簡介：,病毒學研究方法,病毒培養(yǎng)方法形態(tài)學研究方法免疫學血清學方法生化、生物物理與分子生物學方法,1、體外細胞培養(yǎng)技術二十世紀中期動物細胞體外培養(yǎng)技術的建立，極大推動了動物病毒學研究的發(fā)展原代成纖維細胞建株成纖維細胞上皮細胞,原代成纖維細胞建株成纖維細胞上皮細胞,PIGKIDNEYCELLSIBRS2GROWINGONCYTODEX1,VEROCELLSGROWINGONCYTODEX1,人二倍體細胞培養(yǎng),接種細胞24小時,接種細胞72小時,收毒第3天,,,,,,MDCK細胞,VERO細胞培養(yǎng),接種細胞24小時,接種細胞48小時,接種細胞60小時,VERO細胞接種PEDV病毒病變過程照片,VERO細胞培養(yǎng),ST細胞,接種細胞24小時,接種細胞48小時,ST細胞,接種偽狂犬病毒病變過程照片,MARC145細胞,接種細胞24小時,接種細胞38小時,接種細胞50小時,MARC145細胞,接種PRRSV病毒病變過程照片,PK15細胞,接種細胞24小時,接種細胞36小時,接種細胞48小時,PK15細胞,接種TGEV病毒病變過程照片,MDCK細胞,接種細胞24小時,接種細胞48小時,接種細胞72小時,MDCK細胞,接種H9N2病毒病變過程照片,細胞培養(yǎng)技術在病毒學中的應用病毒生物學定量病毒克隆化獲得遺傳均一的病毒方便地生產(chǎn)病毒同步化研究病毒復制的過程，提高實驗的可重復性,病毒的定量并非所有的病毒顆粒都有感染活性有感染活性的病毒顆粒一般僅占總數(shù)的幾百到幾萬分之一,病毒的定量病毒的定量分為物理顆粒的數(shù)量有感染活性的顆粒的數(shù)量有感染活性的顆粒的數(shù)量，更有生物學意義特稱為或TITRE病毒的效價TITERTITRE,病毒效價的測定（之一）空斑測試（PLAQUEASSAY）用稀釋的病毒液感染單層細胞，蓋上瓊脂，限制病毒的流動病毒感染造成局部細胞死亡或病變，形成肉眼可見的“斑”或“空斑”（噬菌體中噬菌斑）根據(jù)“斑”的數(shù)量和稀釋倍數(shù)可以統(tǒng)計病毒的效價,病毒空斑,未感染的細胞被染成紅色,病毒空斑,顯微鏡下的空斑帶有LACZ基因的重組病毒形成的空斑,病毒效價的測定（多孔板終點稀釋法）病毒逐級稀釋接入長有細胞的孔中，培養(yǎng)后觀察各孔中細胞是否被感染，計算TCID50（TISSUECULTURE50INFECTIONDOSE一半的孔被感染時的稀釋度）,病毒效價的相對性用不同的細胞株去測定病毒的效價，可能會得到完全不同的效價數(shù)據(jù)需要標準化,病毒感染復數(shù)MULTIPLICITYOFINFECTION,MOI,病毒感染復數(shù)病毒感染細胞時平均每個細胞的病毒數(shù),1萬個細胞，為了保證99細胞感染病毒，至少有一個病毒感染，共需要多少病毒病毒感染細胞是隨機的獨立事件群體感染時，有的細胞被1個病毒粒子感染，有的被2個病毒粒子感染有的可能沒有被病毒感染病毒感染細胞的情況，符合泊松分布PKEMMK/K其中M病毒感染復數(shù)，PK細胞被K個病毒感染的幾率所以未被感染的細胞的比率P0EM被1個病毒感染的細胞比率P1EMM被2個病毒感染的細胞比率P2EMM2/2,,問題PFU與TCID50間的換算關系是1TCID5007PFU為什么,感染復數(shù)對病毒感染的實驗結果有很大影響低感染復數(shù)時感染不同步高感染復數(shù)時病毒易產(chǎn)生變異不同的實驗要求不同的感染復數(shù),2、活體培養(yǎng)方法仍有許多病毒缺乏可供其復制的離體細胞培養(yǎng)系統(tǒng)如乙肝病毒，大多數(shù)植物病毒活體系統(tǒng)還可提供病毒與宿主相互作用的信息免疫反應致病機理治療方法最常用活體系統(tǒng)之一雞胚,雞胚用于繁殖病毒、制備疫苗,雞胚的構造和病毒培養(yǎng),流感病毒,單純皰疹病毒,病毒在雞胚中的繁殖流感病毒單純皰疹病,活體培養(yǎng)方法免疫缺陷動物SCID小鼠）對病毒感染無免疫排斥可接入人的免疫細胞等，使之具有人的免疫功能，用于研究HIV、皰疹病毒等與免疫系統(tǒng)的相互關系SCIDSEVERECOMBINEDIMMUNODEFICIENT,二、病毒形態(tài)學研究方法1、光學顯微鏡病毒細小，一般光學顯微鏡下不可見但有時可見病毒聚集，或衍生形成的包涵體,狂犬病毒包涵體,病毒包含體,昆蟲桿狀病毒的多角體,2、電子顯微鏡,噬菌體負染，透射電鏡皰疹病毒感染細胞的超薄切片，透射電鏡,新的電鏡技術冰凍電鏡低輻射電鏡,冰凍電鏡圖像重構技術,冰凍電鏡解析病毒結構,一種綠藻病毒的冰凍電鏡重構,冰凍電鏡解析病毒結構,質型多角體病毒冰凍電鏡圖,X射線晶體學通過X射線衍射研究病毒中原子、分子的排列,研究可形成晶體的病毒,熒光顯微鏡,新的熒光顯微鏡技術用于實時跟蹤AAV入侵的過程,三、免疫學方法病毒學與免疫學是密切相關的免疫技術在病毒學中的應用利用抗原抗體反應的專一性進行病毒的檢測病毒的鑒定分型病毒的定量特異性抗體的監(jiān)測,常用免疫學技術血球凝集試驗補體結合試驗酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）免疫印跡試驗（WESTERNBLOT）免疫熒光組織化學免疫膠體金標記免疫共沉淀,血球凝集試驗某些病毒具有與血細胞表面多糖分子結合的蛋白（基團）。如流感病毒，風疹病毒,補體結合試驗游離的補體可導致抗體包被的紅血球破裂溶血但當有抗原抗體復合物存在時，補體就會與抗原抗體復合物結合，可避免溶血。由此可檢測是否有特定的抗原或抗體存在,補體結合試驗測定特定抗原的量抗體（抗血清）與待測抗原樣品混合加入一定量的補體加入包被抗體的紅血球測定溶血,酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）用酶標記的抗體靈敏地定量檢測病毒抗原,ELISAENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYA雙抗夾心B間接法,ELISA檢測抗體,A抗原E標記酶S低物,四、生化、生物物理與分子生物學方法生物物理方法離心技術病毒顆粒分離純化病毒顆粒的大小、沉降系數(shù)測定生物化學方法病毒顆粒生物化學組分分析蛋白質分析核酸分析其它組分分析,分子生物學方法舉例病毒反向遺傳學方法,從合成基因到合成病毒人工合成脊髓灰質炎病毒,

簡介：HIV1病毒載量檢測及質量保證指南_____________________________________________________________________1本指南由中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心艾滋病參比實驗室組織有關專家撰寫，由中國疾病預防控制中心批準執(zhí)行。編寫主持人編寫主持人蔣巖編寫人員編寫人員潘品良蔣巖李敬云鐘平尚紅李太生審核咨詢專家及技術人員邵一鳴康來儀朱效科王佑春汪寧朱紅郭志宏季陽劉海林肖瑤邱茂鋒馬春濤編寫單位編寫單位中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心參編單位參編單位中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院上海市疾病預防控制中心中國醫(yī)科大學北京協(xié)和醫(yī)院技術顧問MIKEUSSERYHAOZHANG美國國立衛(wèi)生研究院過敏及傳染病研究所JAMESWBREMER美國RUSH大學醫(yī)學中心VQA實驗室TREVERPETER克林頓基金中國艾滋病防治項目實驗室專家DONALDJBRAMBILLA美國華盛頓大學新英格蘭研究所FRANCISFMY加拿大公共衛(wèi)生局疾病預防控制中心國家免疫學實驗室HIV1病毒載量檢測及質量保證指南_____________________________________________________________________3HIV1HIV1病毒載量檢測及質量保證指南（病毒載量檢測及質量保證指南（20072007版）版）目錄目錄第一章總則第二章實驗室設置第三章樣品的采集、處理、保存、運輸?shù)谒恼鲁Ｓ肏IV1病毒載量檢測方法簡介第五章室內(nèi)質量控制第六章外部質量控制第七章實驗室生物安全附表1常見問題分析和處理附表2HIV1病毒載量檢測樣品送檢及接收單附表3HIV1病毒載量檢測能力驗證樣品接收專用單附表4HIV1病毒載量檢測報告單附表5HIV1病毒載量能力驗證結果專用報告單（NASBA附表6HIV1病毒載量能力驗證結果專用報告單（RTPCR參考文獻縮略語

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簡介：關于流感,流行性感冒又稱流感，是由正粘病毒科流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，根據(jù)病毒的核蛋白NP和基質蛋白（MP）抗原性的不同，將病毒分為甲（A）、乙（B）、丙（C）三個血清型。甲（A）型病毒常以流行形式出現(xiàn)，能引起世界性大流行，感染哺乳動物以及鳥類，在人和動物界（野禽、家禽、豬、馬、鯨等）廣泛存在，引起人和動物的流感流行和死亡。,,乙（B）型病毒常引起局部流行，不引起世界性大流行，僅感染人。丙（C）型病毒危害性最小，引起輕微的呼吸道疾病，散發(fā)，不會引起流行，主要侵害嬰幼兒，豬也是天然的宿主之一。,流感病毒亞型,流感病毒又根據(jù)血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）進一步劃分不同的亞型。A型流感病毒可分為16個H亞型（H1～H16）和9個N亞型（N1～N9）。HA、NA之間的不同組合，使流感病毒形成了許多亞型。由于該病毒是分節(jié)段的負鏈單股RNA病毒，在復制過程中極易發(fā)生基因突變和重組，決定了血清型眾多變異頻繁的特點，隨機組合可產(chǎn)生144種，已發(fā)現(xiàn)的禽流感有136種，豬流感10種。,關于豬流感,豬流感（SWINEINFLUENZA,SI）是由A型流感病毒引起的豬的一種急性高度接觸傳染性群發(fā)性呼吸道疾病，臨床癥狀以高熱、精神沉郁、咳嗽、呼吸困難、衰竭為特征，發(fā)病率高，死亡率低，病豬可迅速康復。,,SI是規(guī)模化養(yǎng)豬場普遍存在且難以根除的群發(fā)性疾病，不僅可直接引起患豬死亡，而且使患豬生產(chǎn)性能下降，直接影響豬群健康狀態(tài)和豬的質量，對養(yǎng)豬業(yè)危害較大。SI多與其它疾病，如豬繁殖與呼吸綜合征、圓環(huán)病毒、傳染性胸膜肺炎、豬鏈球菌等并發(fā)或繼發(fā)感染，會顯著增加上述疾病的損害程度和病死率，導致死亡率升高。,重要的公共衛(wèi)生意義,由于豬的呼吸道上皮細胞具有人流感病毒和禽流感病毒的受體，是禽、豬、人流感病毒共同的易感宿主，是流感病毒基因重組或重配的“混合器”和流感病毒新流行毒株產(chǎn)生的“孵育器”，使豬成為流感病毒“禽–哺乳動物”種間傳播鏈中重要的中間宿主。SIV不僅可感染豬，也具有感染禽和人類的能力。,一、豬流感流行病學史,該病于1918年首次報道，與當時發(fā)生于美國中北部的人流感同時暴發(fā)，并于1930年在美國北部首次分離和鑒定到病原體。目前豬流感已遍及包括我國在內(nèi)的世界幾十個國家和地區(qū)。引起豬群發(fā)病的毒株主要是H1N1和H3N2亞型病毒（包括古典豬H1N1、類禽H1N1和類人／禽H3N2）。,繼H1N1、H3N2亞型之后,H1N2亞型的病毒也成為了主要的流行毒株,并在世界范圍的豬群中廣泛流行。目前已發(fā)現(xiàn)的A型豬流感病毒至少有H1N1、H1N2、H1N7、H3N1、H3N2、H4N6、H5N1和H9N2八種不同的血清亞型,但諸如H1N7、H3N6、H4N6、H5N1和H9N2等亞型的毒株只在原發(fā)地分離到，并沒有進一步引起豬與豬之間的傳播或造成大范圍的豬流感流行。,（一）H1N1病毒流行情況,1918年在美國的豬群中觀察到SI時，人群中正流行著H1N1亞型引起的20世紀最具災難性的大流感，而豬群所表現(xiàn)的臨床癥狀和病理變化與當時人群中流行的流感有許多相似之處。1918年豬流感病毒和當時人流感病毒的抗原性和遺傳性都是密切相關的，它們共同的A型流感病毒H1N1亞型衍生而來。此后這種古典H1N1豬流感病毒就一直流行于北美、南美、歐洲和亞洲等世界范圍內(nèi)的豬群中。,在歐洲，禽源H1N1病毒于1979年由鳥類傳播到豬，并證實其抗原性與古典豬H1N1毒株不同。十年后，這種類禽H1N1病毒在歐洲豬群當中再次流行。1992～1993年間在英國豬群及荷蘭肺炎患者體內(nèi)也檢測到了此類病毒的存在。1993年，在我國豬體內(nèi)也分離到了這種類禽H1N1病毒，并與古典豬H1N1亞型病毒同時流行。,（二）H3N2病毒流行情況,H3N2亞型首次于1969年在臺灣分離，1970年香港，在以后的十多年間傳播到了世界各地。1984年，歐洲大陸首次報道了類人H3N2亞洲毒株引起的豬流感暴發(fā)，并且整個歐洲大陸的豬群都表現(xiàn)高水平的抗體。1988年，美國許多接種了H1N1流感疫苗的豬場暴發(fā)嚴重的豬流感，其病原經(jīng)鑒定為H3N2亞型毒株。,近幾年發(fā)生于日本、韓國、美國的H1N2亞型SIV是H1N1和H3N2的重組產(chǎn)物。2004年美國出現(xiàn)了新型H3N1豬流感病毒，其HA基因來源于火雞的H3N2流感病毒，而NA來自人的H1N1流感病毒。2006年9月，在美國的發(fā)病豬群中分離到了禽、豬、人流感重組的H2N3豬流感病毒。,（三）我國的流行情況,豬流感的病原學和血清學調查都顯示，很多省市都有嚴重的豬流感流行。H1N1和H3N2亞型是中國豬流感的主要流行毒株。1991年，在中國豬群中首次分離到H1N1亞型豬流感病毒，并證實是由國外豬傳入的。在2000年之前，未見我國大陸豬群中有H1N1流感暴發(fā)的報道。2000年之后，H1N1的分離率顯著提高。,H1N1,2001年，從廣東的25豬場中分離到7株H1N1亞型豬流感病毒。2002年，從北京的豬群中分離到2株H1N1亞型豬流感病毒。20002003年，從我國東北、華北、華東、華南、西南等地區(qū)豬群分離鑒定了25株古典型H1N1亞型豬流感病毒。2006年，從廣東豬群中分離到1株類人H1N1亞型豬流感病毒。,H3N2,2000年后，H3N2豬流感病毒的分離率也顯著提高。20002001年，從黑龍江、吉林、遼寧、安徽、山東、內(nèi)蒙、河南、河北、江蘇、浙江、湖北、福建、廣東、海南、上海等省、市豬群中分離到39株H3N2豬流感病毒。20052006年，從黑龍江、廣東豬群中分離到4株類人H3N2亞型豬流感病毒。從分離結果看，H3N2和H1N1在中國的豬群中的分離率分別為08和07，這說明H3N2和H1N1是中國豬群中的主要流行毒株。,H9N2,豬流感H9N2亞型流感病毒的研究資料相對較少。1998年從中國供港豬中首次分離到4株H9N2亞型流感病毒，其所有基因片段與早期H9N2亞型AIV高度同源，說明該亞型毒株幾年前已突破禽種間屏障進入豬群并在豬群中聲息演化。這也是首次從哺乳動物體內(nèi)分離到H9N2亞型流感病毒。2001年在山東和福建豬群中分離到H9N2亞型流感病毒，2002年在遼寧、廣東、山東、重慶的豬血清中檢測到抗H9N2亞型流感病毒抗體，2003年再次從山東和福建豬群中分離到H9N2亞型流感病毒。,H5N1,2001年以后，從中國豬群中分離到H5N1病毒株。,遺傳分析,通過基因序列分析表明國內(nèi)H1N1病毒分離株與90年代北美SIV的同源性很高，在96左右。通過比較北美SIV的同源性發(fā)現(xiàn)，20年來，古典H1N1SIV以平均0405的年變異率在我國的豬群中傳播演化。這說明豬流感病毒可以在遺傳性不發(fā)生明顯改變的情況下在豬群中長期存在，但并不一定引起豬發(fā)病，只有在條件適合時才會引起豬群發(fā)病。,小結,已有的研究認為，我國南方地區(qū)的生態(tài)環(huán)境有利于流感病毒生息和變異，可能成為世界新流感新亞型出現(xiàn)和爆發(fā)的疫源地應引起高度重視。全球幾乎每年都有部分國家和地區(qū)暴發(fā)豬流感，而且不斷有新亞型的豬流感病毒出現(xiàn)，這給豬流感的防治工作帶來了極大的困難。加強對豬流感的檢測力度，盡可能地對豬流感的流行趨勢做出預測，從而及時有效地防止豬流感的暴發(fā)。,二、豬在流感病毒種間傳播的作用,已有的研究認為，包括豬在內(nèi)的所有哺乳動物的流感病毒均來源于禽。由于人豬鳥和其他哺乳動物的密切接觸，給流感病毒的跨越物種傳播提供了一個自然發(fā)生的機會。,,,人豬共居,,由于豬的呼吸道上皮細胞表面同時具有SAΑ2,3GAL和SAΑ2,6GAL兩種類型的受體，因而降低了豬的種間屏障，使得豬具有最大限度地被人流感病毒和禽流感感染的能力。當禽流感病毒感染豬后，在宿主種間屏障、疫苗的選擇壓力下，可以使禽流感病毒受體連接特異性由Α2,3轉變?yōu)棣?,6連接，從而為鳥類與人之間提供一個潛在的鏈接，使禽流感病毒可以向人進行傳播。,研究表明當禽流感病毒和人流感病毒同時感染豬時，在豬體內(nèi)會產(chǎn)生這兩種病毒的重組毒株。同盡管有些禽病毒不能在豬中復制，但可以在與豬流感病毒共感染豬時提供基因產(chǎn)生重組病毒。所有這些均可證明，豬不僅是禽源和人源流感病毒的“中間宿主”，也是“混合器”，而在流感病毒生態(tài)學上占有重要位置。豬在產(chǎn)生人流感新毒株方面起到重要作用。,由于豬和其他物種尤其是與人的直接或間接接觸在世界范圍內(nèi)都是很密切的，致使豬作為流感病毒中間宿主的角色變得異常重要，為流感病毒的進化和種間傳播提供了重要的路徑。流感專家認為，豬體內(nèi)的流感病毒是人流感病毒的潛在來源，下一次人類流感大流行的流行株基因中將含有現(xiàn)今流行于歐洲豬群中的禽流感病毒基因片段，對豬群中禽流感病毒基因的監(jiān)測可預兆引發(fā)人類下一次流感大流行的病毒株。,三、豬作為中間宿主在人流感病毒進化中的作用,回顧20世紀幾次人類流感的大流行，可以看出每次人類流感的發(fā)生都伴隨有同種亞型豬流感的發(fā)生。1976年在美國的新澤西洲軍事基地暴發(fā)的由豬流感病毒引發(fā)的造成一人死亡、數(shù)百人疑似感染的人流感中，懷疑可能發(fā)生了人與人之間的傳播。這一事件在當時震驚了全世界，也最先證明了人可以感染豬流感病毒。1974年以后，美國已有至少9次人感染豬流感的報道，其中也包括致死性感染。期間，其他國家也出現(xiàn)了相關報道。,在北美歐洲亞洲已有A型豬流感病毒感染人的報道。這些感染事例涉及古典的H1N1豬流感病毒、重組的H3N2病毒及重組的H1N1病毒。但這種感染只是零星地發(fā)生在與感染豬有過直接接觸的人當中，所以其感染范圍不大，并沒有造成世界性的恐慌。,但是，SIV在公共衛(wèi)生和流感病毒的進化史上具有重要意義，人類的流感爆發(fā)與豬流感的爆發(fā)有驚人的平行性和相關性。種種跡象表明，H1N1和H3N2亞型SIV與同時期引起人流感大流行的H1N1和H3N2人流感病毒遺傳關系十分緊密。,從生態(tài)學意義上講，豬不可避免的要與人或鳥類有密切的接觸，而由于豬對禽流感病毒和人流感病毒均易感，所以豬自然而然地成為流感病毒的重要宿主。通過豬的混合器作用，使人和禽流感病毒具有了跨物種傳播的能力，也使豬流感具有了重要的公共衛(wèi)生學意義。,四、二十世紀三次流感大流行,進入二十世紀，人類經(jīng)歷過三次流感大流行，即1918年的西班牙流感、1957年的亞洲流感和1968年的香港流行。每次流感大流行都給人類帶來了巨大的災難，并且都可能與SIV保持著千絲萬縷的聯(lián)系。,（一）西班牙流感,1918年的西班牙流感是由H1N1亞型流感病毒引起的，是流感大流行最嚴重的一次，導致全球20004000萬人死亡，患病7億以上。SI也正是在西班牙流感期間在美國、匈牙利和中國首次被觀察到，同樣也是H1N1亞型流感病毒引起的。它們的病原H1N1亞型流感病毒可能來自一個共同的祖先。最近科學家們利用反向遺傳手段，拯救出該病毒，序列分析表明該病毒來源于禽流感病毒。但該禽流感病毒究竟是“禽–人”直接的跨種傳播，還是經(jīng)歷“禽–豬–人”種間適應，還不得而知。,,1918SPANISHFLU,（二）亞洲流感,1957年的亞洲流感是由H2N2亞型流感病毒引起，首先發(fā)生在我國貴州西部，隨后同年傳遍全世界，病死率不高，有報道稱共造成全球約280萬人死亡。此此流行毒株是二源重組病毒，它的PB1、HA和NA基因來自于禽流感病毒，而其它5個（PB2、PA、NP、M、NS）基因來源于當時流行于人群中的H1N1亞型流感病毒。關于該流行株產(chǎn)生的機制很可能是禽流感病毒和人流感病毒經(jīng)歷了豬體內(nèi)的重組過程，然后由豬傳染給人，從而導致此次流感大流行。,（三）香港流感,1968年首發(fā)于我國香港特區(qū)并波及全世界，是由H3N2亞型毒株引起的，它的傳播速度和發(fā)病率均不及第二次。此此流行株的PB1和HA基因來自于禽流感病毒，而其它6個（PB2、PA、NP、NA、M、NS）基因來自當時流行于人群中的H2N2病毒，也是來自人流感病毒和禽流感病毒的二源重組病毒。該流行株產(chǎn)生的機制與1957年亞洲流感流行株產(chǎn)生的機制類似，同樣可能經(jīng)歷了豬體內(nèi)的重組過程。,五、當前全球A∕H1N1流感流行情況,4月中下旬，墨西哥和美國相繼出現(xiàn)豬流感疫情，并逐漸向其他國家蔓延。美國急控中心證實，病原是A∕H1N1型流感病毒。這一毒株是一種新型變異病毒，是人類流感病毒、北美洲禽流感病毒，以及北美洲、歐洲和亞洲豬流感病毒的混合體。FAO病毒中包含從1998年起就在歐洲、亞洲、美洲的生豬中傳播的病毒（8個基因片段中5個來自豬，2個來自禽，1個來自人），說明病毒是一種在豬上傳播的毒株，經(jīng)1012年逐漸在人類身上產(chǎn)生變異，并具備了禽流感和人流感病毒的基因成分。,這次的豬流感病毒可在人際間傳播，目前無疫苗可防，可使用抗病毒藥物治療。此前大多數(shù)流感的易患人群均為老年人和兒童，而這一次的流感主要攻擊人群為青壯年。全部為人傳人，沒有證實是由豬傳播開并傳染人（WHO）。所有患者之前都沒有與豬的接觸史。患者潛伏感染期發(fā)病第一天就排毒。,豬流感疫情暴發(fā)后，各國專家組成了世界衛(wèi)生組織豬流感疫情緊急委員會，于4月25日舉行了第一次會議。世界衛(wèi)生組織總干事陳馮富珍在25日晚間發(fā)表的聲明表示“建議所有國家加強對非正常暴發(fā)的流感類疾病和嚴重肺炎的監(jiān)控。”美國疾控中心專家表示，疫情一旦在地理上的感染范圍擴大，這種病毒可能很難控制。,4月27日世界衛(wèi)生組織決定將流感大流行級別從3級提高到4級，4月29日提高到5級。世衛(wèi)組織的流感大流行警告共分6個級別?！暗?級”意味著一種新的亞型流感病毒正在造成人類感染，但還沒有造成到在人際間有效且持續(xù)地傳播擴散。“第4級”意味著一種新病毒在人際間傳播，可以引起“群體性”暴發(fā)。第5級”意味著同一類型流感病毒已在同一地區(qū)至少兩個國家人際間傳播，并造成持續(xù)性疫情。,命名質疑,4月27日，世界動物衛(wèi)生組織（OIE）總干事瓦拉特表示，墨西哥等國近日出現(xiàn)的流感病毒是多種病毒的混合體，目前只在人與人之間傳播，并不像人們通常認為的完全由豬引起的，因此把目前出現(xiàn)的流感簡單地命名為豬流感是不準確的。瓦拉特建議，應按照傳統(tǒng)，以發(fā)源地對流感進行命名，將這次流感稱為北美流感。,美國政府官員4月28日表示正考慮為眼下肆虐的流感疫情換名稱。美國官員認為，雖然豬流感病毒對這場疫情災難有一定影響，但把目前流行的流感簡單地命名為“豬流感”并不準確，將對北美豬肉及豬肉制品出口造成嚴重影響。建議稱呼當下疫情為“2009H1N1流感”,歐盟28日將此疫情的稱呼更改為“新型流感”為避免給畜牧業(yè)等一些產(chǎn)業(yè)帶來負面影響，將不使用‘豬流感’這一稱呼，而是稱之為‘新型流感’。世界衛(wèi)生組織4月30日發(fā)布公告指出，從即日起，世衛(wèi)組織在談到本次流感爆發(fā)時，將使用“A（H1N1）流感”的名稱。聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界動物衛(wèi)生組織也做出了同樣的決定。5月1日，我國衛(wèi)生部稱“人感染甲型H1N1流感”定為乙類傳染病，采取甲類傳染病預防控制措施。,5月2日，加拿大食品檢驗局證實加西部艾伯塔省一豬場的豬身上檢測出甲型H1N1流感病毒，這是世界首次發(fā)現(xiàn)豬受體這種新病毒感染。這些豬有可能是被一名豬場工人傳染患病的。WHO將豬流感納入重大疫病監(jiān)測范圍。,國務院新聞辦30日舉行加強人感染豬流感防控工作的發(fā)布會，農(nóng)業(yè)部副部長高鴻賓在會上為豬鳴“冤”?！斑@次是人有病，豬沒病，這個病在人際之間傳播，外國人有病，中國人沒病，中國的豬更沒有病。”,各國應對措施,墨西哥總統(tǒng)24日召開緊急會議，宣布全國進入衛(wèi)生緊急狀態(tài)，從24日起關閉學校；全民發(fā)放口罩；首都取消一切公共活動；總統(tǒng)授權強制隔離；救援人員發(fā)放防治藥具等。美國宣布于4月26日進入公共衛(wèi)生緊急狀態(tài)，啟動CDC的應急中心；于WHO、加拿大和墨西哥密切聯(lián)系獲得信息；針對美國病例開展溯源調查；在家庭成員和密切接觸者中開展血清學調查；開展健康教育和風險溝通；要求CDC工作人員進行自我監(jiān)測和報告等。加拿大加強異常流感病例的報告，尤其是從墨西哥返回的人員；要求對方上送所有未分型流感病毒及重癥不明原因呼吸道患者的標本；進行風險溝通和健康教育；及時發(fā)布和共享信息等。,,根據(jù)世界衛(wèi)生組織最新數(shù)據(jù)，全球甲型H1N1流感確診病例連續(xù)三天以日均千例的數(shù)量增加。而日本、英國等多個國家擔心經(jīng)濟遭受打擊，請世衛(wèi)組織在提升全球警告級別前要深思。據(jù)世衛(wèi)組織最新公布的資料顯示，截至十九日，全球共有甲型H1N1流感確診及死亡病例九千八百三十例，其中死亡七十九例。這些病例來自40個國家個地區(qū)。全球死于甲型H1N1流感的病例中，多數(shù)人在感染流感前已患有心臟病、糖尿病等慢性疾病，感染流感后病情惡化最終死亡。而根據(jù)目前臨床觀察，全球慢性病患者以及死亡病例的大約百分之八十五都集中在那些中低收入國家。感染甲型H1N1流感以及死亡風險較高的人群在發(fā)展中國家最多。此外，孕婦感染甲型H1N1流感及死亡風險較高，尤其在那些醫(yī)療衛(wèi)生體系薄弱的國家，流感的侵襲將會增加孕婦的死亡風險。陳馮富珍強烈呼吁各國密切關注疫情動態(tài)，各盡所能共同保護發(fā)展中國家，以避免它們再次成為全球性疫病中的最大受害者。,,過去兩天來，日本的甲型H1N1流感確診病例迅速攀升到一百七十多例，引起世衛(wèi)組織等高度關注。輿論預測，如果日本的疫情進一步惡化，世衛(wèi)組織可能在近期宣布流感大流行警告級別升至六級。但在本次世界衛(wèi)生大會上，日本、英國、墨西哥等多個國家稱，世衛(wèi)組織一旦宣布全球流感大流行，勢必會引發(fā)各國民眾恐慌，世界經(jīng)濟將遭受沉重打擊。比如某些國家可能關閉邊界、限制旅行；各國機場可能加強檢疫和隔離措施；疫苗生產(chǎn)商將被迫停產(chǎn)季節(jié)性流感疫苗，轉產(chǎn)針對甲型H1N1流感病毒的疫苗；各國的醫(yī)療衛(wèi)生體系屆時也可能不堪重負。這些國家請世衛(wèi)組織在決定提升警告級別前一定要深思，并提議應修改宣布進入流感大流行的標準，認為除了流感在全球的傳播范圍，還應該考慮病毒的致命程度。,中國,國務院4月28號召開專門會議研究部署防控工作，要求當前要按照“高度重視、積極應對、聯(lián)防聯(lián)控、依法科學處置”的原則，抓好重點工作。公共衛(wèi)生緊急事件，“堵外防內(nèi)”。國務院于5月5日召開第61次常務會議精神，進一步部署甲型H1N1流感防控工作。,農(nóng)業(yè)部緊急部署,一是成立豬流感監(jiān)測預防專家組。二是做好應急準備。三是加強監(jiān)測。四是加強豬流感研究工作。五是促進生豬生產(chǎn)穩(wěn)定發(fā)展。六是科學引導輿論。,強化措施,一是切實加強甲型H1N1流感監(jiān)測和流行病學調查工作。二是切實加強養(yǎng)豬場綜合防疫管理。三是切實加強檢疫監(jiān)管。四是切實加強實驗室生物安全管理。五是切實加強聯(lián)防聯(lián)控。六是切實加強督促檢查。七是切實加強應急準備。八是切實穩(wěn)定生豬生產(chǎn)。,在前期豬群中甲型H1N1流感監(jiān)測和流行病學調查工作的基礎上，安排對家禽和野鳥開展甲型H1N1流感監(jiān)測和流行病學調查，進一步強化應急物資儲備。,應急預案,4月29日，發(fā)布農(nóng)業(yè)部門應對人感染豬流感病例應急預案，規(guī)范各級獸醫(yī)主管部門協(xié)助衛(wèi)生部門查找人感染豬流感病例的病原，預防、控制和撲滅豬流感疫情，防治疫情擴散蔓延等工作。對我國一旦發(fā)生人感染北美豬流感病毒病例后，各級獸醫(yī)主管部門會同有關部門開展應急監(jiān)測、預警、疫情報告、疫情處置、應急響應等做出詳細規(guī)定。,5月5日，下發(fā)豬感染甲型H1N1流感應急預案。對各級獸醫(yī)主管部門開展甲型H1N1流感感染豬的風險評估、監(jiān)測、預警、控制和撲滅、疫情報告、應急響應等做出詳細規(guī)定。,一、應急監(jiān)測臨床觀察、流行病學調查、血清學和病原學監(jiān)測二、預警三、疫情報告和確認對疑似疫情，采取隔離、疫情溯源和跟蹤。對確診疫情，要及時劃定疫點、疫區(qū)、受威脅區(qū)，采取撲殺、無害化處理、消毒、關閉受威脅區(qū)生豬交易市場和生豬定點屠宰場等措施。,四、應急處置檢測發(fā)現(xiàn)生豬感染甲型H1N1流感的，立即按照國家突發(fā)重大動物疫情應急預案規(guī)定，啟動重大（Ⅱ級）應急響應機制，必要時啟動特別重大（Ⅰ級）應急響應機制，按規(guī)定開展處置工作。五、保障措施物資、資金、技術、人員。,要求各地畜牧獸醫(yī)部門認真執(zhí)行預案，并結合本地實際情況，制定實施方案，保障生豬生產(chǎn)健康發(fā)展，保障人民身體健康安全。,五、生物安全,一、實驗室生物安全農(nóng)業(yè)部辦公廳關于加強甲型H1N1流感病毒實驗活動監(jiān)管工作的通知，明確甲型H1N1流感是新型人畜共患病，對涉及甲型H1N1流感病毒實驗活動的，要進行嚴格審批。未經(jīng)農(nóng)業(yè)部批準，一律不得擅自從事動物間甲型H1N1流感病毒的分離工作。二、人員安全防護,六、對當前疫情形勢的判斷,1、與季節(jié)性流感相似；2、比季節(jié)性流感弱，很快平息；3、與季節(jié)性流感相比，傳播速度快，發(fā)病率高，死亡率高。目前疫情表現(xiàn)的“不確定性”。,七、疫控機構的主要工作,當前的流感疫情表明豬被感染的可能性不被排除，盡管經(jīng)濟學意義不大，但公共衛(wèi)生意義巨大。為此需做好以下工作1、摸清家底每日觀察豬群狀況，養(yǎng)殖的數(shù)量、規(guī)模、飼養(yǎng)方式，為進一步的防控提供背景資料。2、疫情監(jiān)測農(nóng)業(yè)部已經(jīng)下發(fā)了監(jiān)測方案，兵團也做了相應部署，各單位應按時上報有關情況和數(shù)據(jù)，對轄區(qū)防控工作進行評估。,,3、加強衛(wèi)生監(jiān)督管理嚴格檢疫出證的管理；在監(jiān)測的基礎上，一旦出現(xiàn)疫情，按1類疫病處理（目前OIE將此病列為二類疫病，我國列為三類疫病），處理措施將非常嚴格，注意人員防護。4、各級實驗室生物安全管理包括轄區(qū)實驗室的管理和自身實驗室的管理，嚴禁開展病原的分離活動。5、做好應急預案和防控物質準備。6、做好技術儲備和相關技術培訓工作。7、指導養(yǎng)殖者做好其它疫病的防控。,,責任重大任務艱巨,

簡介：第七章細菌與病毒的微生物學檢查法,微生物學教研室JIZZHAOJ12ZHAOALIYUNCOM,教學大綱,掌握內(nèi)容標本的采集和送檢原則病原菌的檢驗程序細菌感染的血清學診斷及常用方法了解內(nèi)容病原體的抗原成分、核酸及其他成分的檢測方法,病原學檢查的目的,進行病因學診斷指導合理用藥觀察治療進行傳染病的流行病學調查,,標本的采集和送檢六原則※,無菌操作避免雜菌污染,不同期不同標本,用抗生素以前,采集病變明顯部位,,,,,,,,,,,,,運送注意保存,采集雙份血清,第一節(jié)細菌感染的微生物學檢查法,可疑細菌感染,,采集標本,,,血清學實驗雙份血清,直接形態(tài)學檢查,細菌成分檢測,,特異性抗體檢測,,細菌分離培養(yǎng),,鑒定,,,形態(tài)學檢查生化學檢查血清學鑒定藥物敏感實驗動物（毒力）實驗,,,抗原檢測,核酸檢測,,,直接凝集實驗協(xié)同凝集實驗乳膠凝集實驗免疫熒光檢測ELISA等,核酸雜交聚合酶鏈反應（PCR）DNA芯片,凝集反應沉淀反應補體結合試驗中和試驗ELISA等,,,,,,,細菌學診斷,檢測病原菌成分,檢測患者血清中特異性抗體,,細菌病原學檢查法,形態(tài)學檢查分離培養(yǎng),純培養(yǎng)生化試驗血清學鑒定藥物敏感試驗毒力實驗動物實驗,,抗原,核酸,一、細菌學診斷,（一）形態(tài)學檢查,光學顯微鏡檢查法細菌染色檢查法革蘭染色法抗酸染色法負染法暗視野檢查用于檢查活菌、螺旋體及其動力熒光顯微鏡,腦脊液的直接涂片染色肺炎鏈球菌,,鏈球菌,淋病奈瑟球菌膿液直接涂片,結核分枝桿菌,霍亂弧菌,,暗視野顯微鏡,鉤端螺旋體,肺炎雙球菌,病原菌的分離培養(yǎng)/直接涂片,大小形態(tài)顏色表面性狀透明度溶血性,FLAMESTERILIZEWIRELOOP,METALFORCEPS,ETCBEFOREANDAFTERUSEINAHOODEDBUNSENBURNER,細菌動力的檢測,化膿性球菌,葡萄球菌,鏈球菌,腸道桿菌,大腸埃希菌,沙門氏菌,志賀菌,細菌形態(tài)無特異性可采用生化學檢查法鑒別細菌的重要方法,（二）生化試驗,糖發(fā)酵試驗H2S試驗枸櫞鹽利用試驗,鑒定中最重要的生化反應※,乳糖發(fā)酵試驗,腸道非致病菌（埃希菌屬）發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣＋,腸道致病菌（志賀菌屬、沙門菌屬等）不發(fā)酵乳糖,,,,,（三）血清學鑒定,利用含已知的特異性抗體的免疫血清，檢測未知的細菌抗原，對細菌進行種的鑒定志賀菌屬、沙門菌屬常用方法是玻片凝集試驗,測定抗生素或其他抗微生物制劑在體外抑制細菌生長的能力方法擴散法、稀釋法,（四）藥物敏感試驗,MICMBC,最低抑菌濃度，MIC最低殺菌濃度，MBC,全自動分析儀,全自動細菌鑒定儀,全自動生化分析儀,（五）檢測毒力動物實驗,1常用動物MOUSEGUINEAPIGRABBITDOGMONKEY,接種途徑,皮內(nèi)皮下腹膜內(nèi)靜脈顱內(nèi)椎管內(nèi)鼻內(nèi)灌胃,毒力檢測,半數(shù)致死量LD50半數(shù)感染量ID50,二、檢測病原菌成分,抗原的檢測核酸的檢測,（一）抗原的檢測,利用已知的特異性AB檢測AG的方法常用的方法有玻片凝集協(xié)同凝集試驗ELISA免疫熒光法,ELISA,（二）核酸檢測方法,聚合酶鏈反應（PCR）核酸雜交技術SOUTHERNBLOTNORTHERNBLOTDOTBLOTINSITUHYBRIDIZATION基因芯片GENECHIP16SRRNA,16SRNA基因序列分析,只存在于原核細胞型微生物的染色體基因中16SRNA，23SRNA,5SRNA可變區(qū)和保守區(qū)保守區(qū)所有的細菌所共有可變區(qū)屬和種的特異性,PCR,GENECHIP,,,三、抗體的檢測,用已知細菌或其AG檢測相應的特異性AB及其量的多少，作為某些病原菌感染的輔助診斷急性期和恢復期雙份血清，恢復期效價升高≥4倍有診斷價值方法玻片或試管凝集試驗、沉淀試驗、補體結合試驗、冷凝集試驗、ELISA局限難以早期診斷,第二節(jié)病毒感染的微生物學檢查法,形態(tài)學病毒的分離鑒定在培養(yǎng)細胞中增殖的鑒定指標病毒成分的檢測病毒抗體的檢測,,（一）病毒的形態(tài)學檢查,電子顯微鏡（EM）免疫電鏡,IEM光學顯微鏡（CM）包涵體內(nèi)基小體（NEGRIBODY）,HAV,NEGRIBODY,動物接種動物模型,雞胚接種9～14D,組織培養(yǎng),器官培養(yǎng),組織培養(yǎng),細胞培養(yǎng),原代細胞培養(yǎng),,二倍體細胞培養(yǎng),傳代細胞培養(yǎng),三大培養(yǎng)方法,（二）病毒的分離培養(yǎng)的方法,,,血凝抑制實驗中和實驗PCR檢測,,,,病毒分離培養(yǎng)及鑒,細胞病變（CYTOPATHY※紅細胞吸附HEMADSORPTION病毒干擾作用VIRALINTERFERENCE中和試驗NEUTRALIZATIONTEST,NT空斑形成試驗PLAQUEFORMATION,病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的鑒定指標※,細胞病變細胞病變效應※（CPE）,細胞病變紅細胞吸附血凝素（HA）病毒干擾作用中和試驗病毒數(shù)量及感染性的檢測空斑形成試驗紅細胞凝集,紅細胞吸附,病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的鑒定指標,,PLAQUE,空斑形成試驗,用于病毒濃度的精確定量和測定抗病毒藥物的作用一個空斑是由一個病毒大量復制而成，稱為空斑形成單位（PLAQUEFORMINGUNIT，PFU）。病毒的感染量用PFU/ML表示,（三）病毒成分的檢測,病毒抗原的檢測ELISA病毒核酸的檢測核酸雜交、PCR、基因芯片,病毒成分的檢測,（四）病毒抗體的檢測,中和試驗（NT）血凝抑制試驗（HT）補體結合試驗（CF）ELISA法蛋白印跡技術,小結,細菌感染的微生物學檢查法病原體檢查核酸的檢測抗原、抗體的檢測病毒感染的微生物學檢查法電鏡及免疫電鏡病毒的分離培養(yǎng)和鑒定核酸的檢測抗原、抗體的檢測,小結,抗細菌免疫固有免疫※獲得性免疫抗病毒免疫固有免疫干擾素※獲得性免疫,問題,采集標本的原則病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的鑒定指標干擾素的概念及其抗病毒機制,自檢內(nèi)容,1機體抗結核分枝桿菌的感染免疫主要依賴A屏障結構B細胞免疫C抗體的中和作用D非特異性免疫分子E吞噬細胞的吞噬作用2滅活和清除游離病毒主要依靠A干擾素B抗體C細胞因子D非特異性免疫分子E皮膚粘膜屏障,自檢內(nèi)容,3抑制病毒的增殖，保護鄰近細胞免疫受病毒感染的抗病毒作用機制是A抗體BNK細胞C細胞因子D干擾素ECRP4傷寒病人，病程有5天左右，應采集的標本是A血液B糞便C尿液D咽部E膿液,

簡介：1附件2寨卡病毒病流行病學個案調查表一、基本情況一、基本情況（一）患者姓名________________聯(lián)系電話____________如患者年齡14歲，則家長姓名___________聯(lián)系電話____________（二）性別（1）男（2）女（三）年齡_____歲（四）家庭住址____省（自治區(qū)直轄市）____市____縣（市區(qū)）_____鄉(xiāng)（鎮(zhèn)街道）_____村（居委會）（五）工作單位________________________________________________（六）職業(yè)（1）幼托兒童（2）散居兒童（3）學生（4）教師（5）保育保姆（6）飲食從業(yè)人員（7）商業(yè)服務（8）醫(yī)務人員（9）工人（10）民工（11）農(nóng)民（12）牧民（13）漁（船）民（14）干部職員（15）離退人員（16）家務待業(yè)（17）其他（七）若是輸入性病例，請?zhí)顚懸韵聝?nèi)容1國籍________________________________2從何處入境本地3入境口岸________________________________；入境時間年月日4入境原因1旅行2商貿(mào)往來3留學4探親訪友5其他________________5入境后到經(jīng)地區(qū)及停留時間地點1___________；日期年月日至年月日地點2___________；日期年月日至年月日二、二、發(fā)病與病與臨床癥狀床癥狀（一）發(fā)病日期_______年______月_______日（二）首發(fā)癥狀______________________________（三）相關癥狀體征1發(fā)熱（38℃以上）（1）有（2）無（3）不詳如有，則日期____月_____日至____月___日，最高體溫____℃，或（未）檢測。2關節(jié)痛（1）有（2）無（3）不詳主要累及的關節(jié)為（可多選）①手腕②腳踝③腳趾④手指⑤膝⑥肘⑦肩關節(jié)⑧脊柱⑨其他3肌肉痛（1）有（2）無（3）不詳如有，部位______________________________4皮疹（1）有（2）無（3）不詳，皮疹為①斑丘疹②麻疹樣皮疹條線狀③猩紅熱樣皮疹簇狀④紅斑疹⑤其他皮疹部位（可多選）①全身②軀干③四肢④面部⑤其他5頭痛（1）有（2）無（3）不詳6結膜充血（1）有（2）無（3）不詳7顏面潮紅（1）有（2）無（3）不詳8胸紅（1）有（2）無（3）不詳9出血癥狀（1）有（2）無（3）不詳如有，則出血部位為（多選）①結膜出血②鼻出血③牙齦出血④嘔血⑤便血⑥血尿⑦其他10神經(jīng)癥狀（1）有（2）無（3）不詳如有，則日期______月______日至______月______日，癥狀描述____________________________11如為婦女，有無懷孕（1）有（2）無（3）不詳如有，則孕期為周3日期家中工作單位公園運動場所市場學校醫(yī)院其他備注六、共同暴露者健康狀況六、共同暴露者健康狀況（一）有無家庭其他成員接觸者出現(xiàn)過類似癥狀（1）有（2）無（3）不詳（二）家中人口數(shù)___人，出現(xiàn)類似癥狀者___人；（三）工作單位所在部門人數(shù)___人，出現(xiàn)類似癥狀者___人；請將出現(xiàn)類似癥狀的家庭成員或同事的相關情況填入下表姓名與患者關系年齡性別發(fā)病日期就診情況采樣日期備注七、其他需七、其他需補充內(nèi)容充內(nèi)容八、八、備注（一）血常規(guī)檢查（二）病原學診斷檢測（三）病例診斷分類本病例屬于（輸入性病例、本地病例）

簡介：呼吸道病毒,呼吸道病毒是指一大類能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病變或僅以呼吸道為入侵門戶，主要引起呼吸道外組織器官病變的病毒。拒統(tǒng)計，90以上的急性呼吸道感染由該類病毒引起。,呼吸道病毒的分類,呼吸道病毒包括正粘病毒科流感病毒副粘病毒科副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒其他病毒科腺病毒、風疹病毒、鼻病毒、冠狀病毒、呼腸病毒,流行性感冒病毒（INFLUENZAVIRUS）,流行性感冒病毒，簡稱流感病毒，甲、乙、丙三型,引起人和動物流感甲型流感病毒是反復流行最為頻繁和引起流感全球流行的重要病原體。,流感病毒的生物學性狀,流感病毒呈球形或絲狀，球形直徑8020NM，新分離株絲狀多于球形有包膜，單鏈分片段的RNA病毒。,流感病毒的電鏡照片,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,1,2,4,3,5,6,7,8,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,PB2,PB1,RNP,,,RNA,,,,,M2,,M1,,NA,,HA,分節(jié)段的（）SSRNA,,PA,,,RNA多聚酶,核糖核蛋白（RNP）,,流感病毒的表面結構,血凝素HA柱狀，為三聚體，它基本上以相同的間距覆蓋了病毒的全部表面HA1（病毒吸附）HA2（核衣殼釋放）保護性抗原，血凝抑制抗體保護性抗體神經(jīng)氨酸酶（NA）四個亞單位組成的四聚體，并不平均分布在病毒表面，而是聚合成群。與病毒釋放有關。,流感病毒的內(nèi)部結構,核衣殼病毒分片段的RNA，結合有核蛋白（NP）以及與復制和轉錄有關的三種依賴RNA的RNA多聚酶蛋白。呈螺旋對稱。基質蛋白（M蛋白）覆蓋在核衣殼外面，M蛋白抗原性穩(wěn)定，也具有型特異性。M1增加包膜厚度M2輔助HA2釋放核衣殼外膜來自宿主細胞的脂質雙層膜。,流感病毒的結構,,核心,分節(jié)段的（）SSRNA,核蛋白（NP）,RNA多聚酶,,基質蛋白M蛋白,具型特異性,包膜,刺突,血凝素HA,神經(jīng)氨酸酶NA,,M1,M2,流感病毒的復制,病毒侵入遺傳物質的釋放病毒的復制與病毒蛋白的合成病毒的裝配出芽,流感病毒復制過程示意圖,流感病毒的分型與抗原變異,分型據(jù)RNP和M蛋白抗原性分甲、乙、丙三型甲型根據(jù)HA和NA抗原性不同，再區(qū)分為若干亞型（H1H15、N1N9）乙型、丙型至今未發(fā)現(xiàn)亞型命名型別/宿主/分離地點/病毒株/序號/分離年代HA與NA亞型號（A/HONGKONG/1/68H3N2,流感病毒的抗原變異,抗原漂移（ANTIGENICDRIFT）因HA或NA的點突變造成，變異幅度小，屬量變，引起局部中、小型流行。抗原轉換（ANTIGENICSHIFT）因HA或NA的大幅度變異造成，屬質變，導致新亞型的出現(xiàn)，引起世界性的暴發(fā)流行。,,致病性與免疫,致病性,傳染源病人或病毒攜帶者,致病機理病毒不入血,病毒呼吸道毒素樣物質進入血液,全身中毒癥狀,局部粘膜上皮炎癥,,,同型有12年免疫力,免疫物質為SIGA及中和抗體（IGG、IGM）,免疫性,傳播途徑病毒飛沫，呼吸道傳播,流感病毒的其他生物學特性,培養(yǎng)特性可在雞胚和培養(yǎng)細胞中增殖，但不引起明顯的病變；培養(yǎng)液中加入胰液，促使HA裂解，可擴大培養(yǎng)細胞范圍。抵抗力不耐熱，對干燥、乙醚、甲醛和乳酸等敏感。,流行性感冒（INFLUENZA）,“流行性感冒”（INFLUENZA）是英國人JOHNHUZXAM在1743年創(chuàng)造的字，他依據(jù)意大利語中用來描述這個疾病起源的片語“UNINFUENZADIFREDDO”，即“寒冷的影響”。它主要發(fā)生在深秋、冬天和早春季節(jié)。每年都有數(shù)以百萬計的人群受到感染。,常見癥狀,發(fā)熱UPTO39畏寒肌肉酸痛出汗咳嗽鼻塞咽痛頭痛厭食乏力,微生物學檢查,病毒分離取患者咽漱液或鼻咽拭，接種雞胚或培養(yǎng)細胞血清學診斷血凝抑制試驗、中和試驗、補體結合試驗、酶免疫測定抗原檢測直接從病人呼吸道分泌物、脫落細胞中檢測抗原分型鑒定核酸雜交、PCR、序列分析,流感的防治,藥物治療鹽酸金剛烷氨、干擾滴鼻素、板蘭根、大青葉接種疫苗流感病毒滅活疫苗病毒表面抗原疫苗減毒活疫苗,副粘病毒（PARAMYXOVIRUS）,與正粘病毒一樣，核衣殼呈螺旋對稱，有包膜的單負鏈RNA病毒，同時又有自己的特點病毒體積大（）SSRNA不分節(jié)段包膜刺突蛋白不同（HN、H、G、F蛋白）,麻疹病毒（MEASLESVIRUS）,麻疹病毒是麻疹的病原體。臨床表現(xiàn)為高熱、畏光，結膜炎、鼻炎、咳嗽是三個主要的前驅癥狀。麻疹本身可自愈，但常引起嚴重的并發(fā)癥而導致死亡。,麻疹病毒的生物學性狀及免疫,包膜刺突為H蛋白和F蛋白免疫力牢固，抗H抗體和抗F抗體可抵御再感染恢復期主要為細胞免疫母親抗體可保護新生兒,麻疹病毒的傳播,人是麻疹病毒的自然宿主急性期患者為傳染源通過飛沫或鼻腔分泌物傳播,麻疹病毒的致病機理,入侵（CD46為病毒受體）,呼吸道上皮細胞內(nèi)增殖,,入血（第一次病毒血癥）,侵入淋巴組織和單核吞噬細胞系統(tǒng),增殖后再次入血（第二次病毒血癥）,多種組織、器官受累，表現(xiàn)為細胞融合成多核巨細胞，核內(nèi)形成嗜酸性包涵體等,,,,,,麻疹的臨床表現(xiàn),潛伏期約1012天體溫略高、咳嗽、流涕、好打噴嚏及淚眼，癥狀持續(xù)35天體溫突然升高（達到40405C），口頰粘膜出現(xiàn)柯氏斑，隨后出現(xiàn)紅色班丘疹，從耳部開始，23天后遍及全身4天后消退，脫屑,柯氏斑,,麻疹的并發(fā)癥,呼吸道最為常見，如肺炎、肺結核消化道腹瀉、闌尾炎或盲腸炎營養(yǎng)失調神經(jīng)中樞系統(tǒng)亞急性硬化性全腦炎（SSPE）,麻疹的治療,控制高熱保持室內(nèi)濕度及時補液注意飲食營養(yǎng)兒童應補充維生素A注意并發(fā)癥,麻疹的預防,雞胚細胞麻疹病毒減毒活疫苗我國接種年齡為8個月，發(fā)達國家一般為15個月7歲時再次免疫孕婦不宜接種疫苗緊急被動免疫用丙種球蛋白或胎盤球蛋白,腮腺炎病毒（MUMPSVIRUS）,有包膜，單鏈負義RNA兩種表面包膜蛋白HN和F蛋白另外有四種結構蛋白,傳播方式,腮腺炎病毒是流行性腮腺炎的病原體，只有一個血清型，人是其唯一宿主病毒通過飛沫或直接接觸傳播咳嗽、噴嚏甚至說話都可傳播病毒學齡兒童為易感人群出現(xiàn)癥狀前23天及癥狀消失后9天仍有傳染性,致病性,潛伏期23周在上皮細胞和局部淋巴結內(nèi)增殖入血，病毒隨血侵入腮腺及其它器官主要癥狀為腮腺腫大睪丸炎、卵巢炎及病毒性腦炎病可獲牢固的免疫力,微生物學檢查及預防,分離時可取患者唾液、尿液或腦脊液在雞胚羊膜腔、雞胚細胞內(nèi)培養(yǎng)增殖血清學診斷病毒特異性的IGM或4倍上升的IGG血凝抑制試驗、ELISA和免疫熒光檢測病毒抗原或抗體預防可接種MMR三聯(lián)疫苗,呼吸道合胞病毒（RESPIRATORYSYSCYTIALVIRUS，RSV）,包膜刺突為G蛋白嬰幼兒細支氣管炎和細支氣管肺炎成人上呼吸道感染通過手、污染物品和呼吸道傳播易在冬季流行是醫(yī)源性感染的重要病原體,RSV的致病機制,呼吸道上皮細胞內(nèi)增殖病毒不入血支氣管壞死物與粘液、纖維蛋白粘連在一起，易導致氣道阻塞可并發(fā)嚴重的細支氣管炎和肺炎,RSV的免疫及預防,感染后免疫力不強，不能防止再感染至今未有有效的預防疫苗,腺病毒（ADENOVIRUS）,線型雙鏈DNA，不分節(jié)段基因組長3000042000BP，編碼約30種蛋白病毒無包膜，二十面立體對稱，直徑約7090NM具12個頂角和纖維刺突,腺病毒的EM照片,傳播途徑,糞口途徑呼吸道傳播接觸傳播手眼途徑性接觸,致病性,咽炎急性呼吸系統(tǒng)疾病濾泡性結膜炎，流行性角膜結膜炎咽結膜熱尿路感染（子宮頸炎、尿道炎、出血性膀胱炎）無癥狀的持續(xù)感染,臨床特征,潛伏期58天通常為局部感染一些病毒亞型可導致細胞病變（細胞腫脹、變圓，核內(nèi)出現(xiàn)嗜堿性包涵體）約5的兒童急性呼吸道疾病及約10的嬰幼兒腹瀉由腺病毒引起腦膜腦炎可為腺病毒呼吸道感染的并發(fā)癥,微生物學檢查,取樣用咽拭子、眼結膜分泌物接種原代人胚細胞后傳代HELA細胞等上皮細胞初步鑒定可觀察細胞的病變效應酶聯(lián)免疫測定、熒光免疫測定,預防及治療,普通抗病毒藥物治療效果不理想感染后對同型病毒可產(chǎn)生牢固的免疫力母親的抗體對新生兒有保護作用目前無理想疫苗,風疹病毒（RUBELLAVIRUS）,單正鏈RNA，有包膜包膜刺突有血凝性核衣殼為二十面立體對稱只有一個血清型人是其唯一自然宿主,致病性,兒童是主要易感者呼吸道傳播局部淋巴節(jié)增殖后經(jīng)病毒血癥散播全身可垂直傳播導致胎兒先天性感染,預防及免疫,自然感染后可獲持久免疫力母親抗體可保護胎兒接種風疹減毒活疫苗三聯(lián)疫苗（MMR）,

簡介：概述,中國不僅是一個人口大國，而且也是病毒性肝炎的高發(fā)區(qū)。目前已知的甲、乙、丙、丁、戊、庚及TTV型肝炎，在我國均有發(fā)生，其中尤以甲、乙、丙、戊4個型別的流行情況嚴重。僅乙肝病毒攜帶者以達12億之多?？梢哉f，病毒性肝炎是對我國危害最為嚴重的傳染病。,肝炎病毒,甲型肝炎病毒與戊型肝炎病毒由消化道傳播，引起急性肝炎，不轉為慢性肝炎或慢性攜帶者。乙型與丙型肝炎病毒主要由血液及體液、密切接觸、母嬰傳播、醫(yī)源性等而傳播，除引起急性肝炎外，可致慢性肝炎，暴發(fā)性肝炎并與肝硬化及肝癌相關。丁型肝炎病毒為一種缺陷病毒庚型肝炎病毒（HGV）TT型肝炎病毒（TTV）,一、甲型肝炎病毒（HAV）,,HAV的生物學性狀,屬小RNA病毒科，直徑27NM，無包膜呈20面立體對稱外面為一獨立外殼，內(nèi)含一個單鏈RNA分子,HAV的電鏡照片,HAV的結構,HAV的其他生物學特性,培養(yǎng)特性原代肝細胞或恒河猴胚腎傳代株細胞對HAV敏感，生長緩慢，不引起細胞裂解抵抗力比腸道病毒更耐熱，60℃1H不被滅活，100OC5分鐘可滅活，對乙醚、酸處理（PH3）均有抵抗力。氯消毒、紫外線照射、福爾馬林處理均可破壞其傳染性,HAV的致病性,糞－口途徑傳播,口咽部或唾液腺中早期增殖,腸道與局部淋巴結中大量增殖,入血并形成病毒血癥,肝臟為最終靶器官（病毒直接損傷或免疫病理作用）,通過膽汁隨糞便排出體外,,,,,,,HAV的免疫性,HAV只存在單一的抗原抗體系統(tǒng)，即HAVAG和抗HAV無論顯性感染還是隱性感染均能誘生出高效價抗HAV抗HAVIGM陽性是甲肝的確診依據(jù)IGM型抗體在感染后僅持續(xù)存于36個月IGG型抗體則可存在多年,甲型肝炎,糞－口途徑傳播傳染源多為甲肝患者通過污染的水源、食物、海產(chǎn)品、食具等傳播常造成散發(fā)性流行或大面積流行,常見癥狀,流感樣癥狀厭食惡心黃疸（眼部及皮膚呈黃色）尿黃腹痛乏力,甲肝的防治,控制傳染源隔離治療急性期病人所有廢棄物及日常用水均需嚴格消毒切斷傳播途徑養(yǎng)成良好的衛(wèi)生飲食習慣水產(chǎn)品不宜生吃水果蔬菜要洗干凈,免疫預防,人工被動免疫可用丙種球蛋白及胎盤球蛋白制劑。應急預防甲型肝炎有一定效果。人工主動免疫可用減毒活疫苗。我國生產(chǎn)的甲肝活疫苗只注射一次即可獲得持久免疫力?；蚬こ桃呙缪兄埔嘁殉晒Α?二、乙型肝炎（HBV）,生物學性狀形態(tài)結構DANE顆粒HBV的小球形顆粒HBV的管形顆粒,,,,,電鏡下的HBV,形態(tài)與結構（1）,大球形顆粒亦稱DANE顆粒，它是一種由外殼和一個含有DNA分子的核衣殼組成的病毒顆粒，直徑約42NM。核衣殼為20面體對稱結構。DANE顆粒表面（外衣殼）含有HBSAG、PRES1、PRES2；內(nèi)衣殼含有HBCAGHBEAG；核心含有雙股有缺口的DNA鏈和依賴DNA的DNA多聚酶。目前認為DANE顆粒即完整的HBV。,DANE顆粒,形態(tài)與結構（2）,小形球顆粒直徑約22NM，是HBV感染后血液中最多見的一種。它由HBSAG、PRES1、PRES2組成。未檢出DNA多聚酶活性。目前認為HBV的小顆粒不是HBV，可能是HBV感染肝細胞時合成過剩的外殼蛋白而游離于血循環(huán)中。,HBV的小球形顆粒,形態(tài)與結構（3）,管形顆粒直徑約22NM，長度可在100～700NM之間實際上它是一串聚合起來的小顆粒。同樣具有HBSAG、PRES1、PRES2的抗原性。,HBV的管形顆粒,HBV的抗原組成,表面抗原（HBSAG）核心抗原（HBCAG）E抗原（HBEAG）前S1（PRES1）前S2（PRES2）,表面抗原HBSAG,存在于三型顆粒中是HBV感染的主要標志分亞型（A,D/Y,W/R）ADR、ADW、AYR、AYW四種產(chǎn)生抗HBS，是HBV的中和抗體，具有免疫保護作用。,核心抗原（HBCAG）,僅存在于DANE顆粒的核心和乙型肝炎患者的肝細胞核內(nèi)。不易在血液中檢出。刺激機體產(chǎn)生抗HBC（IGG、IGM）。在乙型肝炎的急性期、恢復期和HBCAG攜帶者中?？蓽y出抗～HBC。此抗體對病毒無中和作用。體內(nèi)如發(fā)現(xiàn)HBCAG或抗～HBC表示HBV在肝內(nèi)持續(xù)復制。HBCAG可被TC細胞識別，觸發(fā)TC細胞的殺傷機制，破壞清除受染的肝細胞。,E抗原HBEAG,僅存在于DANE顆粒中游離存在于血液中為病毒復制及強傳染性的指標提示病人易轉為慢性產(chǎn)生抗－HBE，是預后良好的征象,PRES1抗原、PRES2抗原,前S1（PRES1）抗原及前S2（PRES2）抗原主要存在于三型顆粒的表面?？晌接诟渭毎砻娴南鄳荏w，其免疫原性比表面抗原（HBSAG）更強，刺激機體產(chǎn)生抗PRES1和抗PRES2可阻斷HBV與肝細胞結合。,HB抗原抗體系統(tǒng),HBSAG、抗HBSHBEAG、抗HBEHBCAG、抗HBCPRES1、抗PRES1PRES2、抗PRES2,HBV的其它生物學性狀,培養(yǎng)黑猩猩動物模型、鴨動物模型用分子生物學技術的細胞培養(yǎng)成功抵抗力抵抗力強于HAV對低溫干燥紫外線耐受不被70％乙醇滅活100℃10分鐘可滅活,致病性及免疫性,HBV的致病性,傳染源主要傳染源是患者或無癥狀HBSAG攜帶者傳播途徑血液及體液母嬰傳播密切接觸（主要是性接觸）注射、針刺、文身等（醫(yī)源性）,HBV的致病機制,病毒直接損傷或免疫病理作用免疫低下HBSAG無癥狀攜帶者病毒變異逃逸免疫細胞介導的免疫損傷為主免疫復合物性的免疫損傷肝外損傷自身免疫反應的免疫損傷肝特異性脂蛋白抗原,乙型肝炎的特點,我國約有4060人群曾受到過HBV的感染表現(xiàn)急性乙肝的僅占011亞臨床3075慢性乙肝15乙肝病毒攜帶720急性乙肝如治療不徹底，10患者可轉為慢性乙肝,HBV與原發(fā)性肝癌,流行病學方面動物模型病毒分子結構,免疫性,1抗體的保護作用2細胞免疫的保護作用,微生物學檢查,乙肝五項（兩對半）及HBVDNA的臨床意義,HBSAG、抗HBSHBEAG、抗HBE抗HBC（HBCAG）HBVDNADNA多聚酶,,病毒抗原抗體系統(tǒng)檢測結果分析,四、預防及免疫,控制傳染源，切斷傳播途徑人工自動免疫疫苗（血源性、基因工程人工被動免疫高效價人血清球蛋白（HBIG）,丙型肝炎病毒（HCV）,HCV的生物學性狀,40～60NM球形有包膜單正鏈RNA,HCV的致病性與免疫性,傳播途徑似HBV是引起輸血后慢性肝炎和肝硬化的主要原因潛伏期48周無癥狀HCV攜帶者和慢性丙肝者多見誘發(fā)肝外損傷腎小球腎炎免疫力不牢固,丙型肝炎的特點,我國丙肝病毒攜帶者的比例在25隨著年齡的增長，丙肝病毒攜帶率亦增高易感人群感染HCV后，慢性化的比例高達50以上乙肝患者容易重疊HCV感染,HCV的診斷及預防,檢查病毒RNA檢測抗HCV因HCV免疫原性不強及變異，目前尚無可用疫苗,丁型肝炎病毒（HDV）,HDV是一種缺陷病毒由HBSAG構成其外殼HDV定位于肝細胞核內(nèi)，在血液中由HBSAG包被，形成3537NM顆粒單負鏈環(huán)狀RNA,HDV的結構,RIZZETTO于1977年首先發(fā)現(xiàn)，又稱?抗原3537NM球形顆粒；17KBSSRNA含9個ORF,丁型肝炎的特點,只能感染HBSAG陽性的病人我國丁肝感染率在165，西南地區(qū)感染率高患者可不定期隔離，或隔離至肝功能正常，或HBSAG陰轉。病原學檢查為HDAG、抗HD及HDVRNA。持續(xù)高滴度IGG型抗HD是慢性HDV感染的主要血清學標志。一旦乙肝患者感染了HDV，尤其是在慢性乙肝的基礎上感染，容易發(fā)展成為重度慢性乙肝、重型肝炎，甚至肝硬化。,微生物學檢查及預防,診斷為檢測抗HD、HDVRNA丁型肝炎傳播途經(jīng)與乙型肝炎相似。傳播途徑和防治原則似HBV。,戊型肝炎病毒（HEV）,球形，無包膜直徑32～34NM單正鏈RNA，3個ORF兩個血清型,致病性及免疫,主要為糞－口途徑傳播由膽汁經(jīng)糞便排出體外對肝細胞的直接損傷及免疫病理作用多表現(xiàn)為急性戊型肝炎孕婦感染常致流產(chǎn),

簡介：病毒學VIROLOGY,病毒的基本性狀,3000BC，埃及孟非思壁畫中長老患小兒麻痹癥。,什么是病毒,病毒是一類體積微小、結構簡單、只含有一種類型的核酸、嚴格細胞內(nèi)寄生的、對抗生素不敏感，而對干擾素敏感的非細胞型微生物。,病毒與其它微生物的區(qū)別,第一節(jié)病毒的形態(tài)、結構與化學組成,病毒體VIRION具有一定形態(tài)結構和感染性的完整病毒顆粒。,一、病毒的大小和形態(tài)大小50－250NM左右。形態(tài)球形、桿狀或絲狀、磚形、子彈形、蝌蚪形等。,,,,,,,,,,,,,,,葡萄球菌1000NM）,,,,,,,,,牛痘病毒300250NM,A,B,C,D,E,F,G,立克次體450NM,,,衣原體390NM,A、大腸桿菌噬菌體6595NM,B、腺病毒70NM,C、脊髓灰質炎病毒30NM,D、乙腦病毒40NM,E、蛋白分子10NM,F、流感病毒100NM,G、煙草花葉病毒,二、病毒的結構和化學組成基本結構NUCLEOCAPSID輔助結構VIRALENVELOPE,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,病毒體結構模式圖,,,,殼粒,,,衣殼,,,核心（核樣物）,,,,,核衣殼,,包膜,,包膜病毒,,,,,包膜子粒（刺突）,化學組成－病毒核酸,分子量差別顯著3ＫＢ－400ＫＢ多種形式存在ＲＮＡ或ＤＮＡ；不同形式復制；病毒基因組可相互重疊，轉錄的ＲＮＡ前體可以多種方式拼接；與真核細胞基因結構相似，有內(nèi)含子及非編碼區(qū)；具有感染性。,化學組成－病毒蛋白質結構蛋白CAPSID,ENVELOPEPROTEIN非結構蛋白酶與病毒復制有關的酶；與致病有關的酶；調控蛋白HIVTAT,REVETC,病毒衣殼病毒20面體立體對稱模式圖,不同病毒核酸結構不同，殼粒數(shù)目和排列也不相同。根據(jù)殼粒的排列方式稱為對稱，病毒結構由以下幾種對稱型,ICOSAHEDRALSYMMETRY（二十面體立體對稱型）,,病毒衣殼螺旋對稱模式圖,病毒衣殼復合對稱模式圖,,衣殼的主要功能保護病毒核酸參與感染過程具有抗原性,病毒衣殼電鏡照片,病毒包膜電鏡照片,包膜的主要功能維護病毒體結構的完整性與病毒入侵有關具有抗原性,第二節(jié)病毒的增殖,一、VIRUSREPLICATIONCIRCLE吸附ADSORPTION穿入PENETRATION脫殼UNCOATING生物合成BIOSYNTHESIS裝配與釋放ASSEMBLYANDRELEASE,1吸附ADSORPTION（幾分至幾十分鐘）,23PENETRATION、UNCOATING,融合有包膜病毒胞飲無包膜病毒直接穿入,,在溶酶體酶作用下，脫殼。,4生物大分子合成BIOSYNTHESIS（隱蔽期）,6大類型雙鏈DNA病毒單鏈DNA病毒單正鏈RNA病毒單負鏈RNA病毒雙鏈RNA病毒逆轉錄病毒區(qū)域DNA病毒核內(nèi)（除痘病毒）RNA病毒胞質（除流感病毒及逆轉錄病毒）,生物合成（以DSDNA為例）,親代DNAMRNA早期蛋白（酶）（功能蛋白）子代DNA子代MRNA晚期蛋白（結構蛋白）子代病毒,,,,,,,,RNA病毒的生物合成,單正鏈RNAMRNA結構和非結構蛋白中間復制體子代核酸單負鏈RNA正鏈RNA蛋白質中間復制體子代核酸（依賴RNA的RNA多聚酶）,,,,,,,,逆轉錄病毒,病毒RNA逆轉錄酶RNADNA中間體雙鏈DNA整合入細胞染色體子代病毒MRNA和子代核酸,,,,,57ASSEMBLY，MATURATION,ANDRELEASE,裝配（ASSEMBLY）,釋放（RELEASE）,裂解（DISINTEGRATION）NAKEDVIRUSCAUSETHEHOSTCELLLYSIS出芽（BUDDING）ENVELOPEDVIRUSES,二、病毒的生長曲線,1、隱蔽期2、對數(shù)生長期3、細胞死亡期,缺陷病毒因病毒基因組不完整或基因發(fā)生改變，而不能進行正常增殖所產(chǎn)生的子代病毒。缺陷干擾顆粒DEFECTIVEINTERFERINGPARTICLE,DIP缺陷病毒，具有干擾同種成熟病毒體進入細胞的作用。輔助病毒可以輔助缺陷病毒完成正常增殖的病毒。,三、與病毒增殖有關的異常現(xiàn)象,,頓挫感染病毒進入宿主細胞后，如細胞不能為病毒增殖提供所需要的酶、能量及必要的成分，則病毒在細胞中不能合成本身的成分，稱為頓挫感染。非容納細胞、容納細胞。干擾現(xiàn)象兩種病毒感染同一種細胞，常發(fā)生一種病毒抑制另一種病毒復制的現(xiàn)象，稱干擾現(xiàn)象。機制IFN、受體、DIP。,第三節(jié)理化因素對病毒的影響,一、物理因素的影響溫度大多數(shù)病毒耐冷不耐熱。在－70℃（數(shù)月）或－196℃（數(shù)年）條件下，病毒感染性可保持數(shù)月至數(shù)年。一般加熱60℃經(jīng)30MIN或100℃數(shù)秒鐘可使大多數(shù)病毒滅活。PH值多數(shù)病毒在PH6～8范圍內(nèi)穩(wěn)定。射線和UV射線使核苷酸鏈發(fā)生致死性斷裂；UV則是在病毒的多核苷酸上形成雙聚體如胸腺核苷與尿核苷，抑制病毒DNA或RNA的復制。,二、化學因素的影響脂溶劑乙醚、氯仿、去氧膽酸鹽等脂溶劑可使有包膜病毒的包膜脂質溶解而滅活病毒，失去吸附能力。消毒劑過氧乙酸、甲醛等均能使大多數(shù)病毒滅活。與細菌相比，病毒對消毒劑抵抗力強，特別是無包膜的小型病毒。中草藥板藍根、大青葉、大黃、貫仲和七葉一枝花等對某些病毒有一定的抑制作用。,第四節(jié)病毒分類動物病毒,DNA病毒,RNA病毒,亞病毒一類比病毒還小的、結構更簡單的微生物。包括類病毒和PRION。,病毒的感染與致病機制,,第一節(jié)病毒的傳播方式和感染類型,,一、病毒感染,來源感染途徑傳播方式水平傳播垂直傳播,二、病毒感染的類型,機體感染病毒后1按有無臨床癥狀，可分為隱性感染和顯性感染。2依病毒感染后在機體內(nèi)滯留的時間長短，分為急性感染和持續(xù)性感染。3持續(xù)性感染根據(jù)發(fā)展和預后又分為慢性感染、潛伏感染、慢發(fā)病毒感染和急性感染的遲發(fā)并發(fā)癥。,（一）隱性病毒感染與顯性病毒感染,1隱性病毒感染病毒進入機體后不引起臨床癥狀的感染，對組織和細胞的損傷不明顯。相關因素病毒毒力弱、機體防御能力強、病毒種類、病毒的性質。病毒仍可在體內(nèi)增殖并向外界播散病毒，可成為重要的傳染源。隱性感染者雖不出現(xiàn)臨床癥狀，但仍可獲得免疫力而終止感染。病毒攜帶者有部分隱性感染者一直不產(chǎn)生對此種病毒的免疫力叫病毒攜帶者，無癥狀，但病毒可在體內(nèi)增殖并向外界排泄播散，也是重要的傳染源。,有的病毒如天花病毒、麻疹病毒等進入機體，到達靶細胞后大量增殖，使細胞和組織損傷，機體出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，這樣的感染稱為顯性病毒感染或臨床感染；按癥狀出現(xiàn)早晚、持續(xù)時間的長短以及病毒在體內(nèi)持續(xù)存在狀態(tài)等顯性感染又分為急性病毒感染和持續(xù)性病毒感染兩種。,2顯性病毒感染,（二）急性病原消滅型病毒感染,病毒侵入機體后，在細胞內(nèi)增殖，經(jīng)數(shù)日以至數(shù)周的潛伏期后突然發(fā)病。在潛伏期內(nèi)1、病毒增殖到一定水平，由靶細胞的損傷和死亡而導致組織器官的損傷和功能障礙，出現(xiàn)臨床癥狀。2、宿主動員非特異性和特異性免疫因素清除病毒。宿主一般能在癥狀出現(xiàn)一段時間內(nèi)，把病毒清除掉而進入恢復期。特點為潛伏期短，發(fā)病急，病程數(shù)日至數(shù)周。病后常獲得特異性免疫。因此，特異性抗體可作為受過感染的證據(jù)。,（三）持續(xù)性病毒感染,病毒可在機體內(nèi)持續(xù)存在數(shù)月數(shù)年數(shù)十年?？沙霈F(xiàn)癥狀，可不出現(xiàn)癥狀而長期帶病毒，成為重要的傳染源。持續(xù)性病毒感染有病毒和機體兩方面的因素機體免疫功能低下，無力完全清除病毒；病毒抗原性弱，機體難以產(chǎn)生免疫應答以清除；病毒存在于受保護的部位或病毒發(fā)生突變,可以逃避宿主免疫作用；某些病毒的抗原性弱，難以產(chǎn)生免疫應答；病毒基因整合在宿主細胞的基因組中，長期與宿主細胞共存。,持續(xù)性感染有下述四種類型,1．潛伏性病毒感染LATENTVIRALINFECTION2．慢性病毒感染（CHRONICVIRALINFECTION）3．慢發(fā)病毒感染SLOWVIRUSINFECTION或稱遲發(fā)病毒感染DELAYEDVIRALINFECTION4．急性病毒感染的遲發(fā)并發(fā)癥（DELAYEDCOMPLICATIONAFTERACUTEVIRALINFECTION）,1潛伏性病毒感染,經(jīng)急性或隱性感染后，病毒基因組存在于一定組織或細胞內(nèi)，但并不能產(chǎn)生有感染性的病毒體。在某些條件下病毒被激活而急性發(fā)作，病毒僅在臨床出現(xiàn)間歇性急性發(fā)作時才被檢出。在非發(fā)作期，用一般常規(guī)法不能分離出病毒。例如，單純皰疹病毒Ⅰ型（HSV1）感染水痘帶狀皰疹病毒（VZV）感染,2慢性病毒感染,經(jīng)顯性或隱性感染后，病毒并未完全清除，可持續(xù)存在于血液或組織中并不斷排出體外，病程長達數(shù)月至數(shù)十年?；颊呖杀憩F(xiàn)輕微或無臨床癥狀。如乙型肝炎病毒（HBV）、巨細胞病毒（CMV）及EB病毒（EBV）等常形成慢性感染。,3慢發(fā)病毒感染,病毒感染后潛伏期很長可達數(shù)月、數(shù)年甚至數(shù)十年之久。此時機體無癥狀，也分離不出病毒。一旦發(fā)病出現(xiàn)慢性進行性疾病，最終常為致死性感染。如AIDS、羊瘙癢病（SCRAPIE）、人克雅病（CJD）、庫魯病（KURU）等。庫魯病是朊病毒感染機體后，經(jīng)過長達數(shù)十年的潛伏期后，引起的一種進行性小腦退行性疾病。,4急性病毒感染的遲發(fā)并發(fā)癥,急性感染后1年或數(shù)年，發(fā)生致死性的病毒病。如亞急性硬化性全腦炎（SSPE）。該病是在兒童期感染麻疹病毒后，有些到青春期才表現(xiàn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，用電鏡在腦組織中可查到類似麻疹病毒樣顆粒。有人認為這是麻疹病毒的缺陷病毒。,第二節(jié)病毒的致病機制,病毒能否感染機體引起疾病取決于病毒的致病性病毒在宿主細胞內(nèi)增殖，導致宿主細胞結構和功能改變，并擴延到多數(shù)細胞，便可形成組織器官的損傷及功能障礙。宿主免疫力在病毒和機體細胞相互作用過程中，機體的免疫應答有時也可對機體造成某些免疫病理性損傷，介導疾病的發(fā)生與發(fā)展。,一、病毒感染引起宿主細胞的變化,病毒對細胞的致病作用包括來自病毒的直接損傷和機體免疫病理應答兩個方面。敏感的宿主細胞被病毒感染后，兩者相互作用下可表現(xiàn)為溶細胞作用穩(wěn)定狀態(tài)感染細胞凋亡包涵體的形成細胞增生和轉化病毒基因的整合,（一）溶細胞作用,病毒在宿主易感細胞內(nèi)增殖成熟后，短時間釋放大量子代病毒造成細胞破壞與死亡，這種作用稱殺細胞效應，或稱為溶細胞作用。主要見于無包膜，殺傷性強的病毒。病毒在細胞內(nèi)增殖引起細胞變性、死亡裂解的作用稱病毒的細胞病變效應（CYTOPATHICEFFECT,CPE）。,,病毒培養(yǎng)時出現(xiàn)的CPE,二穩(wěn)定狀態(tài)感染,一些不具有殺細胞效應的病毒（多為有包膜病毒）所引起的感染稱穩(wěn)定狀態(tài)感染STEADYSTATEINFECTION。病毒在感染宿主細胞的過程中，對細胞代謝、溶酶體膜影響不很大。成熟的病毒多以出芽方式釋放出來，其過程緩慢、病變輕微，細胞暫時還不會出現(xiàn)裂解和死亡，但可發(fā)生宿主細胞膜受體被破壞、細胞膜成分發(fā)生變化，出現(xiàn)細胞融合及細胞表面產(chǎn)生新的抗原等。,1細胞融合感染與未感染的細胞融合，可以使病毒從感染的細胞直接進入相鄰的正常細胞，有利于病毒在細胞間的擴散。2細胞膜出現(xiàn)新抗原病毒在細胞內(nèi)增殖過程中，將病毒基因編碼的蛋白質插入細胞膜表面，導致細胞膜表面抗原的改變。有利于進行病毒感染的診斷。,（三）細胞凋亡,細胞凋亡（CELLAPOPTOSIS）是由細胞基因自身指令發(fā)生的一種生物學過程。實驗研究證實有些病毒（腺病毒、人免疫缺陷病毒等）增殖可直接誘導細胞凋亡，也可通過病毒基因組編碼的蛋白質間接作用下誘發(fā)細胞凋亡。,（四）包涵體的形成,某些受病毒感染的細胞內(nèi)，用普通光學顯微鏡可看到有與正常細胞結構和著色不同的圓形或橢圓形斑塊，稱為包涵體（INCLUSIONBODYORIBCLUSION）。因病毒種類不同，包涵體有位于胞漿內(nèi)的痘病毒，也有在細胞核內(nèi)的皰疹病毒；或者兩者都有麻疹病毒；有嗜酸性的或嗜堿性的。包涵體的本質①有些病毒的包涵體就是病毒顆粒的聚集體；②有些是病毒增殖留下的痕跡；③病毒感染引起的細胞反應物。可作為診斷依據(jù)和鑒定病毒的參考。如從可疑為狂犬病的腦組織切片或涂片中發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)有嗜酸性包涵體，即內(nèi)基小體NEGRIBODY，可診斷為狂犬病。,（五）細胞轉化增生和病毒基因組的整合,某些DNA病毒的全部或部分核酸，或RNA病毒基因組經(jīng)逆轉錄后產(chǎn)生的DNA，結合至細胞染色體中，稱為整合。整合作用可使細胞遺傳性狀發(fā)生改變，即轉化（TRANSFORMATION）。轉化的細胞生長、分裂失控，細胞可發(fā)生惡性變。,病毒的致腫瘤作用,DNA病毒（1）乙型肝炎病毒（HBV）與原發(fā)性肝癌有關；（2）EB病毒（EBV）與鼻咽癌、非洲兒童惡性淋巴瘤有關；（3）人乳頭瘤病毒（HPV）與子宮頸癌有關。RNA病毒只有逆轉錄病毒科與癌癥有關。人類T細胞白血病病毒HTLVI型。,二、病毒感染引起的機體變化,一組織器官的損傷及組織器官的親嗜性病毒對細胞的殺傷作用，在大多數(shù)情況下，必然導致組織和器官的損傷和功能障礙。病毒對人體組織的致病作用是有選擇性的。例如，流感病毒和鼻病毒對呼吸道粘膜有親嗜性；天花病毒和皰疹病毒對皮膚粘膜細胞有親嗜性；而腦炎病毒和脊髓灰質炎病毒則對神經(jīng)組織具有親嗜性。,（二免疫病理損傷,1．體液免疫病理作用許多病毒如狂犬病病毒、HSV、流感病毒等有包膜病毒侵入細胞后，能誘發(fā)細胞表面出現(xiàn)新抗原。這種抗原與特異性抗體結合后，在補體參與下引起細胞的破壞。2．細胞免疫病理作用細胞免疫在某些病毒感染的恢復上起著重要作用。但特異性細胞毒性T細胞CTL可以同時損傷受病毒感染而出現(xiàn)膜新抗原的靶細胞。病毒蛋白亦可因與宿主細胞的某些蛋白間存在共同抗原性而導致自身免疫應答。由于某些病毒可引起免疫病理性損傷，因此，一般在臨床上不宜應用免疫功能增強劑治療這類疾病。綜上，病毒感染早期所致細胞損傷主要是病毒引起，感染后期由免疫復合物、補體活化、ADCC作用、CD4T細胞介導的復雜反應引起機體局部組織器官的嚴重損傷和炎癥。,三病毒感染對免疫系統(tǒng)的影響,1．病毒感染引起的免疫抑制許多病毒感染可引起暫時性免疫抑制。如麻疹病毒、風疹病毒、CMV等感染，急性期和恢復期患者外周血淋巴細胞對特異性抗原和促有絲分裂原PHA、CONA）的反應減弱。同時，對結核菌素皮膚試驗也出現(xiàn)轉陰的情況。2．病毒感染對免疫活性細胞的殺傷已發(fā)現(xiàn)引起AIDS的人類免疫缺陷病毒HIV）對輔助性T細胞CD4＋具有強親和性和殺傷性。因而在感染者出現(xiàn)CD4＋細胞減少，CD8細胞數(shù)相對增多，兩種細胞比值倒置的現(xiàn)象。3．病毒感染引起自身免疫性疾病隱蔽在細胞內(nèi)的一些抗原暴露或釋放出來；病毒抗原也可能與機體細胞結合，改變細胞表面結構成為“非已物質”，這些細胞可成為靶細胞而受到免疫細胞和免疫因子的作用，從而發(fā)生自身免疫性疾病。,第三節(jié)抗病毒免疫ANTIVIRALIMMUNITY,干擾素,定義,由病毒或其他干擾素誘生劑刺激人或動物細胞所產(chǎn)生的一類分泌性蛋白具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調節(jié)等多種生物學活性。,,種類,種類產(chǎn)生細胞抗病毒免疫調節(jié)抗腫瘤?人白細胞強弱弱?人成纖維細胞強弱弱?T細胞弱強強,抗病毒意義,抗病毒特點,種的特異性、間接性、廣譜性,早期中斷病毒復制，阻止病毒擴散,LYSISOFVIRUSINFECTEDCELLSBYCYTOTOXICEFFECTORCELLS,體液免疫,病毒中和抗體針對病毒某些表面抗原血凝抑制抗體血凝素補體結合抗體病毒內(nèi)部抗原或表面非中和抗原,HUMORALIMMUNITY,MECHANISMSOFVIRUSNEUTRALIZATIONBYANTIBODYATTHECELLULARLEVEL,EXTRACELLULARNEUTRALIZATIONOFVIRUSBYANTIBODY,ANTIBODYDEPENDENTCELLULARCYTOTOXICITYORADCC,細胞免疫,細胞毒性T淋巴細胞直接殺傷靶細胞（細胞裂解、細胞凋亡）分泌多種細胞因子（IFN－GAMMA、TNF）等發(fā)揮抗病毒作用。TH1細胞,LYSISOFVIRUSINFECTEDCELLSBYCYTOTOXICEFFECTORCELLS,CELLMEDIATEDEVENTSINVIRALINFECTIONS,抗病毒免疫持續(xù)時間,牢固持久免疫力有病毒血癥的全身性病毒感染水痘、天花單一血清型的病毒感染乙型腦炎病毒短暫免疫力局部或粘膜表面感染流感病毒、鼻病毒多血清型病毒感染鼻病毒易發(fā)生抗原變異的病毒感染流感病毒,病毒感染的診斷與防治,常用的病毒學診斷方法包括病毒的分離鑒定病毒的血清學檢查病毒蛋白和核酸的檢測,一、病毒感染的診斷,（一）標本的采取與送檢,應注意下列原則1對本身帶有雜菌如咽拭子、糞便或易受污染的標本，要進行病毒分離培養(yǎng)時，應使用抗生素。2因病毒在室溫中易失去活性，標本應低溫保存并盡快送檢。3血清學診斷標本的采取應在發(fā)病初期和病后2～3W內(nèi)各取1份血清，以便對比雙份血清抗體效價的動態(tài)變化。,（二）病毒的分離與鑒定,病毒的分離1動物接種是最原始的病毒培養(yǎng)方法，根據(jù)病毒種類不同，選擇敏感動物及適宜接種部位，如嗜神經(jīng)性病毒（狂犬病毒）可接種于小鼠腦內(nèi)，痘病毒可接種于家兔角膜或皮內(nèi)。,,2雞胚培養(yǎng)雞胚對多種病毒敏感。一般采用孵化9～14天的雞胚，根據(jù)病毒種類不同，將病毒標本接種于雞胚的不同部位，最常用的雞胚接種部位有羊膜腔、尿囊腔、絨毛尿囊膜和卵黃囊等。,3組織培養(yǎng)法TISSUECULTURE或細胞培養(yǎng)CELLCULTURE法是將離體活組織塊或分散的組織細胞加以培養(yǎng)的技術總稱，為病毒分離鑒定中的最常用的基本方法。,細胞的變化有些病毒在細胞內(nèi)增殖時可引起特有的細胞病變，稱為細胞病變效應CYTOPATHICEFFECT，CPE。常見的變化有細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等。有些病毒如麻疹病毒、CMV、RSV等作用于細胞膜，可使鄰近的細胞相互融合，形成多核巨細胞或稱融合細胞。有些病毒如狂犬病病毒、麻疹病毒等可在培養(yǎng)細胞中形成胞漿或核內(nèi)的包涵體。,病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的指標,,病毒培養(yǎng)時出現(xiàn)的CPE,,2紅細胞吸附HEMADSORPTION,HAD流感或副流感病毒等感染細胞后，由于細胞膜上出現(xiàn)了血凝素HAEMAGGLUTININ,HA，具有吸附脊椎動物豚鼠、雞、猴等紅細胞的能力，這一現(xiàn)象稱紅細胞吸附，常用來測定具有HA的粘病毒與副粘病毒的增殖。若有相應的抗血清，則能中和細胞膜上的HA，HAD不再發(fā)生，稱紅細胞吸附抑制試驗。,3干擾現(xiàn)象INTERFERENCE某些病毒感染細胞時不出現(xiàn)CPE或其他易于測出的變化如HAD，但能干擾在其后感染的另一病毒的增殖。如風疹病毒感染VERO細胞時CPE不明顯，但它能干擾后感染的埃可病毒ECHOV的增殖，從而阻抑后者所特有的CPE。,4細胞代謝的改變病毒感染細胞的結果可使培養(yǎng)液的PH值改變，說明細胞的代謝在病毒感染后發(fā)生了變化。這種培養(yǎng)環(huán)境的生化改變也可作為判斷病毒增殖的指標。,病毒的數(shù)量與感染性測定,空斑形成單位（PLAQUEFORMINGUNIT，PFU）限于用在有產(chǎn)生空斑能力的病毒。測定單層細胞培養(yǎng)中病毒裂解空斑的形成。50組織細胞感染量（50TISSUECULTUREINFECTIOUSDOSE，TCID50）引起50雞胚、動物死亡或50的培養(yǎng)細胞發(fā)生CPE的最小病毒量。,（三）病毒感染的血清學診斷,原理是用已知病毒抗原來檢測病人血清中有無相應抗體，故須待病人感染后體內(nèi)產(chǎn)生抗體時才能檢出。另外，在采取臨床標本及病人血清應注意病程，必須采取患者急性期血清與恢復期血清雙份血清進行血清學試驗。若第2次血清抗體滴度比第1次高出4倍以上時，才有診斷意義。,（四）病毒感染的快速診斷,快速診斷主要是指從含有病毒標本及感染機體的血清中檢測病毒顆粒、蛋白抗原、IGM抗體和核酸等，往往在數(shù)小時內(nèi)即可得出結果。,形態(tài)學檢查,1電鏡和免疫電鏡檢查2普通光學顯微鏡檢查有些病毒在宿主細胞內(nèi)增殖后，在細胞的一定部位胞核、胞漿或兩者兼有出現(xiàn)一個或數(shù)個、圓形或橢圓形、嗜酸性或嗜堿性的結構，即包涵體。包涵體對病毒感染的診斷有一定價值。,病毒蛋白抗原檢查,用熒光素、放射性同位素、過氧化物酶等標記抗體，采用免疫學和分子生物學技術，檢測標本中的病毒蛋白抗原，具有敏感、特異、快速等優(yōu)點。1免疫熒光技術IMMUNOFLUORESCENCE,IF2固相放射免疫測定SOLIDPHASERADIOIMMUNOASSAY,SPRIA3酶免疫技術ENZYMEIMMUNOASSAY,EIA此法可檢測多種病毒及其抗體，主要是酶免疫組化法和酶聯(lián)免疫吸附試驗法ELISA。,特異性IGM抗體的檢測,檢測病毒特異性IGM抗體可診斷急性感染，特別是對證實孕婦感染風疹病毒尤為重要，但應注意類風濕因子IGM的干擾。另外，檢測早期抗原的抗體是快速診斷的另一途徑。如檢測針對EBV的早期抗原EA、核心抗原EANA和衣殼抗原VCA等的抗體，可以區(qū)別急性或慢性EBV感染。此外，分子生物學檢測技術、氣相色譜技術等，均可用來分析和鑒定病毒感染。,檢測病毒核酸,1核酸雜交技術用于病毒檢測的有斑點雜交、細胞內(nèi)原位雜交、DNA印跡雜交、RNA印跡雜交等。2核酸擴增法目前多數(shù)病毒基因已通過分子克隆技術被明確了核苷酸序列，使得DNA擴增技術逐步發(fā)展為常規(guī)診斷技術之一。3基因芯片技術,,,病毒的快速診斷,光鏡包涵體,電鏡,免疫熒光,ELISA,分子生物學技術,雜交,SOUTHERNBLOT,PCR,NORTHERNBLOT,,,,,,,,,,,,,,,二、病毒感染的防治,免疫預防,人工主動免疫,滅活疫苗,乙腦疫苗,狂犬疫苗,流感滅活疫苗,HAV等,減毒活疫苗,脊髓灰質炎疫苗,麻疹疫苗,腮腺炎疫苗,風疹疫苗,HAV疫苗,其他疫苗基因工程疫苗，核酸疫苗，亞單位疫苗等,,,,,藥物防治,金剛烷胺抑制病毒脫殼預防感冒,核苷類藥物,病毒蛋白酶的抑制物INDINAVIR其他干擾素及干擾素誘生劑，中草藥抗病毒基因治療ASODN，ASON，核酶,皰疹凈，阿昔洛韋，AZT,,抗病毒藥物,特異性抗體治療性疫苗,免疫制劑,,,

簡介：病毒學各論,微生物及免疫學,雙股DNA病毒,單股DNA病毒,具有反轉錄過程的病毒,單負股病毒目,分節(jié)段的負股RNA病毒,套式病毒,其他正股病毒,朊病毒,雙股RNA病毒,病毒顆粒無囊膜，直徑27NM，20面體對稱外表光滑呈球形，由60多個亞單位組成，每個亞單位含有4種衣殼蛋白?；蚪M為單分子線狀正股RNA。,一、微RNA病毒科（PICORNAVIRIDAE）,,口蹄疫是全球性最重要的動物疫病，常在牛群、豬群大范圍流行。多種偶蹄動物都易感。感染率很高，致死率較低。人類偶能感染，表現(xiàn)發(fā)熱、食欲差及口、手、腳產(chǎn)生水泡。,口蹄疫病毒FMDV,診斷申報被列為必須申報的疾病，診斷只能在指定的實驗室進行。檢測方法OIE推薦使用商品化及標準化的ELISA試劑盒用于診斷，數(shù)小時出結果。也用細胞培養(yǎng)分離病毒，分離的病毒通過ELISA或者中和試驗加以鑒定。,疫苗弱毒疫苗可能散毒，不安全。推薦使用濃縮的滅活疫苗。,檢測豬血清中抗豬口蹄疫病毒非結構蛋白3ABC的抗體,腸道病毒EV71,手足口病HFMD是由腸道病毒引起的傳染病，多發(fā)生于5歲以下的嬰幼兒，可引起發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹、潰瘍，個別患者可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發(fā)癥。引發(fā)手足口病的腸道病毒有20多種，其中柯薩奇病毒A16型COXA16和腸道病毒71型（EV71）最常見。,二分節(jié)段的負股RNA病毒,,分節(jié)段的RNA病毒有3個科即正粘病毒科、布尼病毒科和砂粒病毒科。正粘病毒科中禽流感病毒在動物病毒中較為重要，核酸分8個節(jié)段，基因易發(fā)生基因重配，使病毒變異率較高，給預防帶來困難。流行的禽流感病毒毒株差異很大。布尼病毒中裂谷熱病毒是其中較為重要的病毒。,第一節(jié)正黏病毒科（ORTHOMYXOVIRIDAE）病毒顆粒多形性，多球形；有囊膜及纖突，甲、乙型病毒纖突上有兩種糖蛋白（棒狀的凝血素蛋白H、蘑菇狀的神經(jīng)氨酸酶蛋白N）；基因組為8節(jié)段線狀負股單股RNA；細胞核內(nèi)復制，胞漿膜出芽成熟釋放；對脂溶劑敏感，在外環(huán)境中極不穩(wěn)定。,禽流感病毒AIV1與人及哺乳動物流感有關雖然早在1901年即分離禽流感病毒，但直到1955年才明確它與人及哺乳動物流感的關系。禽流感病毒某些毒株，可不經(jīng)過豬體混合重配而直接感染人。2基因庫水禽是流感病毒的“基因庫”，并對養(yǎng)禽業(yè)構成潛在威脅。,禽流感電鏡照片,3病毒毒力禽流感的高致病力毒株HPALV對雞有較強致病性，舊稱真性雞瘟。高致病性禽流感HPAL是OIE規(guī)定的A類疫病。病毒毒力有很大差異。高致病力毒株主要有H7N7、H5N2、H5N1亞型的某些毒株。,診斷分離病毒非常必要，對鑒定病原及其毒力均不可少。病料一般從泄殖腔內(nèi)采樣，也可采肝、脾、血液、肺等。分離接種810日齡雞胚尿囊腔。鑒定取尿囊液用雞紅細胞作HAHI或ELISA等。進一步鑒定亞型需送國家級指定實驗室完成。毒力分析可將分離株接種雞，或用分離毒作空斑試驗，檢測其毒力，有毒株能產(chǎn)生空斑，無毒株則否。,高致病OIE規(guī)定的標準為將含病毒的雞胚尿囊液原液用滅菌生理鹽水作110稀釋靜脈內(nèi)接種48周齡SPF雞8只，每只02ML，隔離飼養(yǎng)觀察10D，死亡≥6只者，判為高致病性禽流感病毒。預防與控制預防措施應包括在國際、國內(nèi)及局部養(yǎng)禽場3個不同水平。高致病力禽流感被OIE列為A類疫病，一旦發(fā)生應立即通報。國內(nèi)措施主要為防止病毒傳人及蔓延。養(yǎng)禽場還應側重防止由野禽傳給家禽，要有隔離設施阻擋野禽。一旦發(fā)生高致病力禽流感，應采取斷然措施防止擴散。滅活疫苗可作預防用。,三彈狀病毒科（RHABDOVIRIDAE）,,病毒顆粒子彈狀，直徑20NM長170NM。圓柱形核衣殼螺旋形對稱，有囊膜及膜粒?；蚪M為單分子負股單股RNA。,彈狀病毒結構模式圖,彈狀病毒電鏡照片,狂犬病毒1感染動物病毒感染所有溫血動物，引致人與動物狂犬病，感染的動物和人一旦發(fā)病，兒乎都難免死亡。2癥狀狂犬病表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，有興奮型及麻痹型兩種。,透射電鏡下的狂犬病毒,3致病機理傳播主要傳播途徑為被帶毒動物咬傷，病犬唾液具有高度傳染性。病毒復制病毒特異結合神經(jīng)肌肉結合處的乙酰膽堿受體及神經(jīng)節(jié)苷脂等受體。在傷口附近的肌細胞內(nèi)復制，而后侵入外周神經(jīng)系統(tǒng)，沿神經(jīng)軸索上行至中樞神經(jīng)系統(tǒng)，在腦的邊緣系統(tǒng)大量復制，導致腦組織損傷，行為失控出現(xiàn)癥狀。病毒從腦沿傳出神經(jīng)擴散至唾液腺等器官，在其內(nèi)復制，并以很高的滴度分泌到唾液中。,4診斷具有確認資格的人員才能作出狂犬病的實驗室診斷。往往要確定咬人的動物是否患狂犬病，需作腦組織切片，檢測包涵體。取其腦組織如小腦或海馬或唾液腺檢測，方法為熒光抗體染色。RTPCR技術檢測組織中的病毒RNA，敏感度高。5預防與控制應及時撲滅狂犬病患畜。對家養(yǎng)犬、貓進行弱毒疫苗免疫接種。,（1）形狀20面體（2）核衣殼類型20面體（3）抵抗力熱、光及脂溶劑敏感；耐干燥、不耐酸；（4）基因組線狀雙股DNA，125KB235KB。（5）有囊膜，糖蛋白纖突,四皰疹病毒科HERPESRIVIDAE,,一、主要特征,皰疹病毒構造模擬圖,細胞介導的單純皰疹病毒內(nèi)吞作用,二、病毒的復制與感染,1、偽狂犬病病毒豬為病毒原始宿主，成年豬多為隱性感染，懷孕母豬50％可發(fā)生流產(chǎn)、死胎或木乃伊胎。基因工程疫苗用于預防。,三、主要的皰疹病毒,2、馬立克病病毒MDV是雞的重要的傳染病病原，具有致腫瘤特性。可為神經(jīng)淋巴瘤病，出現(xiàn)麻痹等癥狀。疫苗預防。3、禽傳染性喉氣管炎病毒各年齡段雞均易感，以418周齡雞易感性高，表現(xiàn)為咳嗽、咳血。,三、主要的皰疹病毒,4、鴨瘟病毒鴨等多種水禽均易感，有弱毒疫苗。,三、主要的皰疹病毒,主要特征有囊膜，E2纖突重要，20面體對稱，基因組線性單股正鏈RNA，黃病毒屬以VERO細胞培養(yǎng)。瘟病毒屬以原動物細胞培養(yǎng)，多無CPE，抵抗力差。,五黃病毒科,重要的動物病毒（1）日本乙型腦炎病毒人畜共患，多種動物感染，使幼駒表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，孕豬繁殖障礙，以三喙庫蚊傳播，弱毒和滅活苗預防（2）牛病毒性腹瀉病毒分CPE和非CPE兩型，可致犢牛、羊、鹿腹瀉。豬也可感染，牛黏膜病，引起綿羊抑制，經(jīng)胎盤傳播。,（3）豬瘟病毒主要特征感染豬有典型和非典型豬瘟，使孕豬繁殖障礙。預防控制Ⅰ垃圾飼料注意消毒Ⅱ撲殺有效，疫苗接種,六痘病毒科（POXVIRIDAE）,英國醫(yī)生JENNER1798開創(chuàng)用牛痘病毒預防人天花，是病毒免疫的里程碑。目前痘苗病毒被作為基因工程疫苗載體廣泛應用，雞痘、綿羊痘及羊口瘡為害較嚴重。,一、主要特征（1）形狀磚狀,,（2）核衣殼類型復合對稱。（3）抵抗力熱差、冷強、耐干燥、不耐酸；（4）基因組線狀雙股DNA，130KB375KB（5）復制與釋放胞漿內(nèi)復制，胞吐釋放。,二、傳播方式傳播途徑皮膚傷口感染、呼吸道、昆蟲叮咬感染。痘病毒感染宿主譜較窄。三、培養(yǎng)特點痘病毒可在雞胚絨毛尿囊膜上生長，多數(shù)可在膜上形成痘斑。痘斑的形態(tài)等因痘病毒的種類而異。可根據(jù)痘斑特征，對病毒作出初步鑒定。,四、主要的痘病毒1痘苗病毒痘苗病毒一直作為痘病毒的模型，同時廣泛用作疫苗預防天花。該病毒分布廣泛，而且宿主譜寬，在自然條件下能引致牛乳頭感染。,2綿羊痘病毒只感染綿羊，可致全身性皰疹，傷口、呼吸道感染。疫苗預防。,3雞痘病毒禽痘病毒屬的代表種為雞痘病毒。所有禽痘病毒均以吸血昆蟲為機械傳播媒介有皮膚型及黏膜型兩種形式，黏膜型雞痘又稱雞白喉，死亡率較高。,七套式病毒目,,1冠狀病毒科,病毒顆粒為球形，直徑80220NM，核衣殼螺旋對稱有囊膜及長達20NM的棒狀纖突?；蚪M為單分子線狀正股單股RNA。,豬傳染性胃腸炎病毒TGEV,已報道4種冠狀病毒能感染豬豬血凝性腦脊髓炎病毒豬流行性腹瀉病毒豬傳染性胃腸炎病毒豬呼吸道冠狀病毒PRCV。,致病TGEV在世界各地均有發(fā)現(xiàn)，引致仔豬腹瀉，伴有嘔吐，3周齡以下的仔者有較高死亡率。但有時成年豬也有高死亡率，母豬表現(xiàn)為厭食、發(fā)熱、腹瀉及無乳等。防制仔豬可通過初乳及奶液獲得母源IGA抗體，產(chǎn)生被動免疫。,二、動脈炎病毒科主要特征20面體對稱，有囊膜，核酸為單股正鏈RNA復制和釋放方式與冠狀病毒相似。,套式病毒目,,,,,,豬呼吸與繁殖綜合征病毒分為歐洲株和美洲株、我國美洲株。母豬感染流產(chǎn)，仔豬感染呼吸困難。病毒可能來源于小鼠乳酸脫氫酶病毒。病毒感染單核細胞和巨噬細胞產(chǎn)生免疫抑制。冬季流行。分離病毒可用肺巨噬細胞或MA104/MAC145細胞?；蛉笔绾蜏缁蠲珙A防。,,（1）病毒無囊膜，球狀，直徑1722NM；（2）基因組為單分子單股DNA，環(huán)狀，在細胞核復制；（3）60℃30MIN，PH39。,十圓環(huán)病毒科CIRCOVIRIDAE,,一、主要特征,二、主要成員包括豬、禽及植物的圓環(huán)病毒，是目前已知最小的動植物病毒,雞貧血病毒CAV1979年在日本發(fā)現(xiàn)，曾稱雞傳染性貧血因子CAA，現(xiàn)已是養(yǎng)禽業(yè)的世界性問題。除雞以外不感染其他禽，只有一個血清型。雛雞表現(xiàn)為急性免疫抑制性疾病。由于紅細胞生成減少造成貧血，血液可成水樣，凝結緩慢。常發(fā)生繼發(fā)性細菌感染。本病毒通過直接接觸傳遞，亦可經(jīng)卵垂直傳遞。大多數(shù)雞群均攜帶本病毒。,豬圓環(huán)病毒（PCV）能引起仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（僵豬綜合征）。,雙股RNA病毒,,呼腸孤病毒科和雙RNA病毒核酸類型為雙股RNA，核酸是分節(jié)段的，常常具有較高的變異率。屬于該類的動物較為重要的病毒有藍舌病毒、輪狀病毒、傳染性囊病病毒。雞的傳染性法氏囊炎是臨床上常見多發(fā)病，對我國乃至世界養(yǎng)禽業(yè)危害極大。,1、主要特征有囊膜，線性雙股RNA，分節(jié)段，三層衣殼，每層均為20面體對稱。（1）藍舌病毒綿羊藍舌病，吸血昆蟲傳播（2）輪狀病毒幼齡動物易感發(fā)病，激發(fā)大腸桿菌病情加重,一、呼腸孤病毒科,1．主要特征雙股RNA，無囊膜，20面體對稱，基因組分2節(jié)段，對熱穩(wěn)定。雞傳染性法氏囊炎病毒（1）主要特征2個血清型，1型有致病性，2型無致病性，兩者抗原交叉性差，流行過程中毒力可變強，主要感染25－65日齡雞。（2）微生物學診斷①制備觸片②瓊擴③雞胚接種④雞源細胞培養(yǎng)⑤ELISA（3）預防與控制疫苗的效果不盡如人意。,雙股RNA病毒科,主要特征無囊膜，20面體對稱，32個杯狀殼粒，核酸單股正鏈RNA。兔出血熱病毒（兔瘟）家兔野兔出血性敗血癥，2月齡一下幼兔，急性或亞急性敗血癥，死亡率100％，病毒有血凝性，尚未分離到病毒，組織苗可用于預防。,兔出血熱病毒,嵌杯病毒科,副粘病毒科（PARAMYXOVIRIDAE）,,病毒多形性，有時呈長絲狀，有囊膜，表面有血凝性和/或神經(jīng)氨酸酶纖突，使細胞融合，負股RNA。,人副粘病毒電鏡照片,人副粘病毒電鏡照片,動物的副粘病毒電鏡照片,新城疫病毒NDV引致雞、火雞、鵝、鴿、鸚鵡等新城疫，已成為世界養(yǎng)禽業(yè)最重要的疾病之一。1病癥感染雞呼吸道、循環(huán)系統(tǒng)、胃腸道紊亂及神經(jīng)癥狀都很明顯，蛋雞可有突發(fā)，生產(chǎn)蛋下降、產(chǎn)薄殼蛋或雞蛋白蛋白減少。火雞等與雞類似，有呼吸道及神經(jīng)系統(tǒng)癥，最常見氣囊炎。鴨鵝多為隱性感染。人類亦可感染。,2致病機理感染病毒首先在呼吸道及腸道黏膜上皮復制，借助血流擴散到脾及骨髓，產(chǎn)生二次病毒血癥，從而感染肺、腸及中樞神經(jīng)系統(tǒng)。血清型NDV只有一個血清型，但毒株毒力有較大差異?？煞殖?個類型強毒型、中毒型和弱毒型。強毒型又名嗜內(nèi)臟型，致死率可達100％，引致廣泛的出血性損傷。天然弱毒株已作為疫苗使用。傳播病毒通過氣霧、污染的食物及飲水傳播。,3診斷必須作病毒分離及血清學試驗?？扇∑ⅰ⒛X或肺勻漿，接種10日齡雞胚尿囊腔分離病毒。病毒能凝集雞、人及小鼠等紅細胞，再作HI試驗鑒別。4預防與控制新城疫是OIE規(guī)定的A類疫病，許多國家都有相應的立法。控制措施包舌良好衛(wèi)生及免疫。通常采用由天然弱毒活毒苗及強毒株的油乳劑滅活苗。,朊病毒PRION是動物與人傳染性海綿狀腦病TSE的病原，實質上不是傳統(tǒng)意義上的病毒。它沒有核酸，只有傳染性的蛋白質顆粒。早在15世紀發(fā)現(xiàn)的綿羊的癢病就是由朊病毒所致，1986年在英國發(fā)現(xiàn)的“瘋牛病”牛海綿狀腦病，嚴重打擊了養(yǎng)牛業(yè)，并危及人類健康，震驚全世界，至今余波未平。,朊病毒（PRION）,,“瘋牛病”牛海綿狀腦病病原也是朊病毒。美國科學家PRUSINER獲1997年諾貝爾醫(yī)學獎，就是為了表彰其在研究朊病毒的性質及其所致的TSE的致病機理所取得的突破性進展。,朊病毒蛋白的一張快照表明該蛋白喜歡彼此配對存在,性質朊病毒是細胞正常蛋白經(jīng)變構后而獲得致病性。這種正常的細胞蛋白名為PRPC。大多數(shù)哺乳動物的基因組均編碼，并在許多組織尤其是神經(jīng)元及淋巴內(nèi)皮細胞中表達。PRPC與PRPSCPRP是朊病毒蛋白PRIONPROTEIN的縮寫。PRPC是正常細胞的一種糖蛋白，分子量2700030000，稱為PRP2730。PRP2730是PRP3335蛋白酶K不完全消化的產(chǎn)物。,朊病毒的特性,,具有反轉錄過程的病毒有反轉錄病毒科和嗜肝病毒科；嗜肝病毒科在動物疾病方面重要性較差。反轉錄病毒科在動物疾病方面的主要特點是多數(shù)病毒具有致腫瘤作用，潛伏期較長。比較重要的動物反轉錄病毒有牛白血病病毒、梅迪/維斯納病毒和馬傳染性貧血病毒。,反轉錄病毒科,反轉錄病毒科,,（1）形狀球形，有囊膜；（2）衣殼對稱性二十面體對稱；（3）基因組為二倍體，由兩個線狀正股單鏈RNA組成；3’端聚A尾；多聚A5’端有帽子結構；能編碼反轉錄酶基因；（4）具有三層結構，最內(nèi)層為基因組核蛋白復合物，包含反轉錄酶，螺旋對稱。,一、主要特征,1可引致腫瘤的病毒甲乙丙丁戊型反錄病毒屬如禽白血?。饬霾《?、貓白血病病毒、牛白血病病毒等。2可引起免疫缺陷的多種病毒,二、主要成員,慢病毒屬如人免疫缺陷病毒1型和2型、牛、猴、貓免疫缺陷病毒、馬傳染性貧血病毒等。,腺病毒科ADENOVIRIDAE,,二、主要特征,（1）形狀五鄰體（2）核衣殼類型20面體對稱，有纖絲，具血凝性；（3）抵抗力熱差、冷強、耐干燥、不耐酸；（4）基因組線狀雙股DNA，無囊膜；（5）核內(nèi)組裝，細胞崩解釋放。,犬傳染性肝炎病毒、減蛋綜合征病毒等。,一、成員,腺病毒電鏡彩色照片,腺病毒結構模擬圖,腺病毒標本模擬圖,,1、犬傳染性肝炎病毒致犬傳染性肝炎，犬狐易感染；病毒經(jīng)鼻咽、口及黏膜途徑進入體內(nèi)，最初感染扁桃體、產(chǎn)生病毒血癥，后感染實質組織，導致出血及壞死，感染犬通過尿、糞及唾液排毒。,三、重要的腺病毒,2、減蛋綜合征病毒EDSV多發(fā)于產(chǎn)蛋高峰時的雞，除雞以外，鴨及鵝也發(fā)病。感染禽產(chǎn)蛋下降6080，產(chǎn)褪色蛋、軟殼蛋或無殼蛋。滅活疫苗效果好。,EDSV病毒電鏡照片,細小病毒科PARVOVIRIDAE,,（1）形狀球形（2）核衣殼類型20面體對稱（3）細胞核內(nèi)復制（4）基因組線狀單股DNA，無囊膜。,一、主要特征,1、豬細小病毒豬細小病毒病，病豬表現(xiàn)繁殖障礙、呼吸道癥狀，嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)。易感豬群發(fā)病率非常高。目前只發(fā)現(xiàn)一個血清型。病毒高度穩(wěn)定，在環(huán)境中能存活多月。用滅活苗或弱毒苗免疫預防。2、犬細小病毒所有犬科均易感，犬出血性腹瀉，有血凝性。3、鵝細小病毒又名小鵝瘟，高免血清與弱毒苗混合用。,

簡介：普通病毒學,曾勇EMAILZY110CNYAHOOCOMCNCELLPHONE15053532606,教學參考書基礎病毒學莽克強，化學工業(yè)出版社，2005年，第一版普通病毒學謝天恩、胡志紅，科學出版社、2002年，第一版獸醫(yī)微生物學陸承平，中國農(nóng)業(yè)出版社，2007年，第四版病毒學實驗技術傅繼華，山東科技出版社，2001年，第一版分子病毒學吳柏春，華中師范大學出版社，1999年病毒學概覽姜莉等譯，化學工業(yè)出版社，2006年HOWPATHOGENICVIRUSESWORKBASICVIROLOGYEDWARDKWAGNERMARTINEZJHEWLETT，BLACKWELLPUBLISHING,2004,SECONDEDITIONPRINCIPLESOFVIROLOGYFLINTSJ,ETAL2004,ASMPRESSSECONDEDITIONPRINCIPLESOFMOLECULARVIROLOGYCANNAJELSEVIERACADEMICPRESSFOURTHEDITION2005,課件下載煙臺大學網(wǎng)絡教學平臺用戶名2009ZENGYONG密碼123,主要章節(jié),第一章導論病毒學概述第二章病毒的形態(tài)與結構第三章病毒的分類與命名第四章病毒的侵染與復制第五章病毒的遺傳與變異第六章病毒與寄主的相互作用第七章病毒基因工程第八章幾種重要病毒的簡介第九章病毒與腫瘤第十章病毒學技術第十一章病毒病的防治,國家規(guī)定強免（強制免疫）的疫苗是必須打的，即強制免疫的，也是免費的，小孩日后入托、入學甚至出國都要憑打過的接種證辦理的。以下是規(guī)定強免的疫苗（2006年3月1日執(zhí)行）出生時乙肝疫苗（第一次）、卡介苗1月齡乙肝疫苗（第二次）2月齡脊髓灰質炎疫苗（第一次）3月齡脊髓灰質炎疫苗（第二次）、百白破（第一次）4月齡脊髓灰質炎疫苗（第三次）、百白破（第二次）5月齡百白破（第三次）6月齡乙肝疫苗（第三次）、A群流腦疫苗（第一次）8月齡麻疹疫苗（第一次）、乙腦疫苗（非活第一、二次）、（減活第一次）9月齡A群流腦疫苗（第二次）,18月齡百白破（第四次）、麻疹疫苗（第二次）2歲乙腦疫苗（非活第三次）、（減活第二次）3歲A群流腦疫苗（第三次）4歲脊髓灰質炎疫苗（第四次）6歲乙腦疫苗（非活第四次）、（減活第三次）、A群流腦疫苗（第四次）、精白破（第一次）16歲精白破（第二次）還有一些疫苗不屬于強免范圍，如麻腮風、風疹、腮腺炎、肺炎、水痘等，都要收費的，可自愿選擇打或不打。記住一點,凡是收費的疫苗都需要家長簽名認可,方可接種。,接種疫苗可以有效預防傳染病，但是在疫苗的接種過程中，由于多種原因，可能會發(fā)生極少數(shù)接種疫苗人出現(xiàn)不良反應，在學術上叫做疫苗的相關病例。對于疫苗相關病例，國家將給予一定的補償。,由于中國使用的脊灰疫苗是減毒活疫苗，加上受種者個體差異等，兒童服用后有可能發(fā)生疫苗相關麻痹病例，但發(fā)生率極低，每250萬至1000萬孩子接種后，可能有1人出現(xiàn)接種后的麻痹甚至下身癱瘓等副反應，這種副反應主要發(fā)生在首次接種的兒童中。1994年，我國報告了最后1例本土脊髓灰質炎病例，以后再無病例發(fā)生。2008年，衛(wèi)生部等部門聯(lián)合發(fā)布關于做好脊髓灰質炎疫苗相關病例鑒定及善后處理工作的指導意見，承諾對因接種脊灰疫苗后出現(xiàn)相關小兒麻痹副反應的兒童，由地方和衛(wèi)生部門相助，開展醫(yī)療鑒定、賠償。同年，北京市衛(wèi)生局等相關部門印發(fā)北京市疫苗預防接種異常反應相關麻痹型脊髓灰質炎病例補償辦法試行，其中提出，當事人應在出現(xiàn)癥狀滿2年后的1年內(nèi)，向北京市醫(yī)學會提出傷殘等級鑒定申請，補償費用實行一次性結算，由市財政部門在預防接種工作經(jīng)費中安排，最高可達24萬元。,第一章導論病毒學概述,第一節(jié)病毒學知識的起源及發(fā)展第二節(jié)病毒和病毒學第三節(jié)病毒的起源,本章重點,1、了解病毒學發(fā)展歷程中的主要事件。2、病毒的基本特點。3、幾種亞病毒的定義。4、病毒性病原確定的標準。5、病毒的起源。,第一節(jié)病毒學知識的起源及發(fā)展,一、病毒學發(fā)展的動力1、防治病毒性疾病2、分子生物學和分子遺傳學的重要模式生物,二、病毒學發(fā)展的歷史,1、經(jīng)驗時期公元前1400年，古埃及象形文字就描述了一位司祭人員的病狀是典型的脊髓灰質炎。,公元前1000年，中國已有天花發(fā)生，到公元1000年，宋真宗時代已有吸入病痂接種人痘預防天花的辦法，1796年英國人EDWARDJENNER提出接種牛痘預防天花。1966年世界衛(wèi)生組織提出對對接觸天花患者的人進行計劃免疫；1977年10月索馬里最后一位患者治愈，宣布全世界消滅了天花病。,天花的種痘預防,1979年10月26日聯(lián)合國世界衛(wèi)生組織在肯尼亞首都內(nèi)羅畢宣布，全世界已經(jīng)消滅了天花病，并且為此舉行了慶祝儀式?，F(xiàn)在美國和俄羅斯的兩個實驗室（美國亞特蘭大的疾病控制中心、俄羅斯新西伯利亞的維克托實驗室）還暫時保存有天花病毒。,在家畜的病毒病中，狂犬病的相關記載可能最早。巴斯德18221895法國著名科學家發(fā)明巴氏消毒法、1884年研制成功狂犬疫苗。,家蠶“高節(jié)”、“腳腫”郁金香碎色花病,2、病毒的發(fā)現(xiàn)時期,煙草花葉病1886年麥爾MAYER證明其有傳染性，但認為是細菌。1892年伊萬諾夫斯基IVANOVSKI證明通過細菌濾器的汁液仍有致病性，但認為是細菌毒素。,CHAMBERLAND氏濾器,1898年貝杰林克BEIJERINCK荷蘭著名科學家（麥爾的助手）A能通過細菌濾器B僅能在感染的細胞內(nèi)繁殖，在體外非生命的物質中不能生長C“有感染性的、活的物質”，并將其命名為VIRUS,第一個動物病毒的病例?？谔阋撸?898）德國細菌學家勒夫勒（LOEFFLER）和費羅施（FROSH）發(fā)現(xiàn)引起?？谔阋叩牟≡部梢酝ㄟ^細菌濾器，從而再次證明伊萬諾夫斯基和貝杰林克的重大發(fā)現(xiàn)。證明高度稀釋的濾液可以再現(xiàn)疾病，否定了毒素說。第一個有關噬菌體的報道葡萄球菌噬菌體PHAGE來自希臘文，意指”吃”。,認為病毒是一種與細菌類似的病原體，不同僅在于病毒必須在活細胞內(nèi)才能繁殖，體積很小，能通過細菌濾器，被稱為“超顯微的濾過性病毒”。,3、病毒本質的研究時期,早期的工作證實病毒的活性與蛋白有關。1935年美國生物化學家斯坦利得到了TMV的蛋白晶體，晶體溶解后保持致病性。病毒是由蛋白質和核酸組成，核酸可分為RNA和DNA兩種，核酸是感染、致病、復制的主體。,20世紀30年代的后期，電子顯微鏡的發(fā)展，進一步促進了病毒學的發(fā)展，證明病毒顆粒的內(nèi)部是核酸，外面包裹著蛋白質。ELECTRONMICROGRAPHSOFHIGHLYPURIFIEDPREPARATIONSOFSOMEVIRUSESAADENOVIRUSBROTAVIRUSCINFLUENZAVIRUSCOURTESYOFGEORGELESERDVESICULARSTOMATITISVIRUSETOBACCOMOSAICVIRUSFALFALFAMOSAICVIRUSGT4BACTERIOPHAGEHM13BACTERIOPHAGE,4、病毒學發(fā)展中的主要成就,斯坦利（19041971）美國著名化學家，1935年提純了煙草花葉病毒，1946年獲得諾貝爾化學獎,蒂勒（THEILERM）美國著名病毒學家，確證了黃熱病毒，成功地開發(fā)了減毒疫苗而榮獲1951年諾貝爾生理學和醫(yī)學獎。,美國科學家恩德斯ENDERSJF、韋勒WELLERTH、羅賓斯ROBBINSFC因將脊髓灰質炎病毒成功地在培養(yǎng)細胞中培養(yǎng)而榮獲1954年諾貝爾生理學和醫(yī)學獎,法國科學家雅各布JACOBF、利沃夫LWOFFAM、莫諾MONODJL因提出“操縱子”概念，預言了MRNA的存在，導致MRNA的證實，從而使遺傳密碼的實驗研究得以開始，因而使分子遺傳學的整個體系得以建立，其意義十分深遠。發(fā)現(xiàn)酶和病毒合成的遺傳控制機制獲1965年諾貝爾生理學和醫(yī)學獎。,勞斯（PEYTONROUS18791970）美國著名病毒學家，證明病毒可引起動物的癌癥，獲1966年諾貝爾生理學醫(yī)學獎,德爾布呂克（DELBRUCKM）德國、赫爾希（HERSHEYA）美國、盧里亞（LURIAS）（意大利）因提出病毒的“一步生長曲線”，發(fā)現(xiàn)病毒的復制機理與噬菌體的基因重組現(xiàn)象，證明遺傳物質是DNA而不是蛋白質，獲1969年諾貝爾生理學醫(yī)學獎。,巴爾的摩（BALTIMORED）（美國）、杜爾貝科（DULBECCOR）（意大利）、特明（TEMINHM）（美國）巴爾的摩和特明發(fā)現(xiàn)了逆轉錄酶，證明遺傳信息不僅由DNA到RNA，也可由RNA到DNA；杜爾貝科發(fā)現(xiàn)了腫瘤病毒和細胞遺傳之間的相互作用，他倡導了向細胞內(nèi)注入已知功能的單個病毒基因而不注入完整病毒的技術。獲1975年諾貝爾生理學和醫(yī)學獎。,畢曉普（美國）JMICHAELBISHOP,瓦爾姆斯（美國）HAROLDEVARMUS,發(fā)現(xiàn)了逆轉錄酶病毒致癌基因的細胞起源，否定以前的看法癌基因必然源自病毒。獲1989年諾貝爾生理學和醫(yī)學獎。,普魯西納（美國）（SBPRUSINER１９９７年諾貝爾醫(yī)學或生理學獎、發(fā)現(xiàn)感染性蛋白子（PRION）,德國科學家哈拉爾德楚爾豪森（HARALDZURHAUSEN）,法國科學家弗朗索瓦絲巴爾－西諾西（FRAN?OISEBARRéSINOUSSI）,法國科學家呂克蒙塔尼（LUCMONTAGNIER）,德國科學家哈拉爾德楚爾豪森（HARALDZURHAUSEN）因發(fā)現(xiàn)人乳頭瘤病毒引發(fā)子宮頸癌獲此殊榮，兩名法國科學家弗朗索瓦絲巴爾－西諾西（FRAN?OISEBARRéSINOUSSI）和呂克蒙塔尼（LUCMONTAGNIER）因發(fā)現(xiàn)人類免疫缺陷病毒獲此殊榮。,2008年度諾貝爾生理學或醫(yī)學獎,美國12/21法國5/21德國2/21意大利2/21女科學家1/21,第二節(jié)病毒和病毒學,一、病毒與其他微生物的區(qū)別要點,二、病毒的特點,①結構簡單，不具細胞結構，僅含一種核酸，DNA或RNA。②嚴格的細胞內(nèi)寄生，沒有新陳代謝機能，利用宿主細胞的酶、能量合成系統(tǒng)、核糖體、細胞因子、大分子以及病毒自身組分進行自身繁殖。③在宿主細胞內(nèi)，子代病毒粒子由新合成的結構組分進行裝配而增殖。④純化的病毒可被結晶。⑤感染周期中組裝的子代病毒粒子在它們感染另外的宿主細胞時將病毒基因轉染給新的宿主細胞。⑥對一般抗生素和作用于微生物代謝途徑的藥物均不敏感。⑦絕大多數(shù)病毒在不同程度上對干擾素敏感。⑧有些病毒的核酸能整合到宿主細胞的DNA中，從而誘發(fā)潛伏性感染。,病毒的定義是一類比較原始的、有生命特征的、能夠自我復制和嚴格細胞內(nèi)寄生的非細胞生物。,三、病毒學,病毒學作為一獨立的學科出現(xiàn)在20世紀50年代。它是一門在充分了解病毒的一般形態(tài)和結構特征基礎上，研究病毒基因組的結構與功能，探尋病毒基因組復制、基因表達及其調控機制，從而揭示病毒感染、致病的分子本質，為病毒基因工程疫苗和抗病毒藥物的研制以及病毒病的診斷、預防和治療提供理論基礎及其依據(jù)的科學。,研究病毒學的主要目的A預防疾病B利用病毒C作為模式生物，研究分子間的相互作用以及基因的復制、突變等D認識生命的起源,四、病毒類型,根據(jù)寄主的不同植物病毒動物病毒噬菌體,根據(jù)核酸的不同,單鏈DNA病毒雙鏈DNA病毒DNA與RNA反轉錄病毒雙鏈RNA病毒負鏈單鏈RNA病毒正鏈單鏈RNA病毒,根據(jù)病毒組成成分與復制方式的不同,（真）病毒EUVIRUS至少含有蛋白質和核酸兩類物質標準病毒與缺損病毒病毒在增殖過程中，由于病毒基因組因某種環(huán)境因素的影響或轉錄過程的錯誤而發(fā)生的突變，以致有裝配不全的病毒顆粒產(chǎn)生，成為缺損病毒（DEFECTIVEVIRUSPARTICLE），又稱干擾缺損顆粒（DEFECTIVEINTERFERINGPARTICLESDI）（DI顆粒），必須依賴于其同源的完全病毒才能復制。許多病毒都有標準病毒與缺損病毒的兩重性，如脊髓灰質炎病毒。假病毒與真病毒假型病毒（PSEUDOTYPEVIRUS）一種病毒的核酸被以另一種病毒編碼的外殼。假病毒或假病毒顆粒（PESUDOVIRION）由細胞的DNA片段被病毒的外殼包被形成。雜種病毒與純種病毒雜種病毒一種病毒顆粒中含有兩種病毒的遺傳物質。,衛(wèi)星病毒SATELLITEVIRUS和衛(wèi)星核酸它們?nèi)鄙侏毩椭频哪芰?，需要輔助病毒HELPERVIRUS才能復制，或由輔助病毒提供外殼蛋白來包被核酸。其核酸序列大部分與輔助病毒不同，僅末端小段為同源。其中核酸編碼自己外殼蛋白的稱為衛(wèi)星病毒，否則稱為衛(wèi)星核酸SSDNA,SSRNA,DSRNA。類病毒VIROID它是最小的（240375BP）單鏈、環(huán)狀RNA；有獨力侵染、自主復制能力，無需輔助病毒；沒有外殼蛋白；其核酸不編碼任何蛋白。目前僅知類病毒侵染植物。朊病毒或朊粒PRION是一種不含有核酸的傳染性蛋白質顆粒，能通過分子自身的構想變化，并傳到其他分子引起同樣的變化而致病。,亞病毒SUBVIRUS,五、病毒性病害的確立,科赫法則（病毒不能用人工培養(yǎng)基培養(yǎng)增殖）1937年RIVERS法則A必須發(fā)現(xiàn)某種特異病毒以一定程度的規(guī)律與某種疾病有聯(lián)系，并從患病寄主中分離病毒。B在實驗寄主或寄主細胞中培養(yǎng)。C證明培養(yǎng)物的濾過性。D在原始寄主或有關的種內(nèi)產(chǎn)生類似病害。E能重新分離出同一種病毒。,1973年EVANS提出免疫學證據(jù)A病毒必須存在于病人的組織、血液，并在該處反復出現(xiàn)。B能在實驗室中很好地經(jīng)動物或組織傳代。C在患病前期有規(guī)律地缺乏病毒特異抗體。D在疾病期間抗體有規(guī)律地出現(xiàn)。1暫時的病毒特異IGM抗體2持續(xù)的IGG抗體3局部抗體IGA在原發(fā)增殖部位E抗體的產(chǎn)生伴隨在相應組織中存在病毒。F無類似有關的其他病毒或抗體。G能用特異性疫苗預防。,六、病毒生命形式的兩重性,病毒存在的兩重性細胞內(nèi)（核酸分子形式）細胞外（不顯示復制活性，保持感染活性，病毒體或病毒顆粒形式）病毒的結晶性與非結晶性結晶是很多無機化合物存在的一種形式,七、病毒研究的發(fā)展趨勢,1988年，世界衛(wèi)生組織（WHO）提出2000年底全球消滅脊髓灰質炎，計劃修訂到2008年。病毒功能基因組學和功能蛋白質組學的研究朊病毒的研究DNA疫苗的研究病毒與宿主的相互作用及致病機制,第三節(jié)病毒的起源,病毒的起源有三類學說1）退化性起源學說退化性起源學說認為病毒是細胞內(nèi)寄生物的退化形式。這種細胞內(nèi)寄生的產(chǎn)生原因可能是由于微生物對某種不能穿過細胞膜的代謝發(fā)生了嚴重依賴。退化性起源學說可以把病毒的起源解釋為兩個階段首先，寄生物在細胞內(nèi)產(chǎn)生獨立復制的DNA質粒，然后，編碼寄生物亞細胞結構單位的基因發(fā)生突變，形成病毒的衣殼蛋白。隨著進化的發(fā)生，新獲得的可在細胞間轉移的特性被進一步選擇下來。,2）病毒起源于宿主細胞中的RNA和（或）DNA成分的學說這種學說認為，病毒是正常的細胞組分在進化過程中獲得了自主復制的能力獨立進化而來的。該學說能解釋所有病毒的起源DNA病毒起源于質粒或轉移因子；反轉錄病毒起源于反轉座子；RNA病毒起源于自主復制的MRNA。,3）病毒起源于具有自主復制功能的原始大分子的學說病毒起源于自主復制的RNA分子。核糖核酸多聚體具有自主復制的信息和能力。由于發(fā)現(xiàn)RNA分子具有催化化學反應的能力使得RNA為生命和病毒的起源的學說變得更具有吸引力。小而簡單的RNA分子具有至少下列三種化學功能①核糖核酸酶的活性；②能自我拼接去掉內(nèi)部的核酸序列；③有實驗表明，以RNA作引物可以合成依賴于模板的多聚胞嘧啶核酸。RNA分子可以進行復制和進化相關的三個基本反應。,這些觀察都有利于RNA是現(xiàn)今生物的進化起源的學說。首先是RNA的形成和復制，然后演變出RNA蛋白介導的一系列反應，第三步產(chǎn)生了DNA。DNA由于比RNA穩(wěn)定而最終成為遺傳信息。RNA的反應性有利于它作為催化物而不利于它成為遺傳物質。有些分子被包裝在細胞和組織中，形成宿主細胞，另一些分子則自我復制或寄生在宿主細胞中，進化成為病毒。這一理論認為病毒與宿主是共進化的?，F(xiàn)今的類病毒和衛(wèi)星RNA，仍保留有部分的RNA催化性能，因而被一些學者認為是生命形式出現(xiàn)以前的RNA世界的化石。,研究病毒的進化有多種方法，可以通過序列同源性、基因組排列順序、基因組的基因組成等方面構建病毒的進化樹。研究基因組成的演化對揭示基因的起源及病毒與宿主之間的關系具有重要意義。DNA病毒和RNA病毒相比相對穩(wěn)定。一方面，DNA復制時，其酶具有校正功能；另一方面，DNA病毒容易在宿主體內(nèi)形成持續(xù)性或慢性感染，它們可以在宿主體內(nèi)存在多年而后爆發(fā)，其間可能幾乎不發(fā)生變異，因此，這類病毒的變異速率可能表現(xiàn)得比裂解型病毒慢一些。一般來講，DNA病毒不會像RNA病毒那樣引起人類世界范圍的流行性疾病。RNA病毒引起的疾病流行和變異成為研究RNA病毒進化，特別是進化時間的良好素材。,相關病毒學研究單位,中國科學院武漢病毒研究所武漢大學，病毒學國家重點實驗室中國疾病預防控制中心軍事醫(yī)學科學院微生物流行病研究所中國農(nóng)業(yè)科學院,習題,1列舉5例病毒學發(fā)展史上的突出成就2列舉5本有影響的病毒學雜志3病毒的特點4病毒基因組的特點5病毒性病原確立的標準,

簡介：病毒學研究方法簡介,生物安全實驗室,P1實驗室研究的病毒危險性較低，試驗人員連口罩都不用帶，穿上白大褂就可以了，試驗人員在這里很放松；P2實驗室研究的是中度危險的病原，像肝炎、流行性感冒等等，要求戴防護性較好的口罩；P3實驗室研究的是高度危險的病毒，傳染性很強，而且沒有疫苗，試驗人員的保護措施要比P1/P2實驗室嚴密得多；P4實驗室全球級別最高的生物安全實驗室，研究的是極度危險的病毒，如令人談之色變的埃博拉病毒、馬爾堡病毒，進入這種實驗室的工作人員，處于防護服的嚴密保護之下，連空氣都不能在實驗室內(nèi)呼吸，紅色螺旋狀管子，是專門用來向室內(nèi)輸送新鮮空氣的，試驗人員一進入實驗室，要先屏住呼吸，馬上接上這種管子，然后才能呼吸。,,根據(jù)微生物及其毒素的危害程度不同，分為４級，一級最低，四級最高。,病毒學研究的主要方法,生物學特性測定在宿主上的反應癥狀、傳播等病毒分離與培養(yǎng)提純與純化、二元培養(yǎng)法光鏡與電鏡觀察病毒粒子和病毒與相應抗血清的特異免疫吸附情況免疫學技術以血清學和組織免疫化學方法檢測帶毒情況、多克隆抗體、單克隆抗體分子生物學技術核酸分子雜交、PCR等,一、生物學特性測定,在宿主上的反應宿主范圍、癥狀表現(xiàn)、傳播方式等病毒的理化性質病毒粒子的形態(tài)、大小、對理化因子的耐受性、體外存活期等病毒接種方法注射接種、病毒組織培養(yǎng)技術植物病毒汁液摩擦接種、昆蟲介體接種、嫁接接種、菟絲子接種法等,巨細胞病毒感染細胞的典型“貓頭鷹眼”樣核內(nèi)包涵體,冠狀病毒感染“非典”X線胸部檢查可見肺部不同程度的片狀陰影，少數(shù)病人進展迅速，呈大片狀陰影，大多數(shù)為雙側改變，陰影吸收消散較慢。,TMVTRANSMISSIONBYANAPISSP,ASEVEREMOSAICSYMPTOMONTOMATOLEAFTMV,腿色斑CHLOROTICSPOTING,黃化YELLOWING,病毒檢測,二、病毒的分離與鑒定,,提純EXTRACTION/純化PURIFICATION,病毒的分離與鑒定,病毒的提純是將宿主中的病毒粒子與宿主細胞組分區(qū)分開來的過程。原理是利用病毒的蛋白質和大分子粒體的特性，及其與宿主細胞組分在理化特性上的差異將病毒粒子區(qū)分出來，并盡可能保持侵染力。目的是確切地研究病毒理化、生物學特性、化學組分、組成、增殖過程及機制，還可用于制備高效價的抗血清。,1953年，斯坦利第一次提取并結晶了TMV，這是病毒學史上一個重要的里程碑。,（一）病毒的純化與提純,,一般純化方法動物病毒的純化從空斑、病斑分離，用終點稀釋法植物病毒的純化如確定是一種病毒，且可機械摩擦接種，則接種到適當寄主上；如可能有多種病毒，則要嫁接傳染，先將病毒保存，然后試用蟲媒或其他方法分離。,二、病毒的分離與培養(yǎng),,,1、差速離心和密度梯度離心差速離心交替使用高速和低速離心高速離心（4000080000G）使病毒沉淀，取沉淀低速離心（約4000G）僅去除大的細胞碎片等雜質，取上清密度梯度離心部分或完全根據(jù)顆粒在一個無對流介質中的密度而獲得分離蔗糖1040CSCL等,（三）病毒提純的技術,二、病毒的分離與培養(yǎng),,,2、沉淀法簡便快速但粗糙易變性鹽析法硫酸銨濃度達3050飽和度時多數(shù)病毒沉淀等電點沉淀加醋酸或鹽酸丙酮沉淀濃度達4070聚乙二醇沉淀濃度達48乙醇沉淀濃度達20沉淀植物蛋白，上清夜用硫酸銨沉淀3、吸附法磷酸鈣、離子交換樹脂、羧甲基纖維素4、酶處理許多病毒抗蛋白酶和核酸酶,（三）病毒提純的技術,二、病毒的分離與培養(yǎng),,,5、有機溶劑萃取有機溶劑可溶掉脂肪、有色雜質或非病毒的變性蛋白，如脊髓灰質炎病毒提純中用正丁醇要考慮病毒對有機溶劑的耐受性,（三）病毒提純的技術,,,,脂肪,變性非病毒蛋白,病毒,水,醇,,,,,,二、病毒的分離與培養(yǎng),,,6、電泳法普通電泳、密度梯度電泳、等電聚焦電泳等7、柱層析法吸附用離子交換或吸附法分子篩瓊脂糖或葡聚糖制成凝膠柱8、抗血清處理針對宿主蛋白的血清來沉淀雜蛋白加病毒的抗血清形成病毒抗體復合物,（三）病毒提純的技術,二、病毒的分離與培養(yǎng),要證明某種疾病是某一感染因子所引起．則必須滿足RIVERS法則①從患病者體內(nèi)分離出病毒；②在實驗動物或寄主細胞中可以培養(yǎng)；③證明這種培養(yǎng)物具有濾過性；④在原始宿主或相關種內(nèi)能產(chǎn)生同樣的病癥；⑤能重新分離出病毒。病毒的分離與鑒定組成了病毒學診斷技術的主體。病毒分離VIRUSISOLATION是診斷病毒感染的“金標準”GOLDSTANDARD。,二、病毒的分離,病毒的分離,組織培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)動物接種,,組織培養(yǎng)原代細胞新鮮組織胰蛋白酶消化，分散培養(yǎng)液成單層細胞二倍體細胞株原代細胞傳代（為二倍體細胞）傳代細胞系腫瘤組織或二倍體細胞自發(fā)轉化（非整倍體）,二、病毒的分離與培養(yǎng),,卵黃囊接種用58D雞胚，以細長針由氣室端刺入卵黃囊，孵育后收集卵黃囊膜檢查。常用于一些嗜神經(jīng)病毒羊膜腔用1214D雞胚，將檢材注入羊膜腔，孵育后取羊水檢查。常用于流感病毒的初次分離尿囊腔用912D雞胚，將標本接種于尿囊腔，孵育后取尿囊液檢查。常用于培養(yǎng)流感病毒和腮腺炎病毒等絨毛尿囊膜用1012D雞胚，無菌下開一小窗，將材料滴在絨毛尿囊膜上，孵育后觀察膜上有無斑點病變。常用于培養(yǎng)單純皰疹病毒，天花病毒和痘病毒,雞胚接種,絨毛尿囊膜痘病毒特異性損傷,3動物接種,常用動物小鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猴等。不同病毒對動物的敏感性不同，根據(jù)病毒種類加以選擇。接種途徑按病毒侵襲部位選擇相應的接種途徑乙型腦炎病毒及狂犬病毒小鼠腦內(nèi)接種柯薩奇病毒乳鼠腹腔接種乙肝病毒黑猩猩靜脈注射流感病毒鼻腔滴種用途分離鑒定病毒，制備疫苗，制備抗血清,標本制備濃縮標本有以下幾種方法①超速離心離心的時間和速度取決于病毒顆粒的大小和離心機轉頭的半徑，一般是30MIN到3H．沉淀的樣本用滅菌蒸餾水洗后再放到銅網(wǎng)上；②超過濾法用于分子篩的蛋白質相對分子質量為10000；③接種細胞接種細胞增殖病毒，然后快速包埋、切片；④免疫凝集如有特異抗血清，且病毒已知，也可用該法濃縮病毒,三、病毒的光鏡與電鏡觀察法,光鏡宿主組織切片、包涵體,三、病毒的電鏡觀察法,1、正染法（超薄切片法、病組織）將細胞用戊二醛固定，然后脫水、包埋、切片、染色、觀察病毒顆粒，通常12D完成。操作復雜、費時，但樣品可長期保存，可觀察病毒粒子形態(tài)與發(fā)生過程。2、負染法直接將病毒懸液也可用細胞滴在銅網(wǎng)上，用重金屬通常用磷鎢酸進行染色，觀察病毒顆粒，1020MIN可出結果。原理負性染料不滲入病毒顆粒，而是將病毒顆粒包繞，由于負性染料含重金屬使電子束不能穿透，病毒顆粒具有亮度，在周圍暗背景上顯示亮區(qū)較正染法顯示的圖像清晰，可顯示病毒的結構。缺點敏感性低，要求病毒量在107／ML以上，同科病毒難于鑒別。3、投影技術4、膠體金標記技術、與免疫學技術結合等,采用幾種電鏡技術觀察病毒粒子的形態(tài),ORFVIRUS口瘡病毒接觸性膿皰皮炎,EBOLAVIRUS埃博拉病毒（正染技術）,VACCINIAVIRUS痘苗病毒（投影技術）,負染技術,美國疾病控制和預防中心公布的一張未標明日期的彩色電子顯微照片。它顯示出H5N1型禽流感病毒（金黃色）在MDCK細胞（綠色）培養(yǎng)液中的活動狀態(tài),電鏡技術的應用,研究病毒形態(tài)、鑒定觀察病毒的形態(tài)及形態(tài)發(fā)生學過程；亞顯微結構；病毒與宿主細胞的關系；病毒感染細胞的超微結構改變；病毒的分類等。診斷病毒病檢測不能在體外培養(yǎng)的病毒，如輪狀病毒、星狀病毒、嵌杯病毒、HAV等都是用電鏡最先發(fā)現(xiàn)的能進一步發(fā)現(xiàn)新的病毒和病毒病。,四、免疫學技術,1、病毒抗原2、病毒抗體3、免疫學診斷方法免疫熒光法IF免疫酶法（ELISA）單克隆抗體技術,血凝抑制（HI）試驗,血凝試驗HA,瓊脂擴散試驗,五、病毒抗原檢查,可檢測細胞內(nèi)、外的游離病毒抗原。敏感、特異，簡便、快速。適用于多種病毒性疾病的早期快速診斷。,INFLUENZAVIRUSA培養(yǎng)物DFA染色陽性,生殖道HSV2涂片DFA染色陽性,五、分子生物學技術,,聚合酶鏈反應（PCR）核酸分子雜交SOUTHERNBLOT、NOUTHERNBLOT和WESTHERNBLOT蛋白質組學基因組學核酸序列測定及基因功能基因工程抗病毒疫苗或抗病毒的大分子多肽、病毒載體,

簡介：導游應急救護知識,1,2,導游為什么要學急救,2004年10月17日，北京“首都高校馬拉松挑戰(zhàn)賽”2人猝死,其實我們應該做到全民普及急救知識,3,時間就是生命,心搏驟停的嚴重后果以秒計算●心跳驟停黑朦，意識障礙，突然倒地●15秒抽搐●30秒呼吸停止●1～2分鐘瞳孔固定●4分鐘糖無氧代謝停止●5分鐘腦內(nèi)ATP枯竭、能量代謝完全停止●6分鐘神經(jīng)元不可逆性損傷,等急救車來就是等死,旅游途中更是如此,4,研究背景,最美列車女孩,也許什么時候你就是“最美（帥）導游”,5,主要內(nèi)容,一、心肺復蘇術二、氣道異物梗塞急救三、外傷現(xiàn)場急救四、毒蛇咬傷處理,6,一、心肺復蘇術,7,8,,那些因猝死而逝去的明星,柯受良,王小波,梁左,古月,侯耀文,馬季,謝晉,高秀敏,心搏呼吸驟停判斷,心搏呼吸驟停的快速判斷，要求在10秒種內(nèi)完成突然倒地和/或意識喪失。自主呼吸停止。頸動脈搏動消失不能確認即行心肺復蘇術）。,頸動脈在喉節(jié)旁開2～3CM單側觸摸、力度適中、時間＜5秒,意識判斷要領,拍打雙肩，湊近耳邊大聲呼喚“喂你怎么了”如認識對方，可直呼其名。如均無反應，則確定為意識喪失。,高聲呼救,如確定意識喪失，應立即高聲呼救“來人吶救命啊”讓人撥打120急救電話。第一目擊者必須在病人身旁，開始徒手心肺復蘇的救助。,搶救的體位要求,呼救的同時，應迅速將病人擺放成仰臥位。翻身時整體轉動，保護頸部。身體平直，無扭曲。擺放的地點地面或硬板床。,部位胸骨中線中下1/3交界處。最好采用跪姿，雙膝平病人肩部。雙臂繃直，肘關節(jié)不得彎曲。雙臂形成一直線，與患者胸部垂直，用上半身重量垂直往下壓。下壓和放松時間為11。手掌根部始終緊貼胸部，放松不離位。,CCIRCULATION人工循環(huán),頻率至少100次/MIN18秒鐘內(nèi)完成30次。深度成人胸骨下陷至少5CM，兒童約5CM，嬰兒約4CM。,CCIRCULATION人工循環(huán),胸外按壓,胸外按壓,胸外心臟按壓注意事項,1胸外心臟按壓如操作不標準，常會導致并發(fā)癥的發(fā)生。2按壓部位不正確。3搶救者按壓時肘部彎曲，導致用力不垂直，按壓力量不足，按壓深度達不到5公分。4沖擊式按壓、猛壓、按壓放松時抬手離開胸骨定位點，導致下次按壓部位錯誤等情況，均可由此引起骨折。,AAIRWAY（氣道的開放）,徒手開放氣道,1、壓頭抬頜，解除舌根后墜對氣道的壓迫。2、首先清理口腔，將其頭偏向一側，用手指探入口腔，清除分泌物及異物。,3、然后壓頭抬頜，使頭部后仰，后仰程度為下頜、耳廓的連線與地面垂直。4、動作輕柔，防止頸部過度伸展，防止壓迫氣道。,徒手開放氣道,BBREATHING人工呼吸,判斷呼吸要領●壓頭抬頜后，隨即低下頭判斷呼吸?！裱劭?、耳聽、面感?！?秒鐘內(nèi)完成?！袷冀K保持氣道開放位置。,●若自主呼吸消失可行口對口人工呼吸。●始終保持氣道開放?！翊禋鈺r不能漏氣?！襁B吹2次，讓病人出氣。●每次吹氣量600～800ML，以患者胸部抬起為宜?！癫皇恰按迪灎T”，吹氣持續(xù)2秒。,人工呼吸,口對口呼吸,人工呼吸,CAB協(xié)調,采用按壓通氣比為302,1MIN30CC18S2B8S30CC2B13CC8S,25,2011年7月23日，重慶酉陽，一名溺水老人被人從河中救起，渾身是水的他已重度昏迷，此時，你若在身邊，選是打120急救打110求助還是大聲呼救或是替溺水者按壓心臟,這才是酉陽最美麗的女孩,實例,26,照片里年輕的藍衣女孩在臨危一刻給出了她的答案跪下去，嘴對嘴為溺水老人實施人工呼吸。,隨后又采用胸外心臟按壓的方式搶救。,27,路人將老人匍匐，不停拍打背部看是否能讓體內(nèi)積水排出路過的護士快速查看了溺水老人的心跳和瞳孔口對口為老人進行人工呼吸（進行了4MIN，期間老人的眼睛微微張開過）不停按壓老人的胸口120趕到聽了聽老人的心音，把老人抬上救護車送醫(yī)院去了老人因搶救無效死亡,,,,,,事件過程,28,發(fā)達國家和我國為何差距這么大,發(fā)達國家猝死搶救成功率3070我國搶救成功率低于1,我國大多普通市民缺乏心肺復蘇意識公共場所很少配備自動體外除顫儀,從20～25CM向胸骨中部心前區(qū)拳擊1、2次每次可達5J能量,適用于心臟驟停1MIN內(nèi)，無脈搏性室速或室顫除顫儀未到位時、完全性房室傳導阻滯。,胸前拳擊,30,“自我”心肺復蘇,獨處時,心臟病發(fā)作感覺馬上就要不省人事怎樣急救,31,“自我”心肺復蘇咳嗽CPR,答案不要驚慌,要不?？人杂昧Φ目让恳淮慰人郧?都要先深吸一大口氣。然后,用力地、深深地、長長地咳,好像要把胸腔深處的痰咳出來一般每間隔大約兩秒鐘,要做一次吸、一次咳,一直要做到救護趕到時,或者已經(jīng)感到心跳恢復正常,才能休息。,32,二、氣道異物梗塞急救,先看一段視頻,33,34,嬰幼兒嬰幼兒喉保護機制及吞咽功能不健全，進食時又常常嬉笑、啼哭、玩耍，容易將食物、小玩具等異物吸入氣管內(nèi)造成呼吸道梗阻。青壯年成人多因在進食時談話大笑，拋高接食花生米等食物，或進食過快，吞咽過猛，將食物碎塊吸入氣管梗阻。老年人近年來有資料表明，老年人或體弱多病者因吞咽機能減退，更容易將口中食物等吸入氣管造成氣道梗阻。,氣道梗阻常見原因,35,顏面青紫不能發(fā)聲“V”形手勢肢體抽搐呼吸停止,癥狀表現(xiàn),36,自救腹部沖擊法,成人氣道梗阻急救（自救）,成人氣道梗阻急救（互救）,對于尚清醒者，可囑其彎腰并用手掌擊打其后背中間46次?；蚓戎握哂秒p手環(huán)繞患者腰間，一手握拳抵于其臍上兩橫指處，另一手握緊此拳向上、向后沖擊勒壓46次。,如果患者已經(jīng)窒息昏迷倒地，且嘗試口對口吹氣無效，可跨坐其腿上用掌根推壓臍上兩橫指處46次。,成人氣道梗阻急救（互救）,如異物被沖出，須迅速將其掏出口外。可用手將舌頭及下巴抓住抬高然后用另一側之手指將異物鉤出，清除口腔異物（不可盲目掏挖）但應注意不要將其推入氣道更深處，或被患者反射性閉嘴咬合，傷及救治者手指。,成人氣道梗阻急救（互救）,嬰幼兒氣道梗阻急救（互救）,三、外傷急救,外傷現(xiàn)場急救技術,止血包扎固定搬運,止血,指壓動脈止血法直接壓迫止血法加壓包扎止血法填塞止血法止血帶止血法,指壓止血,當大血管（動脈）出血時，直接用手指壓迫出血處血管的上端（近心臟部），用力壓骨頭，達到止血的目的。,指壓顳淺動脈頭頂、額部、顳部的大出血,指壓面動脈顏面部大出血壓下頜角前凹陷處指壓耳后動脈耳后動脈大出血耳后乳突下凹陷處,指壓枕動脈一側頭后枕骨附近大出血用四指壓耳后和枕骨粗隆間的凹陷,指壓肱動脈肘關節(jié)以下大出血上臂中段以下內(nèi)側,,指壓股動脈一側下肢大出血雙拇指壓腹股溝中點稍下方指壓脛前后動脈腳部大出血雙手拇食指壓足背前及足跟和內(nèi)踝間動脈,指壓尺橈動脈手部大出血同時手腕兩側指壓指址動脈指址部大出血指址跟部兩側,止血帶止血,只用于四肢其它方法無法應用時有橡皮止血帶,氣性止血帶,布制止血帶三種,注意事項,部位上臂不能扎在中1/3部襯墊必須有松緊度以出血停止，遠端摸不到搏動為宜時間小于5小時，每小時放松一次，約3分鐘標記標記時間和患者,壓迫止血法,較小的傷口壓迫不少于10分鐘,加壓包扎止血,用于各種傷口可靠，最常用包扎范圍較傷口大,填塞止血法,頸部和臀部大而深傷口先填塞再包扎,包扎,應用范圍廣保護創(chuàng)面、防止污染、止血止痛、固定敷料動作要輕、包扎要勞、松緊要適宜傷口接觸面要無菌,包扎目的、材料,目的簡易止血、保護傷口和固定。材料主要有繃帶、三角帶等，如無上述物品，可以用清潔的毛巾、圍巾、衣物替代，,,注意,包扎時力量以達到止血目的為準。包扎過程中，如發(fā)現(xiàn)傷口有骨折端外露，切忌將骨折端還納，否則可導致深層感染。腹壁傷致腸管外露時，應使用清潔的碗等物扣住外露腸管，達到保護目的，嚴禁將流出的腸管還納。,材料,三角巾等邊三角形有頂?shù)籽鼛饺墙硌辔彩饺墙砜噹в?005CM和6008CM兩種,,方法,頭部包扎有三角巾帽式包扎三角巾面具式包扎雙眼三角巾包扎頭部三角巾十字包扎,,三角巾帽式包扎,三角巾面具式包扎用于顏面外傷眼鼻處可開窗,雙眼三角帶包扎用于雙眼外傷頭部三角帶十字包扎用于下頜耳部前額顳部外傷,頸部三角帶包扎頸部包扎用于頸部外傷有三角巾包扎繃帶包扎兩種,胸肩背腋下部包扎胸部三角巾包扎用于一側胸外傷背部三角巾包扎似胸部,胸背部包扎,側胸部三角巾包扎用于單側側胸壁外傷,側胸部三角巾包扎,肩部三角巾包扎用于一側肩部外傷,腋下部三角巾包扎用于一側腋下外傷,腹部包扎用于腹部及會陰部外傷,上下肢包扎關節(jié)8字包扎,手部腳部包扎三角帶和繃帶都可用,手部三角巾包扎,固定,針對骨折防止骨折移位而損傷血管神經(jīng)并不是骨折復位,操作要點,動作要輕固定要牢松緊要適宜要有襯墊,材料,木制夾板鋼絲夾板充氣夾板負壓氣墊塑料夾板其他頸圍等各種特殊固定架就地取材,方法,頭部固定胸部固定鎖骨骨折固定肋骨骨折固定（同胸部外傷包扎）,鎖骨骨折固定,四肢骨折固定,肱骨骨折固定,肘關節(jié)固定,尺橈骨骨折固定,,指骨骨折固定,股骨骨折固定,脛腓骨骨折固定,頸椎骨折固定,胸腰椎骨折固定,骨盆骨折固定,搬運,徒手搬運器械搬運,攙扶,單人搬運背馱注呼吸困難胸外傷不適用,徒手搬運手托背扛,徒手搬運雙人搭椅注雙人協(xié)調合作步調一致,徒手搬運拉車式,,脊柱脊髓損傷搬運注防止扭曲脊柱部,就地取材,四、毒蛇咬傷,毒蛇咬傷癥狀,出血性傷口灼痛530MIN,心跳加速,血壓下降,冒冷汗,昏迷,死亡神經(jīng)性傷口發(fā)腐數(shù)小時內(nèi),起水泡,頭痛,抽筋,視力模糊,呼吸困難,死亡,毒蛇VS無毒蛇,毒蛇VS無毒蛇,毒蛇,,毒蛇咬傷緊急處理,詳記蛇的特征，如打死蛇帶上阻止毒液吸收綁扎法傷肢制動冰敷法促進蛇毒排出及破壞嘴吸允（口腔無破潰，邊吸邊漱口）切開排毒抑制蛇毒作用季德勝蛇藥片口服外用,毒蛇咬傷緊急處理,立即尋求醫(yī)療資源或撥打120,93,謝謝,

簡介：醫(yī)學病毒學,MEDICALVIROLOGY,病毒是如何發(fā)現(xiàn)的,1886年MAYER證實了煙草花葉病的傳染性1892年IWANOWASKI證實其病原是一種新的病原因子。1896年BEIGERINK給這種病原起拉丁名叫VIRUS。,,FIGLEAFOFTOBACCOANDEMOFTOBACCOMOSAICVIRUS,臨床病毒學現(xiàn)狀,發(fā)病率高，傳染性強；人類部分腫瘤與病毒感染有關；某些病毒感染有致畸作用；其他一些疾病與病毒感染的關系；目前病毒感染的診療還相對滯后，部分尚缺乏有效疫苗；,病毒的概念,病毒（VIRUS）是一類體積微小，結構簡單，僅含一種類型核酸，必須在活的敏感細胞內(nèi)才能生長繁殖的非細胞型微生物。,第二十三章病毒的基本性狀,,第一節(jié)病毒的形態(tài)第二節(jié)病毒的結構和化學組成,VIRION完整性?感染性,（一）大小測量單位為納米NM，最大的痘苗病毒為300NM，最小的脊髓灰質炎病毒為30NM準確測量方法電鏡ELECTRONMICROSCOPE,EM,,病毒體,,FIGEMOFINFLUENZAVIRUSSCALEBAR100NM,FIG1THECOMPARATIVESIZESOFREPRESENTATIVEVIRUSES,?300NM,?20NM,（二）形態(tài),（三）病毒的結構與化學組成,1基本化學組成,核酸蛋白質,2病毒的結構,裸病毒,,核心（核酸）,外披蛋白質衣殼,,包膜,核衣殼,,包膜病毒,NAKEDVIRUSES,NEUCLEOCAPSID,ENVELOPEDVIRUSES,GENERALSTRUCTUREOFAVIRION,衣殼組成殼粒CAPSOMERES,殼粒,,數(shù)目,排列,,螺旋對稱型,20面體立體對稱型,復合對稱型,衣殼分為螺旋對稱型、20面體立體對稱型等,FIGAICOSAHEDRALSYMMETRYBHELICALSYMMETRY,FIGANICOSAHEDRALVIRUS,FIGAHELICALVIRUS,FIGEMOFCOMPLEXVIRUSESPOXVIRUSSCALEBAR100NM,包膜ENVELOPE糖脂,包膜子粒PEPLOMERE或刺突SPIKE,,3病毒核酸及功能,多樣性（1）核酸種類DNA/RNA（2）形態(tài)分類線形/環(huán)形；（3）單/雙；/；節(jié)段；（4）開放讀碼框OPENREADINGFRAME,ORF間可有基因重疊。,不分節(jié)段（脊髓灰質炎病毒）RNAV分節(jié)段（RNA腫瘤病毒）SSRNA不分節(jié)段（副黏病毒）RNAVRNAV分節(jié)段（正黏病毒）DSRNA±RNAV分節(jié)段（呼腸病毒）SSDNADNAAAVDNAVDSDNA±DNAHSV,,,,,,,FIGOVERLAPPINGREADINGFRAMES,RNA病毒基因組的極性（1）RNA病毒的基因組可直接充當MRNA的稱為‘POSITIVESTRANDED’（2）由新合成的RNA充當MRNA的RNA病毒，其基因組稱為‘NEGATIVESTRANDED’,,核酸的功能,遺傳物質／復制／變異；感染性核酸；檢測的物質基礎；研究生命物質的模型；分子生物學工具；,4病毒蛋白質及功能,分類結構蛋白衣殼、基質或包膜等；非結構蛋白調節(jié)蛋白、酶類等；功能結構蛋白衣殼保護作用；抗原性；受體配體；細胞毒性；非結構蛋白復制有關酶類；致病有關酶；調節(jié)蛋白等；部分可作檢測的靶點；,第三節(jié)病毒的增殖,VIRALMULTIPLICATION,一、病毒的復制周期（VIRALREPLICATIONCYCLE）,特點復制（自我復制SELFREPLICATION）病毒的復制周期（VIRALREPLICATIONCYCLE）病毒進入敏感細胞后，以其基因組為模板，借助細胞中的原料、能量及場所合成自己的大分子（蛋白質與核酸）以組裝子代病毒顆粒，最終按一定方式釋放出細胞。分為吸附和穿入、脫殼、生物合成、組裝成熟和釋放,吸附ABSORPTION,,?（受體－配體）,穿入PENETRATION,,,,融合ENVELOPEDVIRUSES,胞飲NAKEDVIRUSES,,脫殼UNCOATING,,?酶,生物合成BIOSYNTHESIS,,合成產(chǎn)物,,合成地點,,,,裝配ASSEMBLY,,?場所,,釋放RELEASE,,裸病毒,殺細胞型,?,出芽型,?,（包膜病毒）,,FIGSCANNINGELECTRONMICROGRAPHOFVIRUSPARTICLESBUDDINGFROMTHECELLSURFACE,FIGTYPICALGROWTHCURVEOFAVIRUSCOMPAREDWITHTHATOFABACTERIUM,1吸附與穿入ABSORPTIONANDPENETRATION,吸附通過病毒的包膜或無包膜病毒表面的配體位點與細胞表面的特異受體結合而吸附，如脊髓灰質炎病毒神經(jīng)系統(tǒng)，HIV病毒GP120TH（CD4）穿入包膜病毒包膜與宿主細胞膜融合無包膜病毒胞飲方式,2脫殼UNCOATING,病毒在細胞內(nèi)脫去衣殼后，核酸才可發(fā)揮指令作用，多數(shù)是在細胞的溶酶體酶作用下脫殼釋放出病毒基因組,3生物合成BIOSYNTHESIS,通過病毒基因組表達與復制來完成的，包括蛋白質的合成與核酸的復制,此階段無完整病毒可見，也不能用血清學檢測出病毒的抗原，稱為隱蔽期發(fā)生在病毒核酸復制之前的轉錄稱為早期轉錄，產(chǎn)物為早期MRNA，翻譯出早期蛋白；發(fā)生在病毒核酸復制開始或之后的轉錄稱為晚期轉錄，產(chǎn)物為晚期MRNA，翻譯出晚期蛋白,早期蛋白EARLYPROTEIN是功能性蛋白質，為病毒核酸復制提供酶類，參與調節(jié)宿主細胞的自身代謝過程。晚期蛋白LATEPROTEIN主要是病毒的結構蛋白，與病毒的形態(tài)構成有關。,4裝配與釋放ASSEMBLYANDRELEASE,裝配部位可在核內(nèi)、胞質內(nèi)、核膜、胞質膜上無包膜病毒裝配成核衣殼即為成熟病毒體包膜病毒裝配成核衣殼后以出芽方式釋放，釋放時包有核膜或胞質膜成為成熟病毒體,二、病毒實例1,DSDNAVHSV（１）DNA半保留復制；（２）根據(jù)病毒核酸復制時點將轉錄分為早期轉錄／晚期轉錄；,FIGREPLICATIONSTRATEGYOFADENOVIRUS,ADNAVIRUS,病毒實例2,SSRNAVPOLIOVIRUS（１）本身具有MRNA功能；（２）復制中間體（REPLICATIVEINTERMEDIATE,RI）；±RNA；（３）早、晚期轉錄時相似不明顯；多聚大蛋白；,FIGREPLICATIONSTRATEGYOFPOLIO,APOSITIVESTRANDEDRNAVIRUS,病毒實例3,RETROVIRUSHIV（１）逆轉錄酶；（２）復制中間體（REPLICATIVEINTERMEDIATE,RI）；RNADNA雜交體；（３）前病毒PROVIRUS；,三、病毒的異常增殖,宿主細胞方面的原因非容納細胞NONPERMISSIVECELLS頓挫感染ABORTIVEINFECTION病毒本身的原因缺陷病毒DEFECTIVEVIRUSES輔助病毒HELPERVIRUSES缺陷干擾顆粒DEFECTIVEINTERFERINGPARTICLE，DIP,四、病毒的干擾現(xiàn)象,當兩種病毒同時感染同一細胞時，可發(fā)生一種病毒的增殖抑制另一種病毒增殖的現(xiàn)象INTERFERENCE；機制可能為受體的占據(jù)或細胞代謝途徑改變；干擾素（INTERFERON產(chǎn)生,,,第四節(jié)理化因素對病毒的影響,滅活（INACTIVATION）失去感染性；但仍可保留其抗原性、紅細胞吸附等生物學功能；物理因素TMPH射線；化學因素脂溶劑；化學消毒劑；抗生素等；,病毒的遺傳和變異,1．病毒變異的類型遺傳型變異非遺傳型變異,,2病毒變異的機制,（１）遺傳型變異基因突變（GENEMUTATION）突變株（MUTANT）,,表現(xiàn)為宿主范圍、組織親嗜性、抗原成分、耐藥性、毒力等性狀改變；,Ⅰ自發(fā)突變SPONTANEOUSMUTATIONRNAV﹥DNAVⅡ誘發(fā)突變INDUCEDMUTATION理化方法；,條件致死性突變?nèi)鏣S突變株；高溫下TS變異株基因編碼的蛋白或酶失去功能；宿主范圍突變株HOSTRANGEMUTANT,HR改變了對細胞的吸附或相互作用街病毒→固定病毒；,耐藥突變株DRUGRESISTANTMUTANT病毒靶酶基因發(fā)生改變→耐藥；HIV→AZT變異株；基因重組GENETICRECOMBINATION形成兼有兩親代病毒特性的子代病毒；,基因重配GENETICREASSORTMENT,通過交換RNA節(jié)段而進行的重組；,,（2）非遺傳型變異（基因產(chǎn)物的相互作用）Ⅰ互補作用；Ⅱ表型混合；,,第五節(jié)病毒的分類,分類原則1核酸類型與結構2病毒體的形狀和大小3病毒體的形態(tài)結構4對脂溶劑的敏感性現(xiàn)一般分為DNA病毒、RNA病毒、逆轉錄病毒三類。,其他,非尋常病毒1衛(wèi)星病毒SATELLITES基因組為5002000個核苷酸的單鏈RNA2類病毒VIROIDS基因組為200400個單鏈環(huán)狀RNA，有二級結構，不含蛋白質。3朊粒PRIONPROTEINACEOUSINFECTIONPARTICLES，蛋白侵染顆粒生物學地位待定。結構僅由一種耐蛋白酶K的蛋白分子組成。,