簡(jiǎn)介：禽病原性大腸桿菌OMPA、OMPT基因和腸炎沙門氏菌OMPA、PGTE基因突變株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究CONSTRUCTIONANDCHARACTERIZATIONOFOMPA、OMPTMUTANTSOFAVIANPATHOGENICESCHERICHIACOLIANDOMPA、PGTEMUTANTSOFSALMONELLAENTERITIDIS本文受國(guó)家自然科學(xué)基金30972196、30771604、30471281、國(guó)家863計(jì)劃2003AA222141資助研究生周業(yè)菲專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)導(dǎo)師高崧教授劉秀梵教授揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院2013年6月摘要完整閱讀框插入表達(dá)載體PGEX．6P．1中，通過電轉(zhuǎn)化突變株來篩選獲得回復(fù)株。PCR擴(kuò)增帶酶切位點(diǎn)的OMPA基因并插入到PMD18．TSIMPLEVECTOR載體中，篩選出陽(yáng)性重組子TOMPA，然后運(yùn)用分子克隆方法將ZEOCIN抗性基因插入到目的基因OMPA中，構(gòu)建出帶ZEOCIN抗性基因的質(zhì)粒TOMPA．ZEO。PCR擴(kuò)增出片段OMPA．ZEO，并電轉(zhuǎn)化入帶有質(zhì)粒PKD46的禽病原性大腸桿菌分離株E058中，運(yùn)用同源重組的方法，篩選出基因突變株E058AOMPA。運(yùn)用相同的同源重組方法，依次篩選出基因突變株E058AOMPT、CVCC3378AOMPA、CVCC3378APGTE。RTPCR結(jié)果表明各突變株基因的缺失只影響突變基因本身的表達(dá)，而其上下游基因的轉(zhuǎn)錄正常；生長(zhǎng)曲線的測(cè)定結(jié)果顯示，各突變株、回復(fù)株的生長(zhǎng)速度與親本株相似，并未表現(xiàn)出明顯差異；SPF雞血清殺菌試驗(yàn)、HD．11細(xì)胞吞噬試驗(yàn)、1日齡SPF雞致死試驗(yàn)結(jié)果說明，與野生株E058和CVCC3378相比，突變株E058AOMPA、E058AOMPT、CVCC3378AOMPA、CVCC3378APGTE均表現(xiàn)出了輕微致弱；體內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)及動(dòng)態(tài)分布試驗(yàn)表明，與野生株相比，各突變株在各個(gè)被檢臟器中數(shù)量均明顯下降，差異顯著，而回復(fù)株較相應(yīng)的突變株毒力則有顯著提高。關(guān)鍵詞禽致病性大腸桿菌；腸炎沙門氏菌；OMPAOMPT；PGTE；突變株；致病性

簡(jiǎn)介：目的類鼻疽伯克霍爾德菌（BURKHOLDERIAPSEUDOMALLEI，BPSEUDOMALLEI，簡(jiǎn)稱類鼻疽桿菌）作為一種正在擴(kuò)散的人獸共患傳染病病原菌，能夠?qū)е路Q為類鼻疽MELIOIDOSIS的熱帶醫(yī)學(xué)疾病，病死率高達(dá)40％。由于類鼻疽桿菌可在人體潛伏數(shù)十年后發(fā)病，故類鼻疽也被稱為“不定時(shí)炸彈”。細(xì)菌分泌系統(tǒng)在其致病中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用，包括Ⅲ型分泌系統(tǒng)TYPETHREESECRETIONSYSTEM，T3SS。BPSS1395基因定位于類鼻疽桿菌的T3SS，目前功能未知。通過生物信息學(xué)和BLAST比對(duì)發(fā)現(xiàn)與之同源性較高的蛋白是青枯桿菌的重要轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子HRPFHYPERSENTIVERESPONSEPATHOGENICITYF，屬于其T3SS效應(yīng)蛋白。我們推測(cè)BPSS1395可能是類鼻疽桿菌T3SS的轉(zhuǎn)運(yùn)和定向元件。因此，本研究擬通過基因工程技術(shù)重組表達(dá)具有生物活性的BPSS1395蛋白并制備其抗體，確定其亞細(xì)胞定位同時(shí)，構(gòu)建類鼻疽桿菌BPSS1395基因敲除株，通過感染番茄植株證實(shí)BPSS1395在類鼻疽桿菌感染植物中的重要作用。以上實(shí)驗(yàn)將為深入研究類鼻疽桿菌作為一種潛在的植物病原造成人的感染和傳播作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法1采用PCR擴(kuò)增類鼻疽桿菌BPSS1395基因，目的基因與PET22B載體質(zhì)粒通過BAMHⅠXHOⅠ雙酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)回收、連接后轉(zhuǎn)化ESCHERICHIACOLIBL21DE3感受態(tài)細(xì)胞，獲得陽(yáng)性重組子，經(jīng)雙酶切和DNA測(cè)序驗(yàn)證。2篩選得到的陽(yáng)性工程菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白并鑒定其表達(dá)形式，洗滌BPSS1395蛋白包涵體，通過復(fù)性得到可溶的BPSS1395蛋白。3以復(fù)性BPSS1395蛋白免疫家兔，制備抗BPSS1395血清WESTERNBLOT、ELISA及免疫熒光分析其免疫學(xué)性質(zhì)。4通過超速離心機(jī)分離全菌各組分，WESTERNBLOT分析BPSS1395蛋白的亞細(xì)胞定位。5利用同源重組技術(shù)構(gòu)建類鼻疽桿菌BPSS1395基因敲除菌株P(guān)CR擴(kuò)增類鼻疽桿菌BPSS1395基因上下游同源臂，連接至PK18MOBSACB自殺質(zhì)粒上，通過大腸桿菌S171ΛPIR以接合方式將其轉(zhuǎn)入類鼻疽桿菌中，而后蔗糖篩選獲得基因敲除突變菌株，PCR、DNA測(cè)序鑒定敲除菌株。6類鼻疽桿菌野生株、BPSS1395基因敲除菌株和EHECO157∶H7對(duì)照組分別感染番茄植株根部，觀察植株及葉片的生長(zhǎng)情況，PCR鑒定植物基因組中的細(xì)菌，電鏡觀察植株葉片病理學(xué)變化。結(jié)果1PCR獲得了全長(zhǎng)870BPBPSS1395目的基因，構(gòu)建了表達(dá)重組質(zhì)粒的陽(yáng)性工程菌PET22BBPSS1395BL21DE3。2陽(yáng)性工程菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，包涵體洗滌、復(fù)性獲得了分子量為32KDABPSS1395重組蛋白。3該蛋白免疫家兔抗血清ELISA效價(jià)達(dá)1∶1280000，并能與目的蛋白及類鼻疽桿菌全菌發(fā)生特異性抗原抗體反應(yīng)。4BPSS1395蛋白在類鼻疽桿菌中主要定位于細(xì)胞質(zhì)。5成功構(gòu)建了類鼻疽桿菌BPSS1395基因敲除突變菌株。6類鼻疽桿菌野生株和BPSS1395基因敲除株分別感染番茄植株后，雖然野生株與敲除株感染后葉片未見明顯變化，但是電鏡觀察發(fā)現(xiàn)野生型感染組植物葉片的組織結(jié)構(gòu)中有類鼻疽桿菌存在，同時(shí)PCR擴(kuò)增出特異性類鼻疽桿菌基因，而敲除株感染組沒有。結(jié)論本課題采用基因工程技術(shù)重組表達(dá)了具有生物活性的BPSS1395蛋白，并確定了其亞細(xì)胞定位制備了BPSS1395多克隆抗體，為研究該細(xì)菌及其蛋白的功能提供了有效工具利用同源重組技術(shù)構(gòu)建了BPSS1395基因敲除菌株，通過感染番茄植株證實(shí)了BPSS1395在類鼻疽桿菌感染植物中的重要作用。以上研究對(duì)深入研究類鼻疽桿菌作為一種潛在的植物病原造成人的感染和傳播作用機(jī)制以及類鼻疽桿菌的防治具有重要的理論指導(dǎo)意義。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多醉茄素A及改型衍生物對(duì)胰腺癌生物學(xué)效應(yīng)的影響和其藥理學(xué)機(jī)制的初步研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：背景葡萄糖類似物18F氟代脫氧葡萄糖18FLABELED2FLUO2DEOXYDGLUCOSE，18FFDG是目前臨床上應(yīng)用最廣泛、不可替代的腫瘤葡萄糖代謝型的PET顯像劑。然而18FFDG在以葡萄糖代謝為能量底物的腦腫瘤顯像、腫瘤與炎癥的鑒別診斷等方面的臨床應(yīng)用中仍存在一些局限性，為了提高診斷的靈敏度和特異性，課題組前期已經(jīng)成功合成了一種新型糖胺類分子探針18F氟代脫氧葡糖對(duì)氨基苯丙氨酸胺18FFDGLYNHPHE作為新的顯像劑用于腫瘤多重代謝PET顯像研究，理論上可以與葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體和氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體均特異性結(jié)合，即具有雙重靶向性。本研究將進(jìn)一步對(duì)新探針的生物學(xué)特性進(jìn)行探索。目的1體外細(xì)胞水平觀察分子探針18FFDGLYNHPHE的攝取特性并與18FFDG進(jìn)行初步比較；探討新探針的攝取機(jī)制，明確該分子探針的雙靶向性、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)通道的驗(yàn)證以及是否參與蛋白質(zhì)的合成。2活體動(dòng)物模型水平研究分子探針18FFDGLYNHPHE在模型昆明鼠體內(nèi)的生物分布及PETCT顯像特點(diǎn)，并與18FFDG的PETCT圖像結(jié)果比較。方法本研究分兩大部分，第一部分為體外細(xì)胞水平。主要包括3項(xiàng)研究1細(xì)胞攝取特性的研究測(cè)定不同共培養(yǎng)時(shí)間下，18FFDG及18FFDGLYNHPHE在HEP2細(xì)胞的攝取及洗脫率，評(píng)價(jià)新型分子探針與18FFDG的差異及相似性。2細(xì)胞攝取機(jī)制探討通過單獨(dú)及同時(shí)封閉潛在轉(zhuǎn)運(yùn)通道驗(yàn)證18FFDGLYNHPHE是否具有雙靶向性，并明確氨基酸主導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)途徑通道。3分子探針18FFDGLYNHPHE體外穩(wěn)定性以及脂溶性。第二部分研究?jī)?nèi)容主要是完成活體內(nèi)不同模型小鼠的PETCT顯像，初步評(píng)價(jià)圖像特征，與18FFDGPETCT顯像結(jié)果進(jìn)行比較并進(jìn)行生物學(xué)分布特征檢測(cè)。結(jié)果1喉癌HEP2細(xì)胞在80MIN攝取18FFDGLYNHPHE達(dá)到最大攝取率為933±019％，較18FFDG攝取率低。218FFDGLYNHPHE與HEP2共培養(yǎng)，分別加入2DG和或苯丙氨酸，當(dāng)2DG濃度為100ΜM時(shí)，對(duì)18FFDGLYNHPHE的抑制率為4566±192，當(dāng)2DG濃度增加（200ΜM及300ΜM），2DG對(duì)18FFDGLYNHPHE的抑制率并未顯著增加，表明100ΜM的2DG已達(dá)到抑制平衡；苯丙氨酸對(duì)18FFDGLYNHPHE的抑制率隨著苯丙氨酸濃度的增加而加大，當(dāng)苯丙氨酸濃度為300ΜM時(shí)，對(duì)18FFDGLYNHPHE的抑制率為7677±549；當(dāng)2DG與苯丙氨酸一同存在于HEP2細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境時(shí)，隨著2DG與苯丙氨酸濃度的增加（100ΜM，200ΜM及300ΜM），對(duì)喉癌HEP2細(xì)胞攝取18FFDGLYNHPHE的抑制率增上升，分別為6961±567，7343±214，7925±233。3在100ΜM2DG封閉葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)通道的含NA的PBS體系中，分別加入三種不同的氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑（BCH，MEAIB，絲氨酸）后，對(duì)18FFDGLYNHPHE的抑制率分別為7695±770；6953±266；7619±072。而在不含NA的膽堿體系中，并沒有明顯抑制。證實(shí)18FFDGLYNHPHE的攝取主要通過NA依賴型B0系統(tǒng)，A系統(tǒng)，系統(tǒng)。4腫瘤炎癥比率18FFDGLYNHPHE456±13118FFDG124±016；P＜005。表明18FFDGLYNHPHE對(duì)腫瘤有較高的特異性。5在體內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)S180腫瘤模型小鼠的PETCT顯像結(jié)果表明2DG或苯丙氨酸及2DG苯丙氨酸均使腫瘤部位幾乎不顯影，體內(nèi)證實(shí)新探針具有雙重代謝途徑。結(jié)論118FFDGLYNHPHE新型分子探針體外穩(wěn)定性極佳，且為水溶性。218FFDGLYNHPHE的體外實(shí)驗(yàn)表明該探針具有腫瘤相對(duì)特異靶向性，且為雙靶向性，即可以同時(shí)特異性靶向細(xì)胞膜上的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。3在氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)途徑中，18FFDGLYNHPHE通過NA依賴型B0系統(tǒng)，A系統(tǒng)，系統(tǒng)進(jìn)入細(xì)胞。且18FFDGLYNHPHE只涉及氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)，幾乎不參與蛋白質(zhì)的合成。4在體外實(shí)驗(yàn)S180腫瘤炎癥模型小鼠的PET圖像已經(jīng)證實(shí)雖然18FFDGLYNHPHE在炎癥和腦中攝取顯著低于18FFDG，但腫瘤攝取高于炎癥，有利于鑒別腫瘤與炎癥。5結(jié)合體內(nèi)及體外競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，支持18FFDGLYNHPHE是雙通道腫瘤代謝顯像分子探針，具有很好的臨床潛在應(yīng)用前景。本課題為國(guó)家自然科學(xué)基金“新型代謝類多靶向PET分子探針研制及其在腫瘤代謝顯像中的應(yīng)用研究”（編號(hào)81471695）。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R74UDC密級(jí)重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文論文題目人EBLN1基因系統(tǒng)進(jìn)化基因系統(tǒng)進(jìn)化分析分析及其生物學(xué)功能研究生物學(xué)功能研究作者姓名何鵬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士學(xué)科、專業(yè)名稱臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)論文答辯年月2016年05月2016年05月指導(dǎo)教師姓名（職稱、單位名稱）謝鵬教授教授重慶醫(yī)科大學(xué)重慶醫(yī)科大學(xué)目錄英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照1中文摘要中文摘要3英文摘要英文摘要7論文正文論文正文人EBLN1基因系統(tǒng)進(jìn)化分析及其生物學(xué)功能研究基因系統(tǒng)進(jìn)化分析及其生物學(xué)功能研究13前言前言13第一部分第一部分人EBLN1基因的系統(tǒng)進(jìn)化分析基因的系統(tǒng)進(jìn)化分析21前言前言211材料和方法材料和方法212結(jié)果結(jié)果343討論討論404小結(jié)小結(jié)41參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)43第二部分第二部分人EBLN1基因在神經(jīng)腫瘤中的作用基因在神經(jīng)腫瘤中的作用45前言前言451材料與方法材料與方法462結(jié)果結(jié)果573討論討論704小結(jié)小結(jié)73參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)74第三部分第三部分人EBLN1蛋白生物學(xué)功能的初步研究蛋白生物學(xué)功能的初步研究79前言前言791材料與方法材料與方法792結(jié)果結(jié)果943討論討論1024結(jié)論結(jié)論105參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)106全文總結(jié)全文總結(jié)111文獻(xiàn)綜述文獻(xiàn)綜述112致謝125攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文126

簡(jiǎn)介：異基因造血干細(xì)胞移植ALLOGENEICHEMOTOICSTEMCELLTRANSPLANTATION，ALLOHSCT是治療各種血液系統(tǒng)惡性腫瘤、重型再生障礙性貧血及重癥地中海貧血等的有效治療方法，但移植相關(guān)并發(fā)癥仍是威脅患者生命的重要因素，其中移植物抗宿主病GRAFTVERSUSHOSTDISEASE，GVHD是移植后最嚴(yán)重最棘手的并發(fā)癥之一，急性移植物抗宿主病AGVHD是移植后患者非復(fù)發(fā)死亡的主要原因，其發(fā)生必須具備三個(gè)前提①移植物中含有足夠數(shù)量的識(shí)別和攻擊宿主異源性抗原的免疫活性細(xì)胞②宿主應(yīng)有與移植物不同的同種異體抗原③宿主處于免疫無能狀態(tài)，對(duì)移植物不產(chǎn)生排斥。目前根據(jù)GVHD發(fā)病機(jī)制的不同，各種抗GVHD的化學(xué)藥物在臨床上廣泛應(yīng)用，如人抗胸腺球蛋白ANTIHUMANTHYMOCYTEGLOBULIN，ATG、抗TNF抗體英夫利昔、環(huán)孢素ACSA、他克莫司FK506等，但這些非特異性免疫抑制藥物本身具有毒副作用且易導(dǎo)致病毒及真菌等感染，從而影響療效。如何降低ALLOHSCT患者移植相關(guān)死亡率、提高患者生存率及生存質(zhì)量，是目前臨床工作面臨的挑戰(zhàn)。間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELL，MSC作為中胚層來源的具有多向分化潛能的多能干細(xì)胞，MSC在體外可誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等多種組織細(xì)胞，其經(jīng)過多次傳代培養(yǎng)、凍存復(fù)蘇后仍具有多向分化潛能。且MSC具有造血支持、低免疫原性、免疫抑制及無致瘤性等特點(diǎn)，近年來，隨著細(xì)胞替代治療與組織工程學(xué)的不斷發(fā)展，MSC已被應(yīng)用于自身免疫性疾病、神經(jīng)系統(tǒng)損傷、阿爾茲海默病、心血管疾病等多種疾病的治療研究，在血液學(xué)方面，已被應(yīng)用于GVHD的預(yù)防和治療。目前骨髓仍是MSC的主要來源，在血液系統(tǒng)疾病方面，人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANBONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELL，HBMSC已被應(yīng)用于臨床治療GVHD，但成人HBMSC細(xì)胞數(shù)量極少，并且增殖分化潛能隨年齡的增大而下降，病毒感染率較高，供者HBMSC的采集須行有創(chuàng)性骨髓穿刺，亦使其來源受到限制。引起AGVHD發(fā)生、發(fā)展的主要細(xì)胞為免疫活性細(xì)胞，即供者來源的成熟T淋巴細(xì)胞在患者體內(nèi)的活化，可引起其一系列的反應(yīng)，繼而激活并產(chǎn)生IL2、IFNΓ、TNFΑ、IL12及其受體等。其中IL2和IFNΓ為TH1細(xì)胞因子，TH1細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，在遲發(fā)型超敏反應(yīng)、部分自身免疫性疾病、宿主體內(nèi)抗胞內(nèi)病原感染都起著重要作用，TH1細(xì)胞與AGVHD的發(fā)生發(fā)展也有密切關(guān)系。而我們知道，HAMSC具有免疫抑制作用，而且其低表達(dá)HLAABC和HLAG，不表達(dá)HLADR表面抗原，表現(xiàn)出低免疫源性和免疫抑制作用，且移植到動(dòng)物體內(nèi)無致瘤性，是較為理想的免疫赦免細(xì)胞，為各種疾病的細(xì)胞治療提供了新的選擇。在異基因造血干細(xì)胞移植中，如何平衡機(jī)體內(nèi)TH1TH2細(xì)胞及ⅠⅡ型細(xì)胞因子，對(duì)于預(yù)防和治療GVHD具有重要意義。由此可見，人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞可能為GVHD治療新的種子細(xì)胞，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。已有研究報(bào)道間充質(zhì)干細(xì)胞幾乎存在于所有的組織器官中，且不同組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞，其體外擴(kuò)增的能力也不完全相同。已有研究報(bào)道了臍帶及胎肺來源的間充質(zhì)干細(xì)胞與骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞相比，前者的體外擴(kuò)增能力明顯強(qiáng)于后者，前者可在傳代40多次后仍保持原有的生物學(xué)特性及增殖能力。因此，目前越來越多的研究組致力于尋找新的間充質(zhì)干細(xì)胞，希望能夠替代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在臨床中的應(yīng)用，以解決骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源不足的問題。2004年研究者首次從人羊膜分離出間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)鑒定后發(fā)現(xiàn)其從羊膜中胚層分化而來，具有向三胚層分化的多潛能性，人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANAMNIOTICMESENCHYMALSTEMCELLS，HAMSC從健康產(chǎn)婦正常分娩后廢棄的胎盤組織中分離培養(yǎng)，羊膜組織來源充足，系產(chǎn)后廢棄物、不受倫理學(xué)限制，且羊膜不含有血管、神經(jīng)、肌肉等組織，分離提純過程相對(duì)簡(jiǎn)單、分離細(xì)胞純度較高。經(jīng)免疫表型鑒定，HAMSC不僅表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞的表面抗原，還表達(dá)干細(xì)胞相關(guān)表面抗原，如OCT3、OCT4、SSEA3、SSEA4等，這提示HAMSC可能還具有干細(xì)胞特性。近年來，人羊膜干細(xì)胞已經(jīng)在角膜修復(fù)、燒傷性疾病、骨科疾病、脊髓損傷等相關(guān)疾病的臨床研究和治療取得療效。那么，HAMSC與HBMSC生物學(xué)特性相似，均具有間充質(zhì)干細(xì)胞特性，且HAMSC可能還具有干細(xì)胞特性，細(xì)胞來源更豐富，是否可成為HBMSC的替代治療用于GVHD的預(yù)防和治療呢目的本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)HAMSC和HBMSC生物學(xué)特性及對(duì)異體外周血淋巴細(xì)胞的免疫抑制功能的比較，希望為HAMSC治療GVHD、解決HBMSC來源不足的問題提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法通過酶消化法從健康剖宮產(chǎn)產(chǎn)婦志愿捐獻(xiàn)的新鮮胎盤羊膜中分離培養(yǎng)HAMSC，通過密度梯度離心法從健康供者志愿捐獻(xiàn)的骨髓中分離培養(yǎng)HBMSC。實(shí)驗(yàn)分為兩部分第一部分實(shí)驗(yàn)為HAMSC與HBMSC生物學(xué)特性的比較，分別培養(yǎng)相同傳代代數(shù)的人羊膜來源與骨髓來源的MSC，對(duì)二者進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，通過CCK8法檢測(cè)兩種細(xì)胞的增殖情況并生長(zhǎng)曲線繪制，對(duì)兩種細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞周期檢測(cè)，采用流式免疫分型技術(shù)分別對(duì)兩種細(xì)胞進(jìn)行免疫表型鑒定，采用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)兩種細(xì)胞的波形蛋白VIMENTIN第二部分實(shí)驗(yàn)為HAMSC和HBMSC對(duì)異體外周血淋巴細(xì)胞的免疫抑制功能的比較，經(jīng)絲裂霉素處理后的HAMSC與HBMSC分別與植物血凝集素PHYTOHEMAGGLUTININ，PHA刺激的異體人淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，分別建立MSC與異體人外周血單個(gè)核細(xì)胞PBMC共培養(yǎng)體系，采用CCK8法比較兩種不同共培養(yǎng)體系中淋巴細(xì)胞的增殖情況，采用ELISA法比較兩種不同共培養(yǎng)體系中細(xì)胞因子干擾素ΓIFNΓ的分泌水平。結(jié)果1HAMSC與HBMSC細(xì)胞形態(tài)相似，HAMSC可傳至15代以上，HBMSC傳至第67代細(xì)胞后，開始老化、生長(zhǎng)增殖能力明顯減弱2在細(xì)胞周期的比較中，HAMSC與HBMSC二者的G2M期細(xì)胞比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞0053細(xì)胞免疫表型鑒定，HAMSC和HBMSC細(xì)胞表面均表達(dá)CD105、CD90、CD73，均不表達(dá)CD34、CD45、CD11B、CD19、HLADR，HAMSC表達(dá)OCT34，而HBMSC不表達(dá)OCT344免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示，HAMSC與HBMSC均表達(dá)VIMENTIN5HAMSC和HBMSC均對(duì)PHA刺激的PBMC增殖具有抑制作用，且隨著HAMSC和HBMSC細(xì)胞比例的增高，抑制能力增強(qiáng)，二者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＞0056ELISA結(jié)果提示，HAMSCPBMCPHA共培養(yǎng)組上清中IFNΓ水平較HBMSCPHAPBMC組低P0056，而HAMSCPBMCPHA共培養(yǎng)組及HBMSCPHAPBMC共培養(yǎng)組分別與PBMCPHA組上清比較，IFNΓ水平明顯降低P＜005。結(jié)論HAMSC比HBMSC具有更強(qiáng)的增殖能力和干細(xì)胞特性，二者均有免疫抑制功能，HAMSC與HBMSC在體外均能抑制PHA刺激的異體淋巴細(xì)胞增殖并減少其IFNΓ的分泌。

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簡(jiǎn)介：隨著納米科技的迅速發(fā)展納米復(fù)合材料的基礎(chǔ)上形成的不同功能的納米材料已成為新的研究熱點(diǎn)并顯示在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用潛力巨大。其中生物成像輔助下的癌癥早期診斷、癌癥光熱療法引起了人們的廣泛關(guān)注同時(shí)外部刺激響應(yīng)型的復(fù)合納米材料可控釋放體系也在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域有著重要的地位。本論文基于以上兩個(gè)生物學(xué)方向開展了相關(guān)研究。主要內(nèi)容包括⑴以稀土元素?fù)诫s的上轉(zhuǎn)換納米顆粒UCNP為基礎(chǔ)合成了一種多功能復(fù)合納米材料上轉(zhuǎn)換材料四氧化三鐵金顆粒抗體以用于癌細(xì)胞的成像和光熱治療。多巴胺修飾的6NM的磁性顆粒FE3O4通過靜電作用結(jié)合到經(jīng)過聚丙烯酸修飾過的上轉(zhuǎn)換材料表面形成UCNPFE3O4復(fù)合物在此復(fù)合物表面原位生長(zhǎng)較薄的金殼層AUSHELL以后通過酰胺反應(yīng)將抗體ANTIHER2連接到復(fù)合材料表面形成UCNPFE3O4AUANTIBODY體系。我們使用這種上轉(zhuǎn)換納米復(fù)合材料實(shí)現(xiàn)了分子靶向細(xì)胞水平上轉(zhuǎn)換熒光成像。這類復(fù)合材料中金殼層的表面等離子共振吸收較強(qiáng)可借助于分子靶向?qū)崿F(xiàn)癌細(xì)胞的光熱治療。另外在光熱治療的過程當(dāng)中我們的實(shí)驗(yàn)支持癌細(xì)胞光熱治療的效果與癌細(xì)胞的異質(zhì)性比如表面抗原蛋白表達(dá)高低有密切關(guān)系我們對(duì)此嘗試做了比較仔細(xì)的分析。⑵以稀土摻雜的上轉(zhuǎn)換材料為基礎(chǔ)經(jīng)由具有較強(qiáng)生物相容性材料二氧化硅的包裹和3氨丙基三乙氧基硅烷APTES的修飾我們將S亞硝基N乙酰DL青霉胺SNAPNO供體連接到UCNPSIO2表面形成UCNPSIO2SNAP復(fù)合體系。由于SNAP小分子對(duì)上轉(zhuǎn)換材料所發(fā)射出的360NM的紫外波長(zhǎng)比較敏感在其作用下可以斷裂自身的化學(xué)鍵從而釋放出一氧化氮所以借助于此體系我們實(shí)現(xiàn)了一氧化氮的可控釋放。從未來應(yīng)用的角度出發(fā)由于一氧化氮本身對(duì)血小板凝聚有抑制作用我們還初步探索了該可控釋放體系在980NM激光照射下所釋放出的一氧化氮對(duì)血小板凝聚的抑制作用的原理性證明實(shí)驗(yàn)。概括起來對(duì)上轉(zhuǎn)換復(fù)合材料的生物成像、腫瘤細(xì)胞的光熱治療以及可控釋放體系等進(jìn)行了初步的探索我們的研究結(jié)果為這一類復(fù)合材料未來在生物醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用與研究打下一個(gè)良好的基礎(chǔ)。

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簡(jiǎn)介：隨著抗腫瘤藥物研究的深入，高分子聚合物材料在藥物載體領(lǐng)域的運(yùn)用越來越廣泛，聚合物藥物載體可通過物理包埋或化學(xué)鍵合藥物的方式構(gòu)建新型給藥體系。聚N（2羥丙基）甲基丙烯酰胺PHPMA，內(nèi)消旋聚丙交酯PDLLA，聚乳酸羥基乙酸共聚物PLGA等作為高分子聚合物材料引入藥物傳遞系統(tǒng)DDS后，可體現(xiàn)出良好的生物相容性，在提高疏水藥物在水溶液體系溶解度、降低藥物不良生物毒性的同時(shí)，可提高藥物在腫瘤部位的富集效果。本論文以PHPMA、PLGA等聚合物為基礎(chǔ)，以PDLLA為疏水嵌段，制備兩親性嵌段聚合物納米粒子和膠束，對(duì)聚合物的合成路徑、納米粒子等的制備及生物學(xué)性能進(jìn)行研究。本研究設(shè)計(jì)以羥基功能化的小分子鏈轉(zhuǎn)移劑為基礎(chǔ)通過1，8二氮雜二環(huán)十一碳7烯DBU催化開環(huán)聚合ROP制備分子量分布較窄PDI＜11的PDLLA，再?gòu)乃苽涞腜DLLA大分子鏈轉(zhuǎn)移劑出發(fā)，在較溫和條件下通過可逆加成鏈斷裂轉(zhuǎn)移RAFT聚合制備PDLLABPHPMA兩親性嵌段共聚物PDI＜12，此法與文獻(xiàn)報(bào)道方法相比實(shí)驗(yàn)步驟明顯減少，所得聚合物的分子量可控性以及分子量分布極大改善。以此嵌段聚合物為基礎(chǔ)分別使用高壓微射流均質(zhì)機(jī)MICROFLUIDIZERTMM110P和透析法制備聚合物納米粒子和膠束，通過物理包埋的方式包載熒光探針尼羅紅及花氰染料CY75，分別在細(xì)胞和小動(dòng)物層面對(duì)其生物學(xué)性能進(jìn)行考察。結(jié)果表明與傳統(tǒng)的PDLLABPEG聚合物納米粒子相比，PDLLABPHPMA擁有相似的血液循環(huán)時(shí)間和更優(yōu)的生物分布，在作為PDLLABPEG替代物的應(yīng)用方面具有很好的前景。研究過程中我們發(fā)現(xiàn)直接通過PDLLABPHPMA納米粒子負(fù)載疏水性藥物載藥量較低。為解決上述載藥量過低問題，我們通過開環(huán)聚合制備PLGA聚合物，將端羥基轉(zhuǎn)化為端羧基和肼鍵后，分別與疏水性抗腫瘤藥物阿霉素DOX，紫杉醇PTX，7乙基10羥基喜樹堿SN38鍵合，并利用RAFT聚合制備的低分子量VEPHPMA為乳化劑制備納米粒子。此法可有效提高親脂性藥物在納米粒子中的載藥量同時(shí)可通過EPR效應(yīng)對(duì)腫瘤部位實(shí)現(xiàn)被動(dòng)靶向作用，增加藥物的腫瘤富集此外，使用所得的聚合物藥物偶聯(lián)物制備單一和混合給藥的納米粒子，結(jié)果表明多種聚合物藥物偶聯(lián)物混合給藥有利于克服腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性MDR，增強(qiáng)藥物抑瘤效果。

簡(jiǎn)介：IIIIITIIIIILLLIIIIIIIY3290604分類號(hào)酸至；鳋學(xué)號(hào)塵Q壘麴2L至南京蔑鼉戈號(hào)全日制專業(yè)學(xué)位碩士學(xué)位論文江蘇地區(qū)豬、禽源大腸桿菌O157的生物學(xué)特性分析及飼料中大腸桿菌0157H7雙重PCR檢測(cè)方法的建立指導(dǎo)教師學(xué)位類別領(lǐng)域名稱研究方向答辯日期陳玲戴建莛熬援獸醫(yī)亟一亟隨盞醫(yī)堂一麴塑佳鎏痘途逝當(dāng)魚瘴三Q盔生五月CHARACTERIZATIONOF五SC日ER圮日Z(yǔ)4C移乙K157FROMPIGANDPOUL月RYINJIANGSUANDDEVELOPMENTOFDUPLEXPCRMETHODFORDETECTINGEC艦R幾刪CD乙Z0157H7INFEEDSBYCHENLINGDIRECTEDBYPROFDAIJIANJUNATHESISSUBMITTEDTONANJINGAGRICULTURALUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEMASTERDEGREEOFVETERINARYMEDICINECOMPLETEDINMAY2016COMMENCEMENTINMAY2016

簡(jiǎn)介：羥基磷灰石HYDROXYAPATITEHA的化學(xué)成分、晶體結(jié)構(gòu)與人體骨組織中的磷酸鈣鹽相似具有優(yōu)異的生物相容性和生物活性是一種極具應(yīng)用潛力的生物活性陶瓷。然而HA的本征脆性及其本征脆性所導(dǎo)致的較差的摩擦磨損性能很大程度上影響了其作為硬組織假體替換材料植入人體后服役的可靠性。所以采取第二相材料對(duì)單相HA進(jìn)行增韌是改善其斷裂韌性、確保其可靠服役的關(guān)鍵。本課題基于石墨烯納米片GRAPHENENANOSHEETSGNSS在力學(xué)性能、生物相容性上的優(yōu)異性能利用GNSS增韌HA制備GNSHA復(fù)合材料。采用超聲結(jié)合表面活性劑分散的方法獲取GNSHA混合粉末材料成分為HA05WT％GNSHA和10WT％GNSHA利用放電等離子燒結(jié)SPARKPLASMASINTERINGSPS技術(shù)制備HAGNSHA復(fù)合材料并對(duì)復(fù)合材料進(jìn)行了物相表征顯微組織形貌觀察力學(xué)性能分析以及相關(guān)生物學(xué)性能評(píng)價(jià)。本研究主要內(nèi)容包括⑴采用X衍射和拉曼光譜研究了SPS燒結(jié)復(fù)合材料的物相組成結(jié)果表明HA在高溫?zé)Y(jié)中沒有發(fā)生嚴(yán)重分解且GNSS的特征結(jié)構(gòu)在燒結(jié)后得以大量保留。顯微組織形貌觀察發(fā)現(xiàn)GNSS在復(fù)合材料中分布較為均勻。⑵采用儀器化微納米壓入儀和顯微硬度計(jì)研究了HA及GNSHA復(fù)合材料的力學(xué)性能如顯微硬度、彈性模量和斷裂韌性。結(jié)果表明10WT％GNSHA的彈性模量和顯微硬度分別比HA的彈性模量和顯微硬度增加了40％和30％且10WT％GNSHA的斷裂韌性增加了80％。分析表明GNS拔出、GNS在晶粒之間的橋接、裂紋橋接、裂紋偏轉(zhuǎn)等是GNSHA復(fù)合材料中的主要增韌機(jī)制。研究中修改了2D應(yīng)力傳遞模型考慮了石墨烯層數(shù)對(duì)GNSHA界面應(yīng)力的影響。同時(shí)修改了拔出模型獲得了GNS拔出的臨界應(yīng)力釋放率計(jì)算表明GNS拔出對(duì)GNSHA復(fù)合材料斷裂韌性的改善具有較大的貢獻(xiàn)。⑶通過研究成骨細(xì)胞貼附、增殖和成骨礦化評(píng)價(jià)GNSHA復(fù)合材料生物學(xué)性能。成骨細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明GNSHA復(fù)合材料表面貼附的成骨細(xì)胞數(shù)量增加且分布更均勻成骨細(xì)胞在GNSHA復(fù)合材料表面的增殖能力也得到提高。研究認(rèn)為GNSS對(duì)GNSHA復(fù)合材料微觀形貌的改變是影響成骨細(xì)胞貼附、增殖行為的主要原因。模擬體液浸泡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明GNSHA復(fù)合材料較HA具有更加優(yōu)異的成骨礦化性能。研究認(rèn)為GNSS的添加改變了材料中鈣離子的溶解速率暴露在模擬體液中的GNSS為磷酸鈣鹽的沉積提供了更多的骨質(zhì)形核質(zhì)點(diǎn)從而改善了HA的成骨礦化能力。⑷研究結(jié)果表明GNSHA復(fù)合材料具有良好的生物力學(xué)性能及優(yōu)異的生物活性是一種具有發(fā)展?jié)摿Φ挠步M織假體替換材料。

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簡(jiǎn)介：在過去十年里，隨著納米材料的快速發(fā)展，納米量子點(diǎn)在腫瘤的診斷與治療、蛋白質(zhì)的標(biāo)記與檢測(cè)等生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中顯示出越來越廣闊的應(yīng)用前景，引起科學(xué)家極大的研究興趣。膠體硫族銀化合物量子點(diǎn)由于其特殊的性質(zhì)，例如高的光穩(wěn)定性、高的膠體穩(wěn)定性和低成本等，因此受到科學(xué)家的廣泛關(guān)注。然而，在有機(jī)相中合成的硫族銀化合物量子點(diǎn)通常是水不溶的，合成步驟復(fù)雜，反應(yīng)條件苛刻，需要通過配體交換進(jìn)行后處理。由于大多數(shù)生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用發(fā)生在水相中，因此合成穩(wěn)定的水溶性量子點(diǎn)是非常重要的。因此，發(fā)展一種溫和簡(jiǎn)便的水相合成方法來制備水溶性的硫族銀化合物量子點(diǎn)仍然面臨著挑戰(zhàn)。另一方面，納米硫化物在太陽(yáng)能電池、鋰離子電池、光學(xué)、磁學(xué)材料等領(lǐng)域也有廣泛的應(yīng)用，在將其用于實(shí)際應(yīng)用之前，需要先評(píng)估它們的環(huán)境健康安全危害，但是，目前有關(guān)這些納米粒子對(duì)人類和環(huán)境安全危害的研究還比較少。在本文中我們選用牛血清白蛋白BSA為有機(jī)基質(zhì)，在水相中用簡(jiǎn)便、可控的仿生合成方法來制備硫化銀、硒化銀和碲化銀量子點(diǎn)，并且研究了其細(xì)胞毒性，以及其在細(xì)胞成像和蛋白檢測(cè)方面的潛在應(yīng)用性。同時(shí)，初步探究了細(xì)胞毒性的本質(zhì)。本論文主要開展了以下幾項(xiàng)工作1BSAAG2S量子點(diǎn)的簡(jiǎn)便合成及其細(xì)胞毒性的研究，并對(duì)其細(xì)胞毒性的本質(zhì)進(jìn)行了初步探究。使用BSA為基質(zhì)，通過簡(jiǎn)便水相合成法合成了BSAAG2S量子點(diǎn)，使用XRD、HRTEM、TGDTA、FTIR、ZETAPOTENTIAL、PL和CLSM等對(duì)樣品進(jìn)行了表征，結(jié)果表明合成了晶型為單斜結(jié)構(gòu)、平均粒徑約為940NM、水溶性的AG2S量子點(diǎn)。表面電勢(shì)為221MV，說明在中性去離子水中AG2S量子點(diǎn)是比較穩(wěn)定的，并且可以觀察到穩(wěn)定的綠色熒光。進(jìn)一步的研究表明樣品具有細(xì)胞毒性，可以特異性地抑制HELA人宮頸癌細(xì)胞、HEPG2人肝癌細(xì)胞和A549人肺腺癌細(xì)胞的增殖，并且這種抑制作用具有濃度依賴性。樣品抑制HELA細(xì)胞、HEPG2細(xì)胞和A549肺腺癌細(xì)胞增殖的半抑制濃度分別為392、457和1610ΜGML。熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)和ICPMS表征結(jié)果說明樣品是通過細(xì)胞攝取起作用，并且，細(xì)胞攝取樣品量的不同是導(dǎo)致樣品對(duì)細(xì)胞抑制作用不同的原因之一。FCM表征結(jié)果說明樣品通過誘導(dǎo)細(xì)胞壞死，從而抑制細(xì)胞增殖。2BSAAG2SE量子點(diǎn)的簡(jiǎn)便合成及其在細(xì)胞成像和蛋白檢測(cè)方面潛在應(yīng)用性的研究。使用BSA為基質(zhì)，通過簡(jiǎn)便水相合成法合成了BSAAG2SE量子點(diǎn)，使用XRD、HRTEM、TGDTA、ZETAPOTENTIAL、PL和CLSM等對(duì)樣品進(jìn)行了表征，結(jié)果表明合成了平均粒徑約為404NM、水溶性的正交相ΒAG2SE。表面電勢(shì)為303MV，說明在中性去離子水中AG2SE量子點(diǎn)具有好的穩(wěn)定性。AGSE量子點(diǎn)的熒光發(fā)射峰分別位于485NM和527NM處，并且，將樣品分散于中性去離子水中時(shí)可以觀察到穩(wěn)定的綠色熒光。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)和ICPMS表征結(jié)果說明樣品具有良好的生物相容性，并且可以被癌細(xì)胞特異性攝取。熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明AG2SE量子點(diǎn)可以用作熒光探針，用于癌細(xì)胞特異性熒光成像。蛋白檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明AG2SE量子點(diǎn)可以粗略用于BSA和HSAV的定量檢測(cè)。3BSAAG2TE量子點(diǎn)的簡(jiǎn)便合成及其細(xì)胞毒性的研究，并對(duì)其細(xì)胞毒性的本質(zhì)進(jìn)行了初步探究。使用BSA為基質(zhì)，通過簡(jiǎn)便水相合成法合成了BSAAG2TE量子點(diǎn)，使用XRD、HRTEM、TGDTA、FTIR、ZETAPOTENTIAL、PL和CLSM等對(duì)樣品進(jìn)行了表征，結(jié)果表明合成了晶型為單斜結(jié)構(gòu)、平均粒徑約為530NM、水溶性的AG2TE量子點(diǎn)。表面電勢(shì)為184MV，說明在中性去離子水中AG2TE量子點(diǎn)是比較穩(wěn)定的，并且可以觀察到穩(wěn)定的綠色熒光。進(jìn)一步的研究表明樣品具有細(xì)胞毒性，對(duì)HELA人宮頸癌細(xì)胞的抑制作用比較大，而對(duì)V794中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞和HEPG2人肝癌細(xì)胞的抑制作用則比較小。熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)和ICPMS表征結(jié)果說明樣品是通過細(xì)胞攝取起作用，并且，導(dǎo)致樣品對(duì)細(xì)胞抑制作用不同的原因之一是細(xì)胞攝取樣品量的不同。

簡(jiǎn)介：CLASSIFIEDINDEXCONFIDENTIALYES／NONOCODE10224NO1106368DISSERTATIONFORTHEMASTERDEGREESCREENINGLNDHARACTERIZATIIMOF；HICKCANCLAARACTERIZAUONCLLICKENSCREENLNGAMINOPEPTIDASENPROTENINAFFINITYPEPTIDESCANDIDATELILANLANSUPERVISORPROFLIGUANGXINGDEGREECATEGORYMASTEROFAGRICULTURECOLLEGECOLLEGEOFVETERINARYMEDICINEFIRSTLEVELDISCIPLINEVETERINARYMEDICINESECONDLEVELDISCIPLINEBASICVETERINARYMEDICINEHARBINCHINAJUNE2014東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文32GAPN基因序列測(cè)定與分析3533雞APN基因的重組原核、真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建、蛋白表達(dá)37331重組質(zhì)粒的構(gòu)建37332原核重組蛋白的表達(dá)38333原核重組蛋白的純化3934多克隆抗體的制備及鑒定39341GAPN多克隆抗血清的效價(jià)測(cè)定39342多克隆抗體的WESTERNBLOT檢測(cè)40343多克隆抗體的IFA檢測(cè)4135噬菌體十二二肽庫(kù)對(duì)GAPN重組蛋白親和配體的生物淘選42351噬菌體十二肽庫(kù)對(duì)GAPN重組蛋白的四輪淘洗42352親和多肽的生物活性檢測(cè)44353親和噬菌體體內(nèi)抗病毒活性464討論5241GAPN基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)5242重組蛋白的純化及生物活性的恢復(fù)5343多克隆抗體的制備及其活性檢測(cè)5444雞氨肽酶N親和肽的篩選與鑒定5445親和噬菌體體內(nèi)抗病毒分析555結(jié)論57弱C謝58參考文獻(xiàn)59攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文65LI