簡介：目的為了了解內(nèi)蒙古不同地區(qū)、不同人群中乙肝的流行狀況，特別是實(shí)施大規(guī)模乙肝疫苗接種后的效果，開展此次全區(qū)范圍的乙肝血清學(xué)調(diào)查。通過本實(shí)驗(yàn)可以初步了解內(nèi)蒙古地區(qū)的乙肝病毒HBV基因型分布特點(diǎn)，為推測乙肝的流行趨勢提供數(shù)據(jù)資料。方法在內(nèi)蒙古地區(qū)12個(gè)盟市，采用多階段抽樣方法，在161歲常住人口選取1～6歲、7～16歲、17～61歲三個(gè)年齡組，共采集血清樣本4021份。統(tǒng)一用ELISA方法檢測乙肝表面抗原HBSAG、乙肝病毒表面抗體HBSAB、乙肝病毒核心抗體HBCAB，對(duì)HBSAG陽性者再進(jìn)行乙肝病毒E抗原HBEAG和乙肝病毒E抗體HBEAB檢測。并對(duì)46份乙肝大三陽血樣進(jìn)行HBVDNA提取，用PCR實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增提取到的HBVDNAS區(qū)，根據(jù)PCR產(chǎn)物基因測序結(jié)果對(duì)樣本HBV進(jìn)行基因分型。結(jié)果內(nèi)蒙古地區(qū)HBSAG人群總體陽性率271％，比1992年調(diào)查結(jié)果635％有明顯降低。HBV人群總體感染率5364％，比1992年調(diào)查結(jié)果3716％有明顯增高。本實(shí)驗(yàn)共46份樣本血清的PCR體系測序成功。其中B型1例217％，C型43例9348％，D型2例435％未發(fā)現(xiàn)其它HBV的基因型。結(jié)論內(nèi)蒙古地區(qū)不同地區(qū)人群之間的HBSAG陽性率和HBV感染率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001。我區(qū)農(nóng)村是我區(qū)乙肝高流行地區(qū)。針灸、創(chuàng)傷美容這兩個(gè)因素為乙肝感染的危險(xiǎn)因素。1992年前后出生的兩個(gè)人群的HBSAG感染率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001，1992年前后出生的兩個(gè)人群的HBSAB感染率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001，這可以說明1992年內(nèi)蒙古地區(qū)乙肝疫苗納入兒童計(jì)劃免疫管理實(shí)施效果明顯。2002年前后出生的兩個(gè)人群的HBSAG感染率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001，2002年前后出生的兩個(gè)人群的HBSAB感染率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001，這可以說明2002年將乙肝疫苗納入兒童計(jì)劃免疫及GAVI項(xiàng)目實(shí)施效果明顯。內(nèi)蒙古地區(qū)漢族人群中HBV的感染以C基因型HBV為主，B、D基因型HBV各占很少比例，未發(fā)現(xiàn)其他基因型HBV。既本實(shí)驗(yàn)共46份樣本血清的PCR體系測序成功B型1例217％，C型43例9348％，D型2例435％。未發(fā)現(xiàn)其他基因型。

簡介：華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文人乳頭瘤病毒導(dǎo)致子宮頸癌的分子生物學(xué)機(jī)制及其在免疫治療方面的應(yīng)用研究姓名徐茜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師馬丁20060301華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士畢業(yè)論文ABSTRACTOBJECTIVETOCONSTRUCTTHEBACULOVIRUSEXPRESSIONVECTORFORHUMANPAPILOMAVIRUSTYPE16L1GENEANDTRANSFORMTHEBACMIDTOINSECTSF9CELL1INETOEXPRESSHPVI6L1VIRUSLIKEPARTICALS．METHODSTHEHPV～16L1GENEWASAMPLIFLEDBYPCRANDCLONEDINTOPLASMIDPFASTHTB，ANDTHECOMBINANTPLASMIDPFASTHTBHPVL6L1WASTRANSFORMEDTOCOMPETENTCELISDHIOBAC．ATRANSFORMANTCONTAININGTHETARGETGENEWASOBTAINEDANDNAMEDASBACMIDHPVL6L1．A11THECLONINGSTEPSWEREELECTROPHORESEDINEBSTAINED1％AGAROSEGEL．AFTERTRANSFECTINGTHISTRANSFORMANTINTOSF9CELLS．ITSEXPRESSIONINSF9CELLSWASDETECTEDBYSDS～PAGEANDELECTRONMICROSCOPY．RESULTSTHEEXPERIMENTALRESULTSSHOWEDTHATTHERECOMBINANTBUCULOVIRUSWASOBTAINEDANDTHETRANSFORMANTBACMIDHPVL6LLVIRUSLIKEPARTICALSWEREEXPRESSEDININSECTSF9CELLS，THISRECOMBINANTTRANSFORMANTCANBEUSEDASTHEPROTEINACCESSEDHIGHBIOLOGICALEHARAETERISTICSFORTHEFUNCTIONALSTUDYONBACMIDHPVL6LIVIRUSLIKEPARTICALS．KEYWORDSHUMANPAPILLOMAVIRUSTYPE16VIRUSLIKEPARTICALSRACEINE高危型人乳頭瘤病毒HPV如16、18、33、31、58型感染是是富頸癌發(fā)生的主要致病因素，其中HPVL6型感染又占其中的半數(shù)以上，同時(shí)HPV感染可能是宮頸癌年輕化的原因。HPV感染的疾病逐步進(jìn)展到宮頸上皮內(nèi)高度病變和癌癥，需要一個(gè)漫長的過程8～15年，如果在此期間對(duì)其進(jìn)行干預(yù)，可以延緩和阻止病變的進(jìn)一步發(fā)展1。在桿狀病毒一昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的HPV16L1病毒樣顆粒同真正的病毒粒子大小相似，并有較好抗原性，故目前LL自身或L1和L2共同裝配成的VLPS是HPV預(yù)防性候選疫苗的研究熱點(diǎn)2。隨著研究的進(jìn)展，針對(duì)E區(qū)與L區(qū)的不同特點(diǎn)，又發(fā)展出了不同的疫苗3。3

簡介：中南大學(xué)博士學(xué)位論文建立差異磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)平臺(tái)分析EB病毒瘤蛋白LMP1介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路姓名晏光榮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)腫瘤指導(dǎo)教師曹亞20050501博士學(xué)位論文中文摘要為此，我們借助磷酸化蛋白質(zhì)體內(nèi)外富集策略，結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)高通量技術(shù)，鑒定受LMPL調(diào)控的下游功能效應(yīng)蛋白質(zhì)分子磷酸化蛋白質(zhì)分子；然后采用傳統(tǒng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究策略建立髓病毒瘤蛋白LMPL與下游功能效應(yīng)蛋白質(zhì)分子間的關(guān)系，初步構(gòu)建雎病毒瘤蛋白LMPL介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路網(wǎng)絡(luò)。我們擬采用磷酸酶抑制劑和磷酸基團(tuán)金屬親和純化PHOSPHATEMETALAFFINITYCHROMATOGRAPHYJPMAC兩種策略來富集磷酸化蛋白質(zhì)。我們研究證實(shí)采用磷酸酶抑制劑抑制細(xì)胞內(nèi)磷酸酶活性可以有效提高細(xì)胞內(nèi)磷酸化蛋白質(zhì)的總量，并且呈劑量和時(shí)間依賴性，從而確定了絲／蘇氨酸磷酸酶抑制劑和酪氨酸磷酸酶抑制劑的最佳工作濃度和最佳處理時(shí)間。同時(shí)采用PMAC技術(shù)從細(xì)胞總蛋白質(zhì)中分離純化出磷酸化蛋白質(zhì)。我們以PEGFR，PP65和QTUBULIN分別作為磷酸化蛋白質(zhì)和非磷酸化蛋白質(zhì)的代表，檢測細(xì)胞總蛋白經(jīng)過PMAC處理后磷酸化蛋白質(zhì)組分中是否存在非磷酸化蛋白質(zhì)，和非磷酸化蛋白質(zhì)組分中是否存在磷酸化蛋白質(zhì)，結(jié)果顯示，磷酸化蛋白質(zhì)組分中不存在QTUBULIN，非磷酸化蛋白質(zhì)中不存在PEGFR和PP65，說明借助PMAC策略可以有效地分離磷酸化蛋白質(zhì)與非磷酸化蛋白質(zhì)。從而建立了磷酸化蛋白質(zhì)體內(nèi)外富集技術(shù)平臺(tái)。在已經(jīng)建立磷酸化蛋白質(zhì)富集技術(shù)平臺(tái)的基礎(chǔ)上，我們確定了磷酸化蛋白質(zhì)富集結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定LMPL調(diào)節(jié)的磷酸化蛋白質(zhì)分子的可行性。我們用磷酸化蛋白質(zhì)的總量計(jì)算、二維凝膠電泳以及單個(gè)磷酸化蛋白質(zhì)的WESTERNBLOT分析發(fā)現(xiàn)，CNEL和CNE卜LMPL細(xì)胞經(jīng)磷酸酶抑制劑處理后，抑制了LMPL介導(dǎo)的下游蛋白質(zhì)磷酸化事件，導(dǎo)致兩細(xì)胞中磷酸化蛋白質(zhì)的均一性。所以我們只好放棄磷酸酶抑制劑這種磷酸化蛋白質(zhì)富集策略，而只采用磷酸化蛋白質(zhì)體外富集策略PMAC技術(shù)。當(dāng)細(xì)胞不經(jīng)過磷酸酶抑制劑處理，而直接用PMAC技術(shù)從細(xì)胞總蛋白中分離純化出磷酸化蛋白質(zhì)。磷酸化蛋白質(zhì)總量計(jì)算顯示，EB病毒瘤蛋白LMPL可以增加細(xì)胞內(nèi)磷酸化蛋白質(zhì)總量的1803％，差異非常顯著盧O00845。通過分析富集的總磷酸化蛋白質(zhì)中的單個(gè)磷IL

簡介：過去流感大流行的教訓(xùn)強(qiáng)調(diào)了實(shí)時(shí)進(jìn)行病毒監(jiān)測的重要性。網(wǎng)絡(luò)合作實(shí)驗(yàn)室對(duì)于有效地進(jìn)行病毒基因組信息、臨床信息及流行病學(xué)數(shù)據(jù)的交流至關(guān)重要。我國也正在建立和完善傳染病監(jiān)測技術(shù)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室正在實(shí)行對(duì)人群中流感病毒流行進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測。2009～2010年流感大流行期間我們綜合運(yùn)用分子生物學(xué)、微生物學(xué)、免疫學(xué)技術(shù)針對(duì)甲流的流行模式季節(jié)性流感疫苗對(duì)甲流爆發(fā)的保護(hù)作用、甲流病毒的變異特點(diǎn)等問題進(jìn)行了多方位的流行性學(xué)研究取得以下研究發(fā)現(xiàn)1在2009年流感大流行期間對(duì)北京地區(qū)2009～2010年甲型流感的流行情況監(jiān)測顯示2134份流感樣病例中甲型流感陽性575例陽性率為2694％。其中甲型H1N1亞型流感占46季節(jié)性H3N2亞型占41季節(jié)性H1N1亞型占3未分型占10。甲型H1N1流感病毒主要引起成年人發(fā)病其年齡組分布峰值在20至30歲之間這與季節(jié)性流感病毒有顯著的差別。在2009～2010年北京地區(qū)出現(xiàn)了兩次流感流行高峰第一次流行高峰是在2009年第37周以季節(jié)性H3N2亞型流感病毒為主。此時(shí)正是甲型H1N1流感在我國流行的初期。隨后在第47周出現(xiàn)了以甲型H1N1流感病毒為主的第二次流感流行高峰。隨后仍以甲型H1N1流感病毒流行為主直到流感季節(jié)結(jié)束。在整個(gè)監(jiān)測過程中只有零散的病例為季節(jié)性H1N1流感病毒感染陽性。而且在甲型H1N1流感病毒成為主導(dǎo)流行株后就再檢測不到季節(jié)性H1N1流感病毒。即甲型H1N1流感病毒的出現(xiàn)改變了北京地區(qū)流感的流行模式。2甲型H1N1流感與季節(jié)性流感的共同流行引起了兩種病毒在同一宿主體內(nèi)復(fù)合感染的可能性。在2009年9月上旬一起大學(xué)校園流感爆發(fā)感染中共確診40例甲型流感病毒感染陽性病例。其中22例甲型H1N1流感病毒陽性12例季節(jié)性H3N2流感病毒陽性6例同時(shí)感染甲型H1N1流感病毒和季節(jié)性H3N2流感病毒的混合感染。病例的時(shí)空分布、發(fā)病信息及對(duì)季節(jié)性H3N2流感病毒的預(yù)存抗體顯示季節(jié)性H3N2流感病毒在甲型H1N1流感病毒出現(xiàn)前就已在校園流行。在臨床癥狀上混合感染患者與單獨(dú)感染兩種病毒的患者無顯著的差異。甲型H1N1流感病毒感染患者的血清轉(zhuǎn)換率為857季節(jié)性H3N2流感病毒感染患者的血清轉(zhuǎn)換率為70混合感染患者同時(shí)對(duì)甲型H1N1流感病毒和季節(jié)性H3N2流感病毒的血清轉(zhuǎn)換率為833且對(duì)兩種病毒的血清轉(zhuǎn)換和抗體水平上無顯著差異。而只有一名混合感染患者對(duì)兩種病毒均無血清轉(zhuǎn)換。在單獨(dú)感染和混合感染中甲型H1N1流感病毒的載量都比季節(jié)性H3N2流感病毒的載量高?；旌细腥净颊咭鸬南乱淮腥局饕羌仔虷1N1流感病毒感染也可引起下一代感染出現(xiàn)混合感染。這次爆發(fā)感染中甲型H1N1流感病毒的HA和NA基因序列遺傳很穩(wěn)定與ACALIFNIA042009CA04株相比同源性為991～996。在HA基因序列中出現(xiàn)了3個(gè)核苷酸置換分別為1484位GA1499位CT和1505位AG引起相應(yīng)的氨基酸改變?yōu)镾ERASNTHRILE和ASPGLY。NA基因序列中出現(xiàn)了742位AG和813位TC兩個(gè)核苷酸置換引起了一個(gè)ASNASP氨基酸突變。而H3N2流感病毒的HA和NA基因序列與目前北美流行的AHAWAII072009H3N2株同源性很高99。在混合感染病例中并未發(fā)現(xiàn)基因重配突變。所有甲型H1N1流感病毒和季節(jié)性H3N2流感病毒在M2蛋白上均出現(xiàn)S31N耐藥位點(diǎn)突變而NA蛋白上未出現(xiàn)H275Y耐藥位點(diǎn)突變。奧司他韋在治療甲型流感病毒感染中仍具有重要的作用。3甲型H1N1流感流行之后關(guān)于季節(jié)性流感疫苗能否保護(hù)甲流感染的問題備受爭議。在2009年10月監(jiān)測到的一起中學(xué)生流感爆發(fā)中利用病例對(duì)照研究設(shè)計(jì)和血清流行病學(xué)方法探討了季節(jié)性流感疫苗接種對(duì)甲流爆發(fā)的保護(hù)作用。共確診甲型H1N1流感病毒感染病例210118例。在臨床癥狀表現(xiàn)上接種過季節(jié)性流感疫苗的患者和未接種過季節(jié)性流感疫苗的患者之間無顯著差異。血清學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)甲型H1N1流感病毒感染的隱性感染率為6195CI2～17。909疫苗接種患者和95未接種疫苗患者恢復(fù)期血清對(duì)甲型H1N1流感病毒的血凝效價(jià)高于140。疫苗接種組和未接種組血清對(duì)甲型H1N1流感病毒血凝抑制抗體水平之間無顯著差異。在接種過季節(jié)性流感疫苗的人群中甲型H1N1流感病毒的感染率為9。而在未接種季節(jié)性流感疫苗的人群中甲型H1N1流感病毒的感染率為203。在這兩個(gè)組之間甲型H1N1流感病毒的感染率具有顯著差異P4在對(duì)實(shí)驗(yàn)室分離毒株的系統(tǒng)發(fā)育分析中發(fā)現(xiàn)北京地區(qū)目前流行的甲型流感病毒有三種分別為甲型H1N1亞型、季節(jié)性H3N2亞型和季節(jié)性H1N1亞型流感病毒。甲型H1N1流感病毒的HA基因與ACALIFNIA042009H1N1株和ANEWYK16692009H1N1株HA基因之間的同源性分別為994～996和995～998說明其變異情況不大。ACALIFNIA042009H1N1株和ANEWYK16692009H1N1株處于兩個(gè)大分支中說明在北京地區(qū)流行的甲型H1N1流感病毒可能有多個(gè)來源。北京地區(qū)流行的甲型H1N1流感病毒HA基因之間的同源性為994～100。目前流行的H3N2亞型流感病毒的HA基因存在一定的變異與疫苗株HA基因之間的同源性為989～991。大部分毒株與疫苗株處于不同的分支上。毒株之間HA基因的同源性為984～100。相比之下當(dāng)前流行的季節(jié)性H1N1流感病毒HA基因變異較大與疫苗株HA基因之間的同源性為959～961。而兩株毒株之間的同源性為998。甲型H1N1亞型、季節(jié)性H3N2亞型和季節(jié)性H1N1亞型流感病毒組內(nèi)HA基因的平均進(jìn)化距離分別為0004、0009和0029。即季節(jié)性H1N1流感病毒HA基因變異最大其次是季節(jié)性H3N2流感病毒而甲型H1N1流感病毒變異最小。本實(shí)驗(yàn)室分離毒株HA氨基酸序列發(fā)生了多個(gè)氨基酸替換。甲型H1N1流感病毒HA基因上出現(xiàn)了49個(gè)突變而只引起19個(gè)氨基酸突變。在抗原決定簇CB位點(diǎn)有一個(gè)A90T氨基酸突變。在SA位點(diǎn)有兩個(gè)氨基酸替換S179N和K180E。在CA位點(diǎn)有一個(gè)I183T突變。在SB位點(diǎn)有三個(gè)氨基酸替換分別為S202GA203V和A212G。與疫苗株相比季節(jié)性H3N2亞型流感病毒流行株HA基因上出現(xiàn)102個(gè)突變并引起29個(gè)氨基酸改變。在抗原決定簇CA2位點(diǎn)有一個(gè)S159F突變。在SA位點(diǎn)有兩個(gè)突變L173S和K174N。在SB位點(diǎn)有三個(gè)突變分別為T203RD206G和P210L。季節(jié)性H1N1亞型流感病毒HA基因上出現(xiàn)了69個(gè)突變但只引起了11個(gè)氨基酸的改變。在抗原決定簇CA2位點(diǎn)發(fā)生了兩個(gè)氨基酸突變K157E和S158N在SB位點(diǎn)發(fā)生了兩個(gè)氨基酸突變G202A和A206T。而目前所使用的流感疫苗對(duì)新的抗原漂移株的免疫保護(hù)效果尚未知需進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)室評(píng)估。2009年流感大流行也是對(duì)我國網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測技術(shù)平臺(tái)的一個(gè)考驗(yàn)。能否實(shí)時(shí)準(zhǔn)確地反應(yīng)流感疫情的動(dòng)態(tài)變化趨勢及快速準(zhǔn)確地檢測引發(fā)疫情的病原體是應(yīng)對(duì)流感大流行能力提高與否的重要標(biāo)準(zhǔn)。本研究完善和提高了我國流感實(shí)時(shí)監(jiān)測直報(bào)系統(tǒng)。為及時(shí)采取有效的科學(xué)手段阻斷疫情擴(kuò)大和蔓延制定流感的防控策略提供了重要信息。對(duì)于制定治療方案及疫苗的開發(fā)和改良具有重要的指導(dǎo)意義。

簡介：點(diǎn)擊查看更多2012--2013年江蘇部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型分子流行病學(xué)調(diào)查及其單克隆抗體的研制.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文蘇州地區(qū)A組輪狀病毒腹瀉流行病學(xué)及臨床研究姓名顧紅英申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)兒科學(xué)指導(dǎo)教師嚴(yán)文華20031001蘇州地區(qū)A組輪狀病毒腹瀉流行病學(xué)及臨床研究中文提要毒腹瀉期間，改服去乳糖奶粉和肌注干擾素均有明顯療效P005。結(jié)論輪狀病毒是蘇州地區(qū)5歲以下嬰幼兒腹瀉的主要病原，其陽性率為4332％，流行狀況與國內(nèi)外基本一致，冬季為高峰，4～24月齡患兒最為多見，但是主要流行株是G3型和P4型，不同于前期我國大多數(shù)地區(qū)以G1型和P8型為主要流行株的情況。輪狀病毒腹瀉患兒更容易出現(xiàn)脫水、呼吸道癥狀和肝功能損傷，。重型腹瀉多見于7～24個(gè)月的嬰幼兒而與G血清型無關(guān)，對(duì)于輪狀病毒腹瀉的嬰幼兒，建議采用去乳糖奶粉和干擾素治療。關(guān)鍵詞嬰幼兒腹瀉輪狀病毒血清型流行病學(xué)臨床癥狀I(lǐng)L作者顧紅英指導(dǎo)老師嚴(yán)文華

簡介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文乙型肝炎病毒基因型對(duì)肝細(xì)胞癌生物學(xué)性狀及行為影響研究姓名訾力申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師陳濤20100520材料和方法1病例選擇本實(shí)驗(yàn)選擇我院99例伴HBV感染的HCC患者為研究對(duì)象。入院時(shí)常規(guī)進(jìn)行肝功能、病毒血清標(biāo)志物、HBVDNA定量、腫瘤標(biāo)志物、B超、CT／MR等檢查，根據(jù)檢查結(jié)果及術(shù)后病理結(jié)果，排除其他肝炎病毒感染及其他肝臟疾病。2標(biāo)本收集和制作所有病例術(shù)前抽取56ML患者靜脈血，離心，取上層血清，于80℃冰箱凍存；相應(yīng)患者腫瘤組織標(biāo)本收集并行HE染色、網(wǎng)織纖維染色。3乙型肝炎病毒基因型檢N采用巢式PCR方法擴(kuò)增HBV基因的S區(qū)，而后對(duì)特異性產(chǎn)物進(jìn)行基因測序，測序結(jié)果輸入MEGA基因分析軟件進(jìn)行進(jìn)化樹分析。4病理學(xué)檢查包括大體標(biāo)本檢查和HE染色、網(wǎng)織纖維染色玻片鏡檢，由兩位病理醫(yī)生獨(dú)立觀察，內(nèi)容包括腫瘤最大徑、腫瘤數(shù)目單發(fā)還是多發(fā)、衛(wèi)星子灶形成、血管侵犯和癌栓、包膜形成、腫瘤組織分化、周圍肝組織纖維化分期。5術(shù)后隨訪所有入選病例根治性手術(shù)后，每2～3周復(fù)查一次，常規(guī)檢測AFP和腹部B超，懷疑復(fù)發(fā)者行B超造影、CT／MR檢查。統(tǒng)計(jì)患者的疾病進(jìn)展時(shí)間和無病生存時(shí)間。6使用SPSS110統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。正態(tài)計(jì)量資料采用F檢驗(yàn)、T檢驗(yàn)或單因素方差分析法分析；偏態(tài)分布資料采用WILCOXON或KWALLIS秩和檢驗(yàn)分析；定性資料采用卡方檢驗(yàn)或FISHER精確概率法分析；疾病進(jìn)腱時(shí)間和無病生存時(shí)間用LOGRANK生存分析。以上檢驗(yàn)均以P005認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。鈷田皇口爿R99例患者中，共檢測出陽性結(jié)果87例，其中B2型組37例425％，C型組50例575％。男性77例885％，女性10例115％，平均年齡為51191139歲。兩組性別、年齡均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，B2型組患者在40歲以下年齡段及50歲以下年齡段所占比例相對(duì)較大。N

簡介：自2012年起，一種新型冠狀病毒中東呼吸綜合征冠狀病毒DLEEASTRESPIRATYSYNDROMECONAVIRUS，MERSCOV持續(xù)在中東地區(qū)蔓延，已造成上百例感染病例，致死率高達(dá)50％。這是繼2003年爆發(fā)的嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀病毒SEVEREACUTERESPIRATYSYNDROMECONAVIRUS，SARSCOV、2004年發(fā)現(xiàn)的人類冠狀病毒NL63HUMANCONAVIRUSNL63，HCOVNL63以及2006年發(fā)現(xiàn)的人類冠狀病毒HKU1（HUMANCONAVIRUSHKU1，HCOVHKU1）之后發(fā)現(xiàn)的又一個(gè)人類冠狀病毒家族的新成員，這表明冠狀病毒對(duì)人類健康的威脅始終存在，然而到目前為止，在世界范圍內(nèi)還沒有切實(shí)有效的能用于臨床治療MERSCOV、SARSCOV等冠狀病毒感染的疫苗或特效藥物。冠狀病毒作為單股正鏈RNA病毒，編碼約16個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白NONSTRUCTURALPROTEINS，NSPS介導(dǎo)自身的轉(zhuǎn)錄復(fù)制過程。這其中，NSP5（即主蛋白酶）參與將冠狀病毒基因組編碼的復(fù)制酶多蛋白POLYPROTEINS，PPLA，PPLAB酶切水解為病毒基因組復(fù)制所必需的16個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白的過程，因而在冠狀病毒的轉(zhuǎn)錄復(fù)制中發(fā)揮了至關(guān)重要作用。并且在人體內(nèi)不存在NSP5的同源蛋白，因而NSP5蛋白是一個(gè)良好的抗冠狀病毒靶點(diǎn)。本論文首先運(yùn)用分子置換法解析了MERSCOVNSP5與N3抑制劑復(fù)合物的227A晶體結(jié)構(gòu)，分析了NSP5與N3抑制劑間的精確相互作用，驗(yàn)證了MERSCOVNSP5以同源二聚體的形式發(fā)揮活性功能，以CYSHIS二體構(gòu)成催化活性中心，為理解N3抑制MERSCOVNSP5的反應(yīng)機(jī)理提供了良好的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)并且我們通過體外構(gòu)建的熒光酶活體系定量分析了N3分子對(duì)MERSCOVNSP5的抑制活性，從結(jié)構(gòu)和功能兩方面證實(shí)了N3確實(shí)是MERSCOVNSP5的良好抑制劑其次，我們比較并分析了冠狀病毒亞科不同成員MERSCOV、SARSCOV、HCOVHKU1和IBV的NSP5結(jié)合N3抑制劑的高度結(jié)構(gòu)保守性及輕微差異，期望為抗MERSCOV的抑制劑開發(fā)提供優(yōu)化指導(dǎo)。本論文的另外一部分工作為SARSCOVNSP13蛋白的蛋白質(zhì)晶體學(xué)研究。NSP13具有解旋酶及NTPASE酶功能，是冠狀病毒轉(zhuǎn)錄復(fù)制過程不可缺少的核心酶之一，也是一個(gè)良好的抗冠狀病毒藥物靶點(diǎn)。在本論文中，我們通過合理的分子克隆構(gòu)建及有效的蛋白表達(dá)純化手段，獲得了SARSCOVNSP13母體晶體的X射線衍射數(shù)據(jù)29A，為最終解析SARSCOVNSP13的三維結(jié)構(gòu)奠定了良好的基礎(chǔ)。

簡介：目的在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，在導(dǎo)師以往臨床及實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，觀察解毒復(fù)肝湯聯(lián)合苦參素序貫給藥對(duì)不同基因型慢性乙型肝炎的血清病毒學(xué)指標(biāo)的影響，并從基因型的分析，探討其作用機(jī)理，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法選取符合納入標(biāo)準(zhǔn)的慢性乙型肝炎患者98例，按照隨機(jī)對(duì)照的原則隨機(jī)分成2組，對(duì)照組32例在苦參素序貫給藥的基礎(chǔ)上加用甘利欣、門冬氨酸鉀鎂注射液，每日1次，應(yīng)用1個(gè)月，改為隔日靜脈滴注，再應(yīng)用7次后停藥。治療組66例在以上治療的基礎(chǔ)上加用解毒復(fù)肝湯。兩組療程均為3個(gè)月。觀察兩組患者之間及治療組中基因B型、C型患者治療前后臨床癥狀、體征，血清肝功能指標(biāo)ALT、AST、TBIL，血清病毒學(xué)標(biāo)志HBSAG、HBEAG和抗HBE及HBVDNA水平的變化，比較兩組之間及治療組中基因B型和C型患者之間的療效。結(jié)果①兩組總體療效比較治療組66例中，顯效22例，有效35例，無效7例，脫落2例，總有效率為8906％。對(duì)照組32例中，顯效6例、有效17例、無效8例，脫落1例，總有效率為7419％。治療組的總體療效與對(duì)照組比較差異有顯著性P005。③兩組臨床癥狀、體征比較治療后兩組患者的主癥、次癥及體征積分值均明顯下降，與治療前相比，差異有顯著性P005。④兩組肝功能指標(biāo)的比較與治療前比較，兩組肝功能均有明顯改善，差異有顯著性P005。⑤兩組在觀察期間均未見不良反應(yīng)。結(jié)論解毒復(fù)肝湯聯(lián)合苦參素序貫給藥對(duì)不同基因型慢性乙型肝炎患者具有良好療效，可明顯改善患者的臨床癥狀、體征，療效確切，其作用機(jī)制可能與解毒復(fù)肝湯恢復(fù)肝臟功能、增強(qiáng)苦參素抗HBV活性等作用有關(guān)，其中對(duì)基因B型患者的療效優(yōu)于C型患者。

簡介：中南大學(xué)碩士學(xué)位論文EB病毒潛伏性膜蛋白1轉(zhuǎn)化鼻咽上皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究姓名張瓊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師賀智敏20070501碩士學(xué)位論文中文摘要間接觸較為緊密；NP69LMPL”細(xì)胞的生長速度、軟瓊脂集落形成能力、S期細(xì)胞所占比例以及抗凋亡能力比NP69一LMPL””及載體對(duì)照組NP69一LNSX細(xì)胞明顯增加；2在NP69一LNSX與／铘P69一LMPL”細(xì)胞比較組鑒定了21種差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，在NP69一LMPL”與NP69～U伊1””細(xì)胞比較組鑒定了18種差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，其中大部分是與細(xì)胞結(jié)構(gòu)、代謝和轉(zhuǎn)錄翻譯相關(guān)的蛋白；3REALTIMERTPCR驗(yàn)證了6種蛋白在轉(zhuǎn)化細(xì)胞轉(zhuǎn)錄水平的差異，WESTERNBLOT驗(yàn)證了2種蛋白在轉(zhuǎn)化細(xì)胞蛋白表達(dá)水平的差異，結(jié)果與蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果一致。結(jié)論1LMPI可以致人鼻咽上皮細(xì)胞NP69獲得形態(tài)轉(zhuǎn)交、生長增殖加快、軟瓊脂集落形成能力增強(qiáng)、凋亡抗性增加等惡性表型；2LMPL可能通過上調(diào)鈣網(wǎng)織蛋白、波形蛋白和核纖層蛋白A／C等，下調(diào)角蛋白5、角蛋白19、膜聯(lián)蛋白II等促進(jìn)NP69細(xì)胞轉(zhuǎn)化；3LMPLTRADD結(jié)合區(qū)是LMPL轉(zhuǎn)化致瘤過程中關(guān)鍵功能活化區(qū)，通過參與角蛋白19、膜聯(lián)蛋白II、鈣網(wǎng)織蛋白、波形蛋白、核纖層蛋白A／C等多種蛋白表達(dá)調(diào)節(jié)過程參與NP69細(xì)胞轉(zhuǎn)化。關(guān)鍵詞EB病毒，LMPL，鼻咽上皮，轉(zhuǎn)化，蛋白質(zhì)組Ⅱ

簡介：點(diǎn)擊查看更多嬰兒肝炎綜合征的病毒病因?qū)W研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點(diǎn)擊查看更多乙型肝炎病毒相關(guān)慢加急性肝衰竭及其中醫(yī)證候的代謝組學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的選用導(dǎo)師左俊嶺教授治療慢性乙型肝炎多年經(jīng)驗(yàn)篩選的益腎解毒方，通過隨機(jī)對(duì)照臨床試驗(yàn)，評(píng)價(jià)在慢性乙型肝炎病毒攜帶者免疫耐受狀態(tài)下使用本方益腎解毒干預(yù)的臨床療效及病毒學(xué)效應(yīng)。目的為探求在慢性乙型肝炎病毒攜帶者免疫耐狀態(tài)下應(yīng)用中醫(yī)藥治療的有效方法。方法采用隨機(jī)對(duì)照前瞻性的研究方法，收集2014年12月至2015年2月期間于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診，并符合標(biāo)準(zhǔn)的60名慢性乙肝病毒攜帶者，隨機(jī)分為兩組，治療組30人，對(duì)照組30人。治療組給予益腎解毒方治療。對(duì)照組不給于藥物治療。以12周為一療程。觀察并對(duì)比兩組患者的癥候積分、肝功能、乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志、乙肝病毒DNA載量的變化情況。結(jié)果經(jīng)過12周的治療，治療組的中醫(yī)癥狀有效率達(dá)90％，對(duì)照組的中醫(yī)候狀有效率為66％，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后，兩者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜005），治療組對(duì)患者癥候積分的降低顯著優(yōu)于對(duì)照組P＜001。治療組治療后各項(xiàng)癥候積分均較治療前有緩解（P＜001）對(duì)照組患者治療前后脅肋部疼痛癥候積分未顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＞005，其余癥候均有緩解（P＜005），兩組患者的AST、ALT、GGT、TBIL、DBIL等肝功能指標(biāo)，在治療前后均未顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞005）。兩組患者的血清學(xué)標(biāo)志物在治療前后未顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞005）。治療組中乙肝病毒DNA載量治療前后相比，治療后明顯下降，前后分別為560±179和475±186LOG10IUML，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＜001，說明益腎解毒方具有改善患者臨床癥狀及抑制乙肝病毒復(fù)制效果。結(jié)論經(jīng)過臨床隨機(jī)對(duì)照觀察，結(jié)果顯示益腎解毒方能夠有效地改善慢性乙型肝炎病毒攜帶者在免疫耐受狀態(tài)下的部分癥狀及體征，并且具有明顯的抗病毒效果。在目前乙肝免疫耐受狀態(tài)無可靠有效干預(yù)方法的現(xiàn)狀下，本研究所證實(shí)的中醫(yī)藥益腎解毒法應(yīng)用，可為臨床提供一種較為有益的治療手段。

簡介：目的制備雙砷染料標(biāo)記的熒光乙型肝炎病毒（HEPATITSBVIRUSHBV）體，對(duì)其形態(tài)學(xué)進(jìn)行鑒定分析，并動(dòng)態(tài)觀察HBV熒光體在活細(xì)胞中的生物學(xué)行為。方法采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法，將已成功構(gòu)建帶有TC標(biāo)簽的13倍乙型肝炎病毒基因組的載體質(zhì)粒（PTHBV13MTC1）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入人肝癌細(xì)胞株中，該重組載體是通過PCR定點(diǎn)基因突變技術(shù)將一個(gè)能與雙砷熒光染料特異性結(jié)合的TC標(biāo)簽（CCPGCC在基因水平上插入到HBV核心蛋白免疫主區(qū)CEL位點(diǎn)。48H后通過間接免疫熒光檢測表面抗原在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)與分布；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中乙肝表面抗原HBSAG的表達(dá)；同時(shí)收集轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清液，經(jīng)不連續(xù)蔗糖密度梯度離心進(jìn)行分離和純化后，加抗體孵育進(jìn)行免疫電鏡觀察分析，同等培養(yǎng)條件下HEPG2細(xì)胞和2215細(xì)胞培養(yǎng)上清液分別作為陰性和陽性對(duì)照?；罴?xì)胞研究中，我們應(yīng)用EGONGREEN488TAXOL標(biāo)記微管骨架后，在活細(xì)胞時(shí)差共聚焦顯微鏡下觀察熒光HBV病毒體在宿主細(xì)胞中的運(yùn)輸過程。結(jié)果間接免疫熒光結(jié)果顯示在轉(zhuǎn)染PTHBV13MTC1組細(xì)胞中雙砷的紅色熒光強(qiáng)于轉(zhuǎn)染PTHBV13細(xì)胞組，呈典型的核漿型分布。電鏡結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染PTHBV13組細(xì)胞在48H時(shí)可表達(dá)HBSAG并可自行組裝成12NM左右的球形顆粒后分泌至上清中，而陰性對(duì)照組和PTHBV13MTC1組未見到與文獻(xiàn)報(bào)道一致的HBV顆粒樣結(jié)構(gòu)?；罴?xì)胞時(shí)差共聚焦顯微鏡觀察顯示熒光HBV顆粒感染HEPG2細(xì)胞后約3H熒光顆粒開始吸附并侵入胞內(nèi)，約5H時(shí)在胞漿中富集而少數(shù)已到達(dá)核周，并可觀察到熒光HBV顆粒依賴于微管的運(yùn)動(dòng)。初步證實(shí)重組的HBV熒光體同野生型HBV一樣保留了抗原性和感染性。結(jié)論TC嵌合型核心蛋白在轉(zhuǎn)染PTHBV13MTC1細(xì)胞中能夠特異性的發(fā)出熒光，且TC標(biāo)簽的插入并不影響表面抗原及核心蛋白的表達(dá)。雙砷復(fù)合物這一新穎熒光標(biāo)記技術(shù)使得HBV在活細(xì)胞中的示蹤觀察成為可能。在深入研究HBV熒光體在胞漿中運(yùn)輸?shù)膭?dòng)態(tài)過程及與宿主細(xì)胞間的相互關(guān)系方面，可作為一種高度有價(jià)值的研究工具。

簡介：人細(xì)小病毒B19（HUMANPARVOVIRUSB19，又稱人微小病毒B19，簡稱B19病毒）是迄今發(fā)現(xiàn)的能感染人類的最小的單鏈線狀DNA病毒之一。自1990年我們在國內(nèi)首次證實(shí)我國存在B19病毒感染以來，越來越多的研究揭示我國B19病毒感染可誘發(fā)急性再障危象、急性血小板減少性紫癜及孕婦非免疫性流產(chǎn)等疾病，尤其對(duì)于免疫功能低下或缺陷患者，因缺乏有效治療藥物，B19病毒持續(xù)感染可致慢性貧血，甚至危及生命。因此，在我國乃至世界都需要建立有效的B19病毒防治體系。B19病毒基因存在較大的變異。目前B19病毒分為三種基因型1型原型、2型類A6和LALI、3型V9。不同基因型的分布存在著地理的差異。歐美等西方國家流行的病毒株大多屬于1型，2、3型少見；3型多見于西非。此三型其DNA序列差異約為10％，其中大于20％序列差異位于P6啟動(dòng)子區(qū)域。在編碼VP1VP2蛋白的開放閱讀框內(nèi)，2、3型與1型比較，DNA序列變異分別為9％、12％，但氨基酸變異僅為11％、14％。我們在國家自然科學(xué)基金課題（39870021）的資助下，采用基因克隆測序技術(shù)，對(duì)收集到的中國大陸B(tài)19病毒流行株（XA株）進(jìn)行基因分析，發(fā)現(xiàn)我國B19病毒流行株的VP1基因獨(dú)特區(qū)有明顯的變異，其基因組一級(jí)結(jié)構(gòu)的差異，導(dǎo)致所編碼氨基酸的改變，可能影響到B19病毒抗原位點(diǎn)及免疫特性的變化。B19病毒基因的變異可導(dǎo)致病毒毒力、致病機(jī)制的改變。VP1基因表達(dá)的蛋白與病毒的免疫原性及機(jī)體感染后產(chǎn)生保護(hù)性抗體密切相關(guān)，為建立我國B19病毒感染的防治技術(shù)，必須深入研究我國病毒流行株變異基因區(qū)表達(dá)的蛋白的結(jié)構(gòu)和功能位點(diǎn)的變化。因此本實(shí)驗(yàn)通過在原核及真核系統(tǒng)表達(dá)B19XA2株VP1蛋白，研究其空間結(jié)構(gòu)和功能位點(diǎn)的變化及其變化對(duì)抗原性的影響，以揭示變異的VP1基因表達(dá)蛋白的生物學(xué)活性，促進(jìn)B19病毒分子流行病學(xué)、致病機(jī)理及預(yù)防疫苗的研究。研究目的本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟跀U(kuò)增獲得B19XA2VP1基因全長，構(gòu)建其原核表達(dá)載體，表達(dá)融合蛋白。同時(shí)構(gòu)建VP1穿梭載體，在昆蟲細(xì)胞SF9中表達(dá)VP1蛋白，并以原核及真核表達(dá)蛋白為免疫原，免疫動(dòng)物，制備具有一定敏感性和特異性的抗VP1蛋白的多克隆抗血清，用于檢測VP1蛋白的免疫原性。分別以原核及真核表達(dá)蛋白為抗原，采用ELISA方法與臨床患兒的血清反應(yīng)，并與德國PARVOVIRUSB19IGMELISAKIT檢測結(jié)果比較，分析表達(dá)產(chǎn)物VP1蛋白的反應(yīng)原性，從而為以后研究VP1蛋白的生物學(xué)功能，和B19病毒的防治奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)方法1獲得目的基因自行設(shè)計(jì)引物，按巢式PCR篩選陽性B19感染標(biāo)本，自陽性標(biāo)本中按照常規(guī)PCR方法擴(kuò)增獲得長度為2345BP的HPVB19VP1全長基因（NT2623NT4968）。2原核表達(dá)重組蛋白將VP1基因克隆入載體PET28A，構(gòu)建原核重組表達(dá)載體VP1PET28A，并在ECOLIBL21DE3中擴(kuò)增，通過IPTG誘導(dǎo)表達(dá)VP1融合蛋白，SDSPAGE和WESTERNBLOT技術(shù)分析蛋白表達(dá)情況及初步鑒定表達(dá)蛋白。3真核表達(dá)VP1蛋白將VP1基因及載體PFASTBAC1雙酶切、連接、轉(zhuǎn)化入DH10BAC，用抗生素及藍(lán)白斑表型篩選陽性重組體，PCR鑒定，獲得含目的基因的重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒VP1BAC，用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將陽性重組體轉(zhuǎn)入SF9細(xì)胞，擴(kuò)增病毒，循環(huán)凍融和裂解，超速離心，獲溶解的蛋白質(zhì)上清。4以原核及真核表達(dá)的重組蛋白為抗原，免疫家兔，制備抗VP1蛋白的多克隆抗血清，ELISA法檢測抗體效價(jià)；用重組菌超聲裂解上清及轉(zhuǎn)染后SF9細(xì)胞裂解后上清（均含重組VP1蛋白）包被ELISA板，分別與臨床患兒的血清反應(yīng)，并與德國ELISA試劑盒檢測結(jié)果比較，分析表達(dá)產(chǎn)物VP1蛋白的反應(yīng)原性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1巢式PCR篩選到2份陽性B19感染標(biāo)本，按照常規(guī)PCR方法擴(kuò)增此2份標(biāo)本，自其中1份標(biāo)本獲得B19VP1全長基因（2345BP），將其命名為B19XA2株。2原核表達(dá)載體VPLPET28A經(jīng)SALⅠ和XBAⅠ雙酶切，瓊脂糖凝膠電泳觀察酶切片段分子量與預(yù)期結(jié)果相符（2345BP），測序結(jié)果證實(shí)序列完全正確。3將重組菌VP1PET28ABL21DE3經(jīng)誘導(dǎo)劑IPTG誘導(dǎo)，可表達(dá)分子量約為87KDA的蛋白，經(jīng)WESTERNBLOT鑒定，可與6HIS抗體結(jié)合，證實(shí)為VP1融合蛋白。4構(gòu)建穿梭載體VP1BAC，通過抗生素及藍(lán)白斑表型雙重篩選陽性重組體，經(jīng)PCR鑒定，獲得含目的基因的重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒VP1BAC，用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將陽性重組體轉(zhuǎn)入SF9細(xì)胞，細(xì)胞出現(xiàn)典型病變，收集病變細(xì)胞，裂解后SDSPAGE顯示有分子量87KDA的蛋白表達(dá)，與預(yù)期分子量一致。5ELISA檢測原核系統(tǒng)表達(dá)蛋白刺激后產(chǎn)生抗VP1多克隆抗體效價(jià)可達(dá)112800。真核系統(tǒng)表達(dá)蛋白刺激后產(chǎn)生抗體效價(jià)可達(dá)150000。6以重組桿狀病毒表達(dá)的VP1蛋白作抗原，與B19病毒陽性血清有反應(yīng)，其OD值略低于德國ELISA試劑盒檢測結(jié)果。而大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)的重組VP1蛋白作為抗原，與B19病毒感染后陽性血清無反應(yīng)。結(jié)論1成功構(gòu)建了重組人細(xì)小病毒B19XA2株VP1全長基因的ECOLIVP1PET28ABL21DE3。2成功構(gòu)建了人細(xì)小病毒B19XA2株VPL全長基因重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒VP1BAC，并在昆蟲細(xì)胞SF9中成功表達(dá)VP1蛋白。3兩種表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的重組VP1蛋白作為抗原有誘導(dǎo)特異性抗體產(chǎn)生的能力，即具有良好的免疫原性。4BACTOBAC系統(tǒng)表達(dá)的VP1蛋白其生物活性更接近天然產(chǎn)物，可用作抗原檢測人感染B19病毒后的血清抗體，且與進(jìn)口試劑盒進(jìn)行平行比較，初步達(dá)到同類試劑盒水平。