簡介：點擊查看更多HBsAg定量對peg干擾素聯(lián)合LAM治療后持續(xù)性病毒學(xué)應(yīng)答的預(yù)測價值.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：壘塾叢塞亙韭痘查惑簽企昱盟G￡￡基因璽苤貍生塹堂遷盆⑧論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名論文評閱人1萱主強圭堡醫(yī)垣逝江盆厶民醫(yī)院評閱人2董妊圭堡醫(yī)噓逝亞太堂醫(yī)堂院隘屬簋三醫(yī)院評閱人3割盛副圭堡醫(yī)垣浙江太堂醫(yī)堂院隘屬巳膣醫(yī)院評閱人4．評閱人5答辯委員會主席簋拍堊圭絲醫(yī)垣浙江太堂醫(yī)堂院隘屬望膣醫(yī)院委員1胡溘塞圭絲醫(yī)短浙江太堂醫(yī)堂院隘屬望腔醫(yī)院委員2睦建壬主絲醫(yī)垣抗劃立笈二醫(yī)院望膣疊委員3一委員4委員5哪PILRRULFFIRLFRILLIIIFLJLILFLIY1852446學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得塹江太堂或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者鮐莽五叩簽字吼M年朋力日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解浙江太堂．有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)逝江太堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名簽字日期≯，『年象L葉導(dǎo)師簽名三P為月謝簽字日期HIF年≥月／日

簡介：點擊查看更多147例慢性乙型肝炎患者NAs治療中出現(xiàn)病毒學(xué)突破的臨床分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的分析慢性丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUS，HCV感染者基線的肝組織學(xué)活動指數(shù)HISTOLOGICALACTIVITYINDEX，HAI、TREG、TH17細胞及IL28BRS12979860基因型的特點探討三者與抗HCV快速病毒學(xué)應(yīng)答RAPIDVIROLOGICALRESPONSE，RVR可能的相關(guān)性。方法收集2012年8月至2013年6月天津市第三中心醫(yī)院門診診斷的慢性丙型肝炎患者63例，記錄臨床一般情況（年齡、性別、身高、體重、可能的感染途徑、既往病史、既往治療情況）、治療前臨床及影像學(xué)資料（血常規(guī)、肝腎功能、血糖、血脂、甲狀腺功能、抗核抗體、HCVRNA載量、HCV基因分型、IL28BRS12979860基因型、肝膽胰脾及雙腎B超）。留取63例HCV感染者及同期健康體檢者新鮮外周血標本。按患者意愿行肝穿活檢組織檢查者33例，留取標本。所有標本取材均通過我院倫理委員會審核，家屬知情同意并簽字。所有患者接受標準療法STARDOFCARE，SOC抗HCV治療，定期隨訪。應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測63例慢性丙型肝炎CHRONICHEPATITISC，CHC患者外周血CD3T、CD4T、CD8T、CD4CD25FOXP3TREG細胞頻率，并與23例健康對照HEALTHYCONTROL，HC進行比較。通過肝穿刺組織HE染色HAEMATOXYLINEOSINSTAIN評價HAI、肝臟炎癥壞死分級GRADE，G及纖維化分期STAGE，S。免疫組織化學(xué)染色法IMMUNOHISTOCHEMISTRY，IHC標記肝穿組織中FOXP3TREG細胞、IL17TH細胞TH17細胞。結(jié)果1CHC組外周血CD4T、CD4CD8、CD4CD25FOXP3TREG細胞頻率分別為2816±8295％、087±0392％、683±2209％，均高于HC組的2357±5492％、060±0120％、486±0740％P＜005，差異有統(tǒng)計學(xué)意義CHC組外周血CD3T、CD8T細胞頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。2基線HCVRNA載量與浸潤肝組織的TREG細胞低度正相關(guān)R0353，P0047與HAI、外周血T細胞亞群、浸潤肝組織的TH17細胞、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALANINETRANSAMINASE，ALT水平均無相關(guān)性。3HCV感染者基線ALT水平與浸潤肝組織的TREG細胞呈低度負相關(guān)關(guān)系R0383，P0030與外周血T細胞亞群、浸潤肝臟的TH17細胞及HAI均無相關(guān)性。4HAI與浸潤肝組織的TREG細胞低度負相關(guān)R0443，P0010，與肝組織的TH17細胞低度正相關(guān)R0404，P0020，與外周血T細胞亞群無相關(guān)性。5隨著炎癥壞死分級的增加，肝組織TREG細胞數(shù)逐漸減少，肝組織TH17細胞數(shù)及HAI逐漸增加P＜005）而基線HCVRNA載量、ALT水平及外周血T細胞亞群，在各分級均無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞005）。6隨著纖維化分期的增加，HAI逐漸升高P＞005）。肝組織TH17細胞在S1期1918±10597HPF低于S2與S3期，而在S2與S3期無明顯差異2800±14830HPFVS2678±15903HPF?；€HCVRNA載量、血清ALT水平、外周血T細胞亞群、肝組織TREG細胞在不同肝組織纖維化分期中，均無統(tǒng)計學(xué)差異P＞005。7基線HCVRNA、ALT、HAI、T細胞頻率，在脂肪變組與無脂肪變組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005）。8IL28BRS12979860CC型與CT型相比，血清ALT水平、體重指數(shù)BODYMASSINDEX，BMI、胰島素抵抗指數(shù)HOMEOSTATICMODELASSESSMENTOFINSULINRESISTANCE，HOMAIR、外周血CD3T、CD4T、CD8T細胞頻率、CD4CD8比值、CD4CD25FOXP3TREG細胞頻率，HAI、炎癥壞死分級、纖維化分期、HCVRNA病毒載量、肝組織TREG細胞及TH17細胞，均無統(tǒng)計學(xué)差異，P＞005。9基線HCVRNA載量、HOMAIR、HAI是慢性HCV感染者SOC治療達到RVR的獨立影響因素血清ALT水平、外周血T細胞亞群的頻率、肝組織TREG、TH17細胞及TREGTH17比值在RVR組與NRVR組間，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論浸潤肝組織的TREG及TH17細胞與慢性HCV感染者肝組織的炎癥有關(guān)，TH17細胞與較重的肝組織纖維化有關(guān)。基線HCVRNA載量、HOMAIR、HAI是快速病毒學(xué)應(yīng)答的獨立影響因素。IL28BRS12979860基因型與血清ALT水平、HCVRNA載量、肝組織炎癥壞死、纖維化程度及RVR均無明顯相關(guān)性。

簡介：目的探討恩替卡韋治療慢性乙型肝炎（CHB）患者發(fā)生病毒學(xué)突破的相關(guān)危險因素。方法收集263例CHB感染者使用恩替卡韋（ETV）治療患者的病歷資料，做回顧性調(diào)查并分析患者的生化、病毒學(xué)、用藥史、依從性等指標是否影響病毒學(xué)突破的發(fā)生，并分析相關(guān)指標與ETV病毒學(xué)突破的關(guān)聯(lián)。結(jié)果263例患者，經(jīng)過24個月的隨訪觀察，24例發(fā)生病毒學(xué)突破，突破發(fā)生率為913％。其中HBEAG陽性和陰性病毒學(xué)突破率分別為1118、538，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0118）；既往有LAM使用史和無LAM使用史病毒學(xué)突破發(fā)生率分別為1495，513，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0007）；ETV10MG、05MG病毒學(xué)突破率分別為741，932，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P1000）；有肝硬化和無肝硬化患者病毒學(xué)突破發(fā)生率分別為1563，704，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0038）；依從性差和依從性好的患者病毒學(xué)突破發(fā)生率分別為2941，611，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0000）；ETV初治時ALT低中高三個水平組病毒學(xué)突破發(fā)生率分別為1024，648，1429，三個水平組之間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005）；ETV初治時HBVDNA低中高水平組病毒學(xué)突破發(fā)生率分別為506、556、1842，低中水平組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005），低、高水平組和中、高水平組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）。治療6個月時HBVDNA轉(zhuǎn)陰率越高，病毒學(xué)突破發(fā)生率越低。既往有拉米夫定（LAM）使用史的患者治療12個月時病毒學(xué)突破發(fā)生率為280，治療24個月時累積發(fā)生率為1495，發(fā)生病毒學(xué)突破的平均時間為（1988±476）個月；而初治時使用ETV在治療12個月時病毒學(xué)突破發(fā)生率為064，治療至24個月時發(fā)生率為513。結(jié)論既往有LAM使用史、ETV初治時HBVDNA＞107COPIESML、有肝硬化、依從性差是恩替卡韋發(fā)生病毒學(xué)突破的危險因素；治療6個月時HBVDNA轉(zhuǎn)陰率越高，病毒學(xué)突破發(fā)生率越低；既往有LAM使用史的患者較ETV初治的患者病毒學(xué)突破發(fā)生率高。

簡介：研究目的通過回顧性調(diào)查分析，評估本檢測中心澳門公共衛(wèi)生化驗所10年來的病毒性肝炎包括甲、乙、丙、丁、戊型肝炎、TCH和HIV等傳染病的血清學(xué)檢測結(jié)果，探討病毒性傳染病在本地區(qū)流行感染情況，為加強對澳門地區(qū)傳染病的防治和優(yōu)生優(yōu)育對策提供科學(xué)理論依據(jù)。研究方法根據(jù)本中心的記錄，將這些檢測結(jié)果分別進行分類統(tǒng)計，按年份、年齡、性別、檢驗結(jié)果等參數(shù)進行分析部分指標的檢出率針對職業(yè)進行比較。血清學(xué)的檢測方法包括肝炎病毒標記物、TCH及HIV抗體采用ELISA方法，梅毒抗體采用RPR、TPHA及FTAABS方法，沙眼衣原體DNA和淋病雙球菌DNA之檢測采用PCR方法其他傳染病的抗體檢測則采用

簡介：研究背景我國是世界上乙肝病毒感染的高度流行區(qū)之一，人群中慢性HBSAG攜帶率約為10％，導(dǎo)致了嚴重的公共衛(wèi)生問題。我國的慢性HBSAG攜帶者有30％～50％是由于圍產(chǎn)期的母嬰傳播造成的。隨著乙肝疫苗和乙肝免疫球蛋白在新生兒中普及應(yīng)用，已使約90％以上的圍產(chǎn)期母嬰傳播得以阻斷，但仍有5％～10％的嬰兒免疫阻斷失敗，宮內(nèi)感染是其主要原因之一。因此弄清宮內(nèi)HBV感染機制及危險因素，明確嬰兒出生后乙肝病毒標志物的動態(tài)變化，對我國HBV感染的進一步控制有著重要的意義。研究目的1通過病例對照研究進一步探討新生兒出生時HBSAG陽性的危險因素。2通過隨訪研究了解新生兒外周血清HBSAG、HBEAG的動態(tài)變化，探討其臨床和流行病學(xué)意義。研究方法1從2002年12月至2005年10月在陜西省婦幼保健院連續(xù)收集HBSAG陽性的326例孕婦及其335例新生兒為研究對象，以外周血HBSAG陽性的新生兒為病例組，余為對照組，收集孕婦孕前、孕期及產(chǎn)時的醫(yī)學(xué)事件；采集孕婦及新生兒外周血，檢測他們外周血清中的HBVM，采用單因素分析、多因素LOGISTIC回歸分析等統(tǒng)計方法進行新生兒出生時HBSAG陽性危險因素的病例對照研究。2同時，以上述研究對象的前251例HBSAG陽性母親的260例嬰兒為隨訪對象，觀察嬰兒1年中血清HBSAG、HBEAG的動態(tài)變化。3血清學(xué)指標檢測方法母親血清HBSAG、HBEAG采用ELISA法檢測；新生兒血清HBSAG采用化學(xué)發(fā)光法檢測，抗HBS、HBEAG采用ELISA法檢測；隨訪嬰兒血清HBSAG、抗HBS、HBEAG采用ELISA法檢測；母親及新生兒血清HBVDNA采用PCR法檢測。研究結(jié)論1孕婦HBEAG陽性、HBVDNA陽性、孕中期性行為是新生兒出生時HBSAG陽性的危險因素。2母親HBEAG可經(jīng)胎盤被動傳遞給胎兒，且會在一定時間內(nèi)逐漸轉(zhuǎn)陰，故不可作為HBV宮內(nèi)感染的診斷指標。新生兒外周血HBSAG大多數(shù)很有可能是在生產(chǎn)時從母血瞬間進入胎兒體內(nèi)而獲得，因為80％以上新生兒的HBSAG均在隨訪中轉(zhuǎn)陰，因此對出生時HBSAG陽性新生兒生后1年內(nèi)的隨訪可能是判斷其是否發(fā)生HBV宮內(nèi)感染的更為可靠的方法。

簡介：點擊查看更多傳染性胰腺壞死病毒VP2--VP3虹鱒腸道乳桿菌表達系統(tǒng)的免疫學(xué)評價.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文嬰幼兒輪狀病毒腹瀉臨床流行病學(xué)研究姓名沈蕙申請學(xué)位級別碩士專業(yè)流行病學(xué)與衛(wèi)生統(tǒng)計指導(dǎo)教師徐勇20030501嬰幼兒輪狀病毒腹瀉臨床流行病學(xué)研究中文摘要母乳喂養(yǎng)可減少嬰兒期輪狀病毒腹瀉，輪狀病毒腹瀉患兒如出現(xiàn)血性腹瀉或腹痛，其病程較無血性腹瀉或腹痛者長。關(guān)鍵詞嬰幼兒；腹瀉；輪狀病毒；分型；流行狀況；影響因素LI作者沈蕙指導(dǎo)老師徐勇

簡介：目的建立HPEV的實驗室檢測方法，在住院腹瀉患兒和無癥狀兒童中開展HPEV的檢測工作，初步掌握HPEV在蘭州地區(qū)住院腹瀉患兒和無癥狀兒童中的流行特征；探討不同HPEV基因型與急性胃腸炎之間的關(guān)系，為進一步揭示和闡明嬰幼兒重癥腹瀉的病因構(gòu)成及HPEV的病原學(xué)特點奠定基礎(chǔ)。方法研究對象選自2006年7月至2007年6月間，蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒科因重癥腹瀉而住院的286名5歲以下兒童作為病例組；以及蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒童體檢中心同期進行例行體檢的98名無臨床癥狀的5歲以下兒童作為對照組，進行病例對照研究。蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒科負責(zé)收集每位研究對象的糞便標本并填寫相關(guān)標本采集表后低溫運送至中國CDC病毒所。糞便標本經(jīng)提取核酸后通過REALTIMERTPCR檢測HPEV。隨機選取一例HPEV陽性標本的REALTIMERFPCR產(chǎn)物經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄成RNA標準品，用以對HPEV核酸濃度進行定量。使用基于VP3VP1基因連接區(qū)的兩對引物進行巢式RTPCR擴增，通過對擴增產(chǎn)物進行測序分型。使用MEGA31序列分析軟件對測序結(jié)果進行基因序列分析和繪制系統(tǒng)進化樹；采用SPSS130統(tǒng)計分析軟件對研究結(jié)果和臨床資料進行統(tǒng)計分析。結(jié)果在本研究中，共檢出HPEV陽性標本99例，其中病例組檢出84例，檢出率為294％84286；對照組檢出15例，檢出率為153％1598。在病例組84例HPEV陽性標本中，HPEV1共發(fā)現(xiàn)43例，占512％，其余分別為HPEV3，25例298％，HPEV4，4例48％，HPEV6，2例24％，HPEV8，1例12％，未分型標本，9例107％；在對照組15例HPEV陽性標本中，HPEV1共發(fā)現(xiàn)8例，占533％，其余分別為HPEV3，3例200％，HPEV4，3例200％，HPEV5，1例67％。HPEV2和HPEV7均未檢測到。HPEV1感染好發(fā)于秋冬季節(jié)，HPEV3感染好發(fā)于秋季；與HPEV1和HPEV3感染患兒年齡相比，HPEV4感染患兒年齡較小。病例組中714％6084的HPEV感染患兒為混合感染，對照組中HPEV感染患兒混合感染率為133％215，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義P＜005，輪狀病毒和人杯狀病毒為最常見的混合感染病毒。病毒載量最高的兩份HPEV陽性標本均為對照組兒童，病例組和對照組間HPEV1、3、4基因型病毒載量差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。VP3VP1基因進化分析發(fā)現(xiàn)，有一份毒株N049330無法被分型，它與相臨參考株的氨基酸同源性分別為8941％和6744％。對不同組間臨床癥狀比較發(fā)現(xiàn)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005，HPEV1和HPEV3感染并不能加重腹瀉患兒的臨床癥狀。結(jié)論HPEV在蘭州地區(qū)腹瀉住院患兒和無癥狀兒童糞便標本中的檢出率均較高，且有多種基因型在流行。研究結(jié)果提示，HPEV1和HPEV3可能并不是5歲以下兒童胃腸炎的致病原。因此，推測HPEV1和HPEV3可能是胃腸道GASTROINTESTINAL，GI中的機會性致病原，當機體感染其他病毒時才被激活而致病。

簡介：研究背景登革病毒DENGUEVIRUS，DENV是單股正鏈RNA病毒，屬于黃病毒科、黃病毒屬。DENV包含4個血清型DENV1，DENV2，DENV3和DENV4。DENV的感染可引起一系列的臨床癥狀，包括登革熱DENGUEFEVER，DF和登革出血熱DENGUEHEMRHAGICFEVER，DHF登革休克綜合征DENGUESHOCKSYNDROME，DSS。以蚊媒為主要傳播媒介的DENV廣泛流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)。近20年來，隨著全球氣候變暖和全球化帶來的人口流動性增加，DENV的暴發(fā)和流行更為頻繁。中國的臺灣、海南、福建、廣東、廣西和浙江等沿海省份均為DENV的流行地區(qū)。廣州近幾年的登革疫情呈高發(fā)態(tài)勢。目前，世界上尚無可有效預(yù)防登革熱的疫苗和相應(yīng)的治療藥物。利用釀酒酵母表達系統(tǒng)生產(chǎn)的HBSAG和HPV顆粒疫苗的成功上市提示開發(fā)安全高效的DENV的病毒樣顆粒VIRUSLIKEPARTICLESVLPS疫苗具有廣闊的應(yīng)用前景。以DENV為代表的黃病毒VLPS是指通過在體外表達系統(tǒng)表達PRM和E蛋白而組裝成的，具有與病毒粒子類似的空間結(jié)構(gòu)且不含病毒核酸的空心顆粒。由于VLPS保留了與天然病毒粒子類似的空間構(gòu)型和誘導(dǎo)中和抗體的抗原表位，因此VLPS不但能誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫，而且可以激發(fā)CD4T細胞的增殖和CTL反應(yīng)CYTOTOXICTLYMPHOCYTE。VLPS被認為是預(yù)防黃病毒感染的有效的、潛在的亞單位疫苗候選。目的利用含GAPGLYCERALDEHYDE3PHOSPHATEDEHYDROGENASE啟動子的畢赤酵母組成性表達系統(tǒng)表達編碼DENV2PRM和E蛋白的融合基因，在成功獲得DENV2VLPS的同時實現(xiàn)VLPS在該系統(tǒng)中的連續(xù)和高效表達。最后對VLPS的免疫原性和免疫保護性進行研究，為開發(fā)四價的DENV病毒樣顆粒疫苗奠定基礎(chǔ)。方法首先，通過分子遺傳進化分析選擇具有代表性的DENV2流行株作為研發(fā)顆粒疫苗的候選株；利用RTPCR的方法從病毒上清中擴增DENV2的PRM和E基因；設(shè)計并構(gòu)建含全長的E蛋白的PRME與含截去E蛋白TM2跨膜域的PRME472，分析TM2的缺失對E蛋白分泌水平和VLPS組裝的影響；利用在PRM的N末端分別引入PRM信號肽和Α信號肽以探索VLPS的高水平分泌表達。然后，將構(gòu)建好的重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，經(jīng)PCR、酶切和測序鑒定正確后，將重組載體轉(zhuǎn)化畢赤酵母；將PCR鑒定正確的酵母克隆進行發(fā)酵表達；將發(fā)酵上清和細胞裂解液分別進行SDSPAGE和WESTERNBLOTTING檢測；并分析目的蛋白的連續(xù)性表達情況；利用發(fā)酵上清進行血凝實驗檢測VLPS的分泌情況；利用蔗糖梯度離心的方法從細胞裂解液中分離純化細胞內(nèi)的VLPSINTRACELLULARVLPS，利用超濾濃縮的方法純化上清的VLPSSECRETEDVLPS。通過電子顯微鏡技術(shù)檢測VLPS的結(jié)構(gòu)以及在細胞內(nèi)的組裝特征。最后，將純化到的VLPS免疫BALBC小鼠，通過ELISA測定血清中特異性抗體的滴度；利用免疫熒光技術(shù)和體外中和試驗檢測VLPS的免疫反應(yīng)性和中和抗體的滴度；對免疫鼠進行攻毒實驗，評價VLPS能否誘導(dǎo)免疫記憶。結(jié)果1分子遺傳進化分析結(jié)果表明，本實驗室分離的DENV2ZS0101株在進化樹上與廣東省2001株的DENV2流行株，以及菲律賓19982001年的DENV2流行株比鄰，在基因分型上都屬于全球流行COSMOPOLITAN基因型。因此，選取DENV2ZS0101株作為DENV2病毒顆粒疫苗的候選株具有廣泛的代表性。2本研究成功構(gòu)建了以下3種重組表達質(zhì)粒，包括含PRM信號肽和全長E蛋白的PGAPASPRME；含PRM信號肽和截去E蛋白TM2端的PGAPASPRME472；含Α信號肽和全長E蛋白的PGAPΑAPRME；并將重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)化畢赤酵母X33，獲得了重組表達克隆。3通過SDSPAGE和WESTERNBLOTTING檢測發(fā)現(xiàn)E蛋白分別在含PRM信號肽和Α信號肽的引導(dǎo)下分泌到上清中。PRM信號肽的分泌效率高于Α信號肽。同時，與全長的E蛋白相比，缺失TM2端的E蛋白的分泌水平并不沒有得到明顯的提高。研究結(jié)果還表明含GAP啟動子的組成性表達系統(tǒng)能連續(xù)性和高效表達E蛋白。4在含PRM信號肽重組子的表達上清中檢測到了血凝活性。說明PRM信號肽能有效的引導(dǎo)VLPS分泌到上清。且TM2端的缺失不會影響病毒顆粒的組裝。5通過蔗糖密度梯度離心，分離到了大小分別為30NM和55NM的DENVVLPS。并通過透射電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)這兩種VLPS在酵母細胞內(nèi)的組裝特征與DENV病毒感染細胞中類似。6通過免疫電鏡觀察，在含PRM信號肽的重組子的發(fā)酵上清濃縮液中檢測到了30NM的VLPS，說明VLPS可以被PRM信號肽有效的引導(dǎo)分泌到上清中。7ELISA檢測抗體滴度表明VLPS能誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了高水平的的特異性抗體，最高滴度達到了110000。免疫熒光結(jié)果表明將VLPS免疫血清稀釋1280倍后，仍在DENV2感染的C636細胞漿內(nèi)檢測到了強烈的熒光信號。8體外中和試驗表明，VLPS免疫血清能有效的中和DENV2NGC株對C636細胞的感染，中和滴度與滅活的DENV2免疫血清相同，均為145。攻毒后VLPS免疫鼠的中和抗體滴度有了很大的提升，達到了1100。免疫結(jié)果提示VLPS能誘導(dǎo)BALBC鼠產(chǎn)生免疫記憶反應(yīng)。結(jié)論1DENV2ZS0101株屬于全球流行基因型，可作為登革病毒樣顆粒疫苗的候選株。2首次利用畢赤酵母非甲醇誘導(dǎo)表達系統(tǒng)成功的高水平表達了DENV2VLPS。并在發(fā)酵上清中檢測到了VLPS的分泌，為VLPS后續(xù)的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。3首次在酵母表達系統(tǒng)中表達并分離到了兩種大小分別為30NM和55NM的DENV2VLPS。并利用透射電鏡技術(shù)發(fā)現(xiàn)DENVVLPS在酵母細胞中的組裝特征與病毒感染細胞類似。研究結(jié)果提示組成型表達DENVVLPS酵母系統(tǒng)或許可以作為研究登革病毒組裝和感染的理想模型。4通過免疫實驗證實DENV2VLPS具有良好的免疫原性，免疫反應(yīng)性和體外中和病毒的能力。免疫結(jié)果初步提示VLPS能誘導(dǎo)免疫鼠產(chǎn)生免疫記憶反應(yīng)。

簡介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文廣東鼻咽癌相關(guān)EB病毒BZLF1基因的突變分析及初步的功能學(xué)研究姓名徐金芬申請學(xué)位級別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師賈衛(wèi)華20080527廣東鼻咽癌相關(guān)EB病毒BZLFL基因的突變分析及初步的功能學(xué)研究腫瘤中，體內(nèi)和體外實驗均表明由BZLFL或BRLFL基因啟動的EB病毒的少量裂解復(fù)制可以通過促進血管內(nèi)皮生長因子VASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTOR，VEGF的生成促進腫瘤的生長；但在C18鼻咽癌腫瘤細胞中注入BZLFL或BRLFL的腺病毒表達載體誘導(dǎo)EB病毒進行大量裂解復(fù)制時卻可以顯著抑制裸鼠腫瘤的生長。BZLFL基因在鼻咽上皮細胞癌變的過程中究竟扮演什么角色目前尚不清楚，作為引發(fā)EB病毒裂解復(fù)制的必需基因，它在朗病毒與鼻咽癌的相關(guān)分子機制中可能起著極其重要的作用，對它的深入研究也是非常有意義的。為了深入研究EB病毒與鼻咽癌的關(guān)系，本課題組從廣東鼻咽癌患者中成功分離一株高致瘤朗病毒亞型GDL并完成其全基因組測序工作，GDL株與原型B958株相比，存在43個位點的缺失，44個位點的插入以及1413個位點的變異。GDL株來源于鼻咽癌患者且在廣東鼻咽癌患者中具有高度的代表性，它為EB病毒與鼻咽癌相關(guān)的分子機制研究提供了較好的模板。我們對GDL株髓病毒裂解期立早基因BZLFL簡稱為GDL型BZLFL基因的序列比對結(jié)果顯示，相對原型B958株，GDL型BZLFL基因的3個外顯子和2個內(nèi)含子中共存在30個點突變，3個單堿基缺失和1個單堿基插入。鑒于以上研究結(jié)果，我們決定對GDL型BZLFL基因編碼區(qū)的變異位點進行頻率調(diào)查，同時對多位點進行連鎖變異分析，探討GDL型BZLFL基因在廣東鼻咽癌患者中是否具有代表性；另外通過對GDL型BZLFL基因初步的功能學(xué)研究分析這些變異位點對BZLFL基因的功能影響，進一步探討B(tài)ZLFL基因在EB病毒與鼻咽癌相關(guān)的分子機制中可能起到的作用。2研究方法21耶病毒GDL型BZLFL基因的突變分析方法采集研究對象的漱口水標本并提取DNA，漱口水標本包括廣東鼻咽癌患者192例，廣東健康人群197例和河南健康人群128例，另有鼻咽癌組織DNA標本54例，利用巢式PCR方法擴增BZLFL基因的特定片斷每個片斷上都分布有多個突變位點，將PCR產(chǎn)物直接測序，用DNASTAR序列分析軟件分析校讀測序結(jié)果。分析校讀測序結(jié)果后篩選出可以得到BZLFL基因序列全長的標本。通過對BZLFL基因編碼區(qū)的18個變異位點在廣東鼻咽癌患者和廣東，河南健康人群中的單點變異及多位點連鎖變異分布頻率的調(diào)查分析GDL型BZLFL基因與鼻咽癌的相關(guān)關(guān)系。1L

簡介：目的血液制品的補充是圍手術(shù)期及創(chuàng)傷救治的重要措施之一。普通新鮮冰凍血漿中某些未能檢測到的病毒如疾病的窗口期輸注到病人體內(nèi)可能造成輸注者感染病毒。有機溶劑表面活性劑SD處理法能有效地殺滅血漿中的脂包膜病毒。SDP雖然已成功地應(yīng)用于臨床，但其臨床救治效果、適應(yīng)癥、安全性及臨床副作用仍需進一步的臨床驗證。本研究著重探討SD血漿輸注后對機體凝血、纖溶功能及血液流變學(xué)影響，以便為臨床應(yīng)用提供指導(dǎo)作用。方法接受四肢、脊柱手術(shù)，并估計失血量在500ML以上的擇期手術(shù)病人，60例，病人年齡在1860歲。分段隨機法隨機分為三組SD血漿組SDP組，N20、普通新鮮冰凍血漿組FFP組，N20、10％羥乙基淀粉組HES組，N20。所選擇病例均采取全身麻醉方式，術(shù)中連續(xù)監(jiān)測直接橈動脈血壓、心電圖、脈搏氧飽和度、呼末二氧化碳分壓、間斷監(jiān)測中心靜脈壓。在失血量達400500ML時開始在各組輸注實驗藥物，輸注量為810MLKG，在60MIN內(nèi)輸注完畢，術(shù)中根據(jù)HCT考慮是否輸注紅細胞。在兩種血漿輸注后留取少量血漿標本；各組在輸注試驗藥物前、輸注完畢后60MIN、輸注完畢后120MIN采集血樣。檢測凝血相PT、APTT、TT、INR、FIB、TEG、血小板計數(shù)、ATⅢ抗凝血酶Ⅲ、蛋白C、D二聚體、TPA組織纖溶酶原激活劑、PAI纖溶酶原激活抑制物含量以及全血高切黏度、低切黏度、血漿黏度、紅細胞聚集指數(shù)、變形指數(shù)、剛性指數(shù)、紅細胞壓積以及病毒學(xué)檢測甲肝抗體、乙肝表面抗原、丙肝抗體、愛滋病抗體、梅毒抗體。采用SPSS110軟件對各組間進行重復(fù)測量的方差分析法處理，P＜005有顯著性差異，P＜001有非常顯著性差異。結(jié)果1凝血相及TEG檢測常規(guī)的凝血相檢查在三組病人輸注前后均無明顯變化P＞005。三組病人在輸注后均朝著凝血速度加快的有利方向發(fā)展，R、K、ANGLE值在輸注血漿組SDP、FFP及血漿代用品組HES均呈現(xiàn)出相似的變化P＜005；輸注SDP及FFP后，血凝塊的強度和血栓的穩(wěn)定性均有不同程度的提高MA值明顯升高P＜005，HES組則在輸注后明顯下降P＜001。2輸注HES后體內(nèi)蛋白C及ATⅢ含量在輸注后有不同程度的下降P＜005。SDP組在輸注后血漿內(nèi)蛋白C含量也呈現(xiàn)明顯下降趨勢P＜005，而FFP組輸注前后無差異性改變P＞005。ATⅢ在兩組輸注血漿的病例中顯示無明顯改變P＞005。3D二聚體SDP組、FFP組于輸注后呈明顯增高趨勢P＜005；HES組輸注前后無明顯改變P＞005。TPASDP組、FFP組在輸注后逐漸增高，直至輸注后120MIN較輸注增高明顯P＜005；HES組輸注后60MIN明顯下降P＜005，而在120MIN后恢復(fù)至輸注前水平P＞005。PAI1FFP組輸注前后均無明顯改變P＞005，SDP組在輸注后120MIN升高明顯P＜001；HES組在輸注后60MIN，120MIN明顯升高P＜001。4血液流變學(xué)全血高切黏度HBV、全血低切黏度LBVFFP組輸注前后均無明顯改變P＞005；SDP組于輸注后120MIN較輸注明顯降低P＜005；HES組輸注后60MIN，120MIN明顯低于輸注前P＜005。血漿黏度PV各組在輸注前后均無前明改變P＞005。紅細胞壓積HCTSDP組、FFP組輸注前后均無明顯改變P＞005；HES組輸注后明顯下降P＜001。紅細胞聚集指數(shù)AISDP組及HES組輸注后60MIN120MIN較輸注前均有明顯下降P＜005，F(xiàn)FP組輸注前后均無明顯改變P＞005。紅細胞變形指數(shù)DI、及紅細胞剛性指數(shù)RI各組在輸注前后均無明顯改變P＞005。5病毒學(xué)檢測所有輸注血漿的病例于輸注后均無新的病毒感染證據(jù)。結(jié)論1血漿進行病毒滅活處理與否，輸注后對機體血凝塊的強度和血栓的穩(wěn)定性均有不同程度的提高；但輸注羥乙基淀粉后，血凝塊的強度及血栓的穩(wěn)定性有所下降。2SDP及FFP輸注后機體抗凝血功能優(yōu)于HES組，二者效果相似。3SDP對于維持機體失血后凝血與纖溶功能的平衡，防止凝血物質(zhì)過度消耗上較FFP及HES更為理想。4SDP輸注后可降低血液黏度及紅細胞聚集能力，改善血液流變學(xué)特性效果與HES相似均優(yōu)于FFP組。5安全性及臨床副作用SD血漿輸注后無新的病毒感染證據(jù)，臨床副作用與新鮮冰凍血漿相似。經(jīng)病毒滅活的SD血漿在安全性方面更優(yōu)于新鮮冰凍血漿。

簡介：目的制造兔椎間盤退變模型；應(yīng)用腺相關(guān)病毒ADENOASSOCIATEDVIRUS，AAV介導(dǎo)人轉(zhuǎn)化生長因子Β1HUMANTRANSFMINGGROWTHFACTΒ1，HTGFΒ1、HTGFΒ3基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔退變椎間盤，觀察目的基因的表達以及單基因轉(zhuǎn)染或雙基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染對退變髓核細胞的生物學(xué)作用。方法成年新西蘭大白兔通過注射纖維結(jié)合素片段FIBRONECTINFRAGMENT，F(xiàn)NF制造椎間盤退變模型，造模后2、4、8、12周分別進行影像學(xué)、形態(tài)學(xué)、組織學(xué)檢測，觀察造模椎間盤變化。將造模成功動物隨機分為4組，各組分別于造模髓核內(nèi)注射RAAV2HTGFΒ1、RAAV2HTGFΒ3、RAAV2HTGFΒ1RAAV2HTGFΒ3、RAAV2EGFPENHANCEDGREENFLUESCENTPROTEIN，EGFP，自身對照組椎間盤內(nèi)注射磷酸鹽緩沖液PBS。手術(shù)后4、8、12周時，收獲各組髓核組織作組織培養(yǎng)或裂解，蛋白多糖的合成由35S硫酸鹽結(jié)合率來測定，免疫印跡WESTERNBLOT法檢測髓核Ⅱ型膠原的含量。分別于術(shù)后1周、12周觀察HTGFΒ1和EGFP的表達。結(jié)果1退變椎間盤內(nèi)注射RAAV2HTGFΒ11周后，髓核中HTGFΒ1含量較注射PBS椎間盤顯著增多；注射RAAV2EGFP椎間盤，術(shù)后12周仍可觀察到EGFP的表達。2基因轉(zhuǎn)染后4周、8周、12周，轉(zhuǎn)染。RAAV2HTGFΒ1組、RAAV2HTGFΒ3組和雙基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染組髓核組織Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達均較自身PBS組增高，各組均有顯著差異。轉(zhuǎn)染RAAV2EGFP組同自身對照PBS組比較沒有顯著差異；3造模后4、8、12周，雙基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染組椎間盤Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達高于單基因轉(zhuǎn)染椎間盤，有顯著差異。結(jié)論RAAV2介導(dǎo)的HTGFΒ1和HTGFΒ3轉(zhuǎn)染退變的椎間盤髓核細胞后，HTGFΒ1和HTGFΒ3可持續(xù)表達12周，并可有效的促進退變椎間盤蛋白多糖和Ⅱ型膠原的合成；雙基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染具有協(xié)同效應(yīng)。

簡介：背景和目的全球每年約5％10的成年人和200的兒童被流感病毒感染。病毒的不斷進化可致疫苗保護性下降甚至失效，產(chǎn)生抗藥毒株。除季節(jié)性流感，過去已發(fā)現(xiàn)大量禽流感感染人類并引起嚴重疾病如H5N1、H7N9、H10N8和H5N6等。兒童是感染流感的高危人群之一，且可傳染成人看護者，因此在兒童中監(jiān)測流感對防控流感有重要意義。本研究旨在監(jiān)測汕頭兒童中流感流行活動及H3N2和H7N9的分子變異特征和進化規(guī)律。方法使用RTPCR（逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)）對ILI標本進行流感分型。在某些情況下，用MDCK細胞分離病毒，對比RTPCR與細胞分離法在流感檢出效率上的差異。選出陽性標本測序，分析分子變異特征和進化規(guī)律。比較不同流感患者的人口統(tǒng)計學(xué)和臨床特征。為了解H7N9的傳播途徑，還在本地菜市場活禽中開展了小規(guī)模采樣監(jiān)測。結(jié)果流感在汕頭幾乎全年流行。甲型H1N1和H3N2基本處于此消彼長的形態(tài)。2014年夏出現(xiàn)抗原性漂移的H3N2毒株。檢出一例兒童H7N9輕癥，和汕頭報導(dǎo)的4例重癥H7N9的病毒基因組各片段的進化距離都非常近。未出現(xiàn)人傳人的突變組合和神經(jīng)氨酸酶抑制劑耐藥性的突變，但有優(yōu)先結(jié)合SAΑ26GAL受體的突變（HAT160A、Q226L和T221P），抗離子通道抑制劑類藥物的突變（M2S31N和V27I）和在小鼠感染中增強毒力的突變（M1N30D和T215A，NS1A42S，NA6973位缺失），然而能在小鼠感染中增強病毒復(fù)制能力的兩個氨基酸位點保守未變PB2E627和D701。活禽市場同時檢出H7N9和H9N2。≥6歲更易感染流感；結(jié)論1流感在汕頭幾乎全年流行。甲型H1N1和H3N2基本處于此消彼長。22014年夏發(fā)現(xiàn)抗原性漂移的H3N2毒株，對20142015和20152016年疫苗的保護性均具挑戰(zhàn)。3不同型流感患者在人口統(tǒng)計學(xué)和臨床特征上的某些顯著性差異，可為醫(yī)生診斷、治療流感提供參考。4在汕頭兒童普通流感監(jiān)測中成功篩查出輕癥病例，說明在兒科普通流感監(jiān)測中檢測H7N9十分必要。5人感染H7N9的威脅仍來自環(huán)境。H7N9和H9N2在禽類中仍在進行內(nèi)部基因交換。但該時期汕頭的H7N9基因多樣性還比較穩(wěn)定。