治療提供了潛在的可能性。這是第一個以腫瘤細胞線粒體為治療靶點，同步實現腫瘤PDT和PTT協(xié)同治療的小分子光敏劑。該光敏劑具有良好的光敏特性，可望成為用于腫瘤光學治療的新型光敏劑，為腫瘤治療提供了潛在的新途徑。

簡介：因創(chuàng)傷、先天發(fā)育異常等原因導致的尿道缺損一直是臨床上泌尿外科難以解決的重大問題，先天性的尿道缺損、尿道下裂更是男性泌尿生殖系統(tǒng)最為常見的疾病。尿道的病患不僅肉體痛苦，心靈同樣承受著很大的壓力，嚴重影響著男性患者的生理和心理的健康。通過尿道組織工程的技術，選用合適的支架材料修復受損尿道，可以避免外科手術的并發(fā)癥。優(yōu)良的生物支架材料要具有均勻的三維立體貫通性孔隙結構，從而促進種子細胞的生長分化、相互作用和營養(yǎng)物質的吸收利用，合適的生物支架材料能夠在可以調控的速率且同細胞生長速率相匹配的條件下進行降解成無毒的產物進而逐步被機體吸收利用，此外還需具備優(yōu)良的物理力學性能形成正常的組織。本研究前期用于構建組織工程尿道的絲膠蛋白殼聚糖甘油磷酸鈉支架材料，具有多孔結構、能夠進行逐步生物降解、無細胞毒性、可隨意塑形等特性，表明其具備應用在組織工程尿道的可能性，但是也支架材料本身也還存在著限制其應用于尿道修復的種種問題。本課題針對絲膠蛋白殼聚糖甘油磷酸鈉支架材料所存在的孔徑過大、孔隙結構不均勻、宏觀力學性能差等問題，對支架材料進行優(yōu)化制備，性能測試從而篩選出適合于尿道組織工程的制備工藝條件，并對制備得到的支架材料進行了系列的生物學的評價。通過添加絲素蛋白和聚乙烯醇對支架材料的成分進行優(yōu)化，研究了預冷凍溫度對支架材料孔徑結構和力學性能等多方面的影響，綜合添加成分和工藝條件經過性能表征確定支架材料的最終的制備工藝。對比優(yōu)化前后支架材料的降解性能和血液相容性，支架材料的各項性能都有所改善。支架材料的三維貫通性多孔孔徑分布在5080ΜM之間，初始降解率降低到3386％，更適合種子細胞的初期粘附生長。通過動物體內系列實驗，對支架材料進行系列的生物學評價結果得出，功能化尿道組織工程支架材料不含熱源性物質、無皮膚刺激性、不會引起遲發(fā)型超敏反應、植入后局部反應沒有引起明顯的炎癥，同對照組無明顯差別，12周內支架材料可以全部降解完成。綜合本課題研究結果，制備得到的支架材料具有良好的生物相容性和理化性能，具備應用于臨床尿道修復的應用前景。

簡介：河南農業(yè)大學碩士學位論文棉鈴蟲和煙夜蛾生殖生物學特性比較研究姓名程曉東申請學位級別碩士專業(yè)農業(yè)昆蟲與害蟲防治指導教師羅梅浩201106河南農業(yè)大學201L碩士學位論文棉鈴蟲和煙夜蛾生殖生物學特性比較研究放閱讀框架COPY。序列分析結果顯示，煙夜蛾組織蛋白酶LHASSCL編碼341個氨基酸殘基，預測HASSCL蛋白的N末端含有長度為16個氨基酸殘基的信號肽序列，去除信號肽序列后，預測成熟蛋白分子量為362KDA，等電點為601。氨基酸序列比對結果表明，HASSCL與其它昆蟲的組織蛋白酶L氨基酸序列具有較高的一致性。將去除信號肽序列的HASSCL重組到表達載體PGEX4T2中，并轉入原核細胞中表達，SDSPAGE和WESTERN印跡分析表明，經IPTG誘導后，該基因能在大腸桿菌BL21中表達，電泳檢測到一條大約62KDA的目的條帶，與預測的融合蛋白分子量相符。關鍵詞棉鈴蟲；煙夜蛾；生殖行為；內生殖器官；總糖總蛋白質；組織蛋白酶L；克隆與表達2

簡介：點擊查看更多醬鹵肉中代表性致病菌預測微生物學研究.pdf精彩內容。

簡介：目的探討不同分割模式X線照射大鼠腹部后胰腺生物學效應的改變，為胰腺的保護提供研究依據。方法將大鼠隨機分為常規(guī)分割組，單次大劑量組，中等低分割組，對照組，于照射前及照射后第4D、7D、14D、21D、42D測空腹血糖及血淀粉酶；并取胰腺制成蠟塊，HE染色后觀察組織學改變；取單次大劑量組蠟塊處理后進行免疫組化染色觀察上述時間點BCL2與BAX蛋白的表達。結果各實驗組血糖4D時降至最低P005，14D及以后接近正常；血淀粉酶4D、7D時升高P005，14D及以后恢復正常。光鏡下，單次大劑量組4D時個別腺泡變性壞死，14D時腺管周圍間質纖維增生，21D時胰島細胞間纖維增生，42D時腺細胞增生，腺管內充滿分泌液。常規(guī)分割、中等低分割組出現同樣變化，僅程度較輕，出現較晚。單次大劑量組腺細胞中隨時間延長BCL2蛋白表達陽性率增加，實驗組與對照組相比有顯著差異P結論腹部照射可造成大鼠胰腺的放射損傷，胰島細胞間僅發(fā)生纖維增生，腺細胞初始有一過性急性損傷，后出現代償性修復，機制可能系照射后隨時間抗凋亡基因BCL2表達增多，凋亡基因BAX表達減少。單次大劑量照射組損傷出現的最早，最嚴重，中等低分割放療當分次劑量及間隔時間合適時，損傷程度不重于常規(guī)放療。

簡介：目的在節(jié)段性骨缺損修復、四肢關節(jié)重建、脊柱融合等臨床治療中，常需要進行骨移植。自體骨和同種異體骨等骨修復材料因自身固有缺陷而在臨床應用中受到極大限制。人工骨因其可大批量生產、便于儲存運輸等特點，成為近年來骨修復材料領域的研究熱點。目前已有多種類型的人工骨應用于臨床，以磷酸鈣骨水泥、羥基磷灰石和可降解有機材料等為主，主要用于非結構性植骨。但這些人工骨的骨修復效果有限或不佳，遠遜于自體骨或異體骨，其主要原因是不具備骨誘導活性。生長因子可以促進間充質干細胞的增殖、分化，可有效促進新骨的形成，將其復合到人工骨支架上，將有望賦予人工骨有效的誘導成骨活性。但生長因子的半衰期很短，直接使用將很快被降解或稀釋，不能在骨修復局部形成有效持久的藥物濃度。不僅使用量大，經濟成本高，而且隨血液分布到機體其他部位，可能出現并發(fā)癥。因此，如何構建一種有效的生長因子緩釋系統(tǒng)成為該領域發(fā)展需解決的一大關鍵難題。聚乳酸乙醇酸PLGA納米粒在藥劑學方面的快速發(fā)展為骨科醫(yī)生帶來了啟示。PLGA是一種人工合成的高分子聚合物，可作為多種藥物的載體而實現體內的持久釋放。如果使用PLGA作為載體對生長因子進行負載，則有望實現生長因子在體內的緩慢釋放，從而在骨修復局部維持足夠的濃度，充分發(fā)揮它們的促成骨功能。將這個緩釋系統(tǒng)同人工骨主體支架復合，則有望制備出具有較高成骨活性的復合人工骨，來滿足臨床對理想骨修復材料的需求。本課題組擬篩選一種PLGA作為主體材料建立納米粒緩釋系統(tǒng)，對制備條件進行探索優(yōu)化，使之更高效地包封蛋白質類物質，能有效地保護蛋白質的生物學活性，并可穩(wěn)定釋放這些物質達一個月以上，為制備出高活性的人工骨修復材料打下基礎。方法1查閱相關文獻，根據對緩釋系統(tǒng)的實際需求和生長因子的性質，最終選擇分子量較低、乳酸與乙醇酸單體比例為50∶50的PLGA作為納米粒制備的主體材料。采用復乳溶劑揮發(fā)法WOW制備納米粒，以牛血清白蛋白BSA為模型蛋白，探索PLGA濃度、BSA與PLGA質量比、內水相與油相體積比、內水相溶劑類型等因素對制備PLGA納米粒的影響，通過測定蛋白的包封率并兼顧載藥率來尋找最優(yōu)制備條件。2通過優(yōu)化條件制備納米粒，分別研究其對BSA、重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2RHBMP2、重組人堿性成纖維細胞生長因子RHFGF2的體外釋放動力學，評價其對蛋白質的緩釋效果。3與間充質干細胞共培養(yǎng)，用CCK8法和LIVEDEAD染色來證實PLGA納米粒的生物相容性。4利用細胞增殖實驗來驗證RHFGF2PLGA納米粒的生物學活性，利用堿性磷酸酶ALP染色、ALP活性檢測、骨鈣素OCN含量檢測、成骨相關標志物的表達等來驗證RHBMP2PLGA納米粒的生物學活性。結果1成功制備了PLGA納米粒并優(yōu)化了制備條件，當PLGA濃度為200MGML、BSA與PLGA質量比為1∶40、水油體積比1∶10、內水相使用去離子水時可獲得對BSA最理想的包封率和載藥率。2制備的納米粒呈規(guī)則球形，粒徑在300NM左右，對BSA、RHBMP2、RHFGF2的包封率分別為700±13％、682±17％、668±29％。3納米?？蓪崿F蛋白類物質的持久緩慢釋放，長達一個月以上，突釋現象不明顯。4納米粒的生物相容性良好，與間充質干細胞共培養(yǎng)3天，細胞存活力好。5RHFGF2PLGA納米粒對細胞有明顯促增殖作用，共培養(yǎng)7天后其促增殖作用顯著強于RHFGF2溶液組P＜005。ALP染色、ALP活性檢測、骨鈣素含量檢測、成骨相關標志物表達結果證實RHBMP2PLGA納米粒對C2C12細胞具有促成骨分化作用，且顯著強于RHBMP2溶液組P＜005。結論以優(yōu)化條件制備的PLGA納米粒呈規(guī)則球形，對蛋白質的包封效率高，能實現一個月以上的緩慢釋放，具有良好的生物相容性，利用PLGA納米粒負載的RHBMP2、RHFGF2仍具有良好的生物學活性，且表現出比直接使用相同劑量的相應生長因子溶液更優(yōu)效的作用。PLGA納米粒適宜作為生長因子的緩釋載體，為賦予人工骨高成骨誘導活性提供了新的選擇。

簡介：環(huán)肽類化合物是微生物產生的重要活性物質的一大類，具有廣泛的生理活性和研究價值，而芽孢桿菌是該類化合物的重要來源。本文對實驗室保存的分離自海洋具有抗茄鏈格孢菌活性的芽孢桿菌進行產環(huán)肽類化合物產量篩選；利用紫外線和亞硝酸兩種方式對篩選出的產環(huán)肽類化合物菌株進行誘變處理，通過小樣發(fā)酵以及穩(wěn)定性測試，獲得高產穩(wěn)定菌株，菌株發(fā)酵條件通過正交試驗進行了優(yōu)化。（1）芽孢桿菌是重要的農藥活菌制劑資源菌，其在植物體表現的抑菌活性除了與本身的抑菌作用有關外，與產生的各種酶活性也有一定的關聯(lián)，而酶活性往往與其代謝密切相關，試驗發(fā)現酶活性與菌株活性與目標化合物的產量成正相關，得到了3株有較高酶活和抑菌活性的菌株BL1002、BS1015和BS1019。（2）本實驗對來自海洋的菌株進行分離純化獲得單菌落的菌株，菌株發(fā)酵液進行環(huán)肽產量測試和抑菌活性測試，得到了2株活性較高環(huán)肽產量較高的菌株BL1002，BM1001。BL1002經紫外和亞硝酸誘變后獲得17株高活性菌株，其中7株菌對真菌茄鏈格孢菌孢子萌發(fā)抑制效果提高了4倍；BM1001同樣經紫外和亞硝酸誘變后，獲得5株抑菌活性提高了2倍的菌株。BL1002的誘變菌株BL10027環(huán)肽產量比出發(fā)菌株產量提高了49％。（3）BL10027該菌株通過培養(yǎng)基條件進行優(yōu)化，環(huán)肽類化合物產量比原始菌株提高了57。對該突變株的培養(yǎng)條件初步優(yōu)化結果表明，該菌的發(fā)酵培養(yǎng)基的最優(yōu)配方為蛋白胨7GL酵母粉4GL葡萄糖05GLNACL30GLMGCL26H2O23GLKCL03GLFEPO4002GLPH70最適培養(yǎng)溫度25℃。（4）本實驗通過收集菌株B9987的4種不同形態(tài)的菌落，研究其形態(tài)與生理特性及環(huán)肽產量的關系。四種菌落形態(tài)相互比較得出，分散光滑的菌株在傳代穩(wěn)定和環(huán)肽產量方面有較明顯的優(yōu)勢，同時有較高的抑菌活性，對于以后菌種選育提供一定的幫助。