簡介：目的分析慢性丙型肝炎病毒（HCV）感染者血清中自身抗體陽性率及其臨床意義。方法選擇2010年10月2012年10月在新疆醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院門診及病區(qū)就診的119例慢性HCV感染者為研究組，另選擇40例同時期在我院進行健康體檢并排除病毒感染及自身免疫性疾病的健康體檢者為對照組，進行抗核抗體（ANA）、抗可提取性核抗原（ENA）抗體、類風濕因子（RF）檢測，比較兩組自身抗體的陽性率，并探討自身抗體與年齡、性別、民族、肝功能指標及病毒復制的關(guān)系。結(jié)果慢性HCV感染者中有64例檢測出至少1項自身抗體，陽性率538％，健康對照者中有3例檢測出至少1項自身抗體，陽性率75，兩組檢出率相比差別有統(tǒng)計學意義（P＜005）。HCVRNA陽性組中自身抗體檢出率為646，HCVRNA陰性組檢出率為407，兩組檢出率相比差別有統(tǒng)計學意義（P＜005）。自身抗體檢出率與性別、民族無關(guān)（P＞005），與年齡有關(guān)（P＜005）。自身抗體陽性組ALT、AST、TBIL均高于陰性組，兩組相比差別有統(tǒng)計學意義（P＜005）。結(jié)論HCV感染能誘導自身免疫反應，使患者出現(xiàn)多種自身抗體，自身抗體的檢出率與年齡關(guān)系密切且與病毒的復制有關(guān)，自身免疫可能是HCV感染后組織損傷的重要因素。HCV感染者有必要作自身抗體檢測。

簡介：目的本研究擬用化學交聯(lián)方法構(gòu)建一種人人抗體嵌合物作為抗甲型肝炎病毒HEPATITISAVIRUS，HAVIGM抗體檢測質(zhì)控品，并探討其在臨床應用價值。方法一、嵌合抗體的構(gòu)建通過酶聯(lián)免疫吸附試驗篩選出抗HAVIGG陽性效價高的血清抗HIV1、HBSAG陰性，抗HEV、抗HCV、梅毒抗體陰性，再以蛋白A柱純化出含高滴度抗HAVIGG的人總IGG，以分子篩色譜純化出健康人IGM抗體。選擇1乙基33二甲基氨基丙基碳二亞胺作為化學交聯(lián)劑將兩者交聯(lián)，得到的嵌合人人IGG、IGM抗體既能和甲型肝炎病毒抗原HEPATITISAVIRUSANTIGEN，HAVAG特異性結(jié)合，又能與檢測體系中的抗Μ鏈抗體特異結(jié)合。根據(jù)嵌合抗體的抗HAVIGM活性來確定交聯(lián)反應的最佳反應條件，并對該嵌合抗體的干擾反應、交叉反應進行研究，同時以衛(wèi)生部臨床檢驗中心的抗HAVIGM質(zhì)控品作為對照研究該嵌合抗體的適用性。二、嵌合抗體作為質(zhì)控物穩(wěn)定性及通用性研究對本嵌合抗體的穩(wěn)定性進行研究，對不同稀釋保存液包括BSA、組氨酸、山梨醇等添加劑組分及濃度進行篩選，尋找使嵌合抗體穩(wěn)定保存的條件。穩(wěn)定性的保存條件將上述11000倍稀釋后及未稀釋的嵌合抗體質(zhì)控物置于4℃、20℃、室溫、37℃、及70℃室溫反復凍融3次的條件下保存不同時間觀察其穩(wěn)定性。分別采用萬泰、新創(chuàng)及雅培商品試劑盒對本嵌合抗體進行檢測，考察其通用性。結(jié)果一、嵌合抗體的構(gòu)建本研究的最佳交聯(lián)反應條件為IGG與IGM質(zhì)量比515MGIGG1MGIGM，每MGIGM反應體系中加入10MG交聯(lián)劑，室溫反應6～18H。交聯(lián)后得到了穩(wěn)定的嵌合抗體產(chǎn)物，且抗HAVIGM檢測滴度達到120000。將該產(chǎn)物11000倍稀釋后，檢測值仍與衛(wèi)生部臨床檢驗中心發(fā)放的抗HAVIGM質(zhì)控品相當，能夠作為抗HAVIGM檢測的陽性質(zhì)控。干擾實驗結(jié)果表明，作為反應物的IGG、IGM及交聯(lián)劑不影響嵌合抗體的陽性檢測結(jié)果，且該嵌合抗體在抗HBCIGM、抗HEVIGM檢測中不存在交叉反應。二、嵌合抗體質(zhì)控物穩(wěn)定性研究及通用性研究本嵌合抗體在4℃條件下能穩(wěn)定保存至少3個月，經(jīng)過稀釋保存液即含1％BSA、10MMOLL組氨酸的PBS溶液1000倍稀釋后，于4℃及20℃條件下可以穩(wěn)定保存至少4個月。本嵌合抗體采用以上3個廠家的商品試劑盒均能檢出陽性結(jié)果，具有一定的通用性。結(jié)論通過化學交聯(lián)的方法成功構(gòu)建了人人嵌合抗體作為抗HAVIGM檢測質(zhì)控物。該質(zhì)控品具有良好的穩(wěn)定性和通用性。根據(jù)已經(jīng)建立的方法，可以構(gòu)建一系列用于其他病毒特異IGM抗體酶聯(lián)免疫檢測的質(zhì)控品。

簡介：病毒性心肌炎VIRALMYOCARDITIS，VMC是一類臨床上常見的心血管系統(tǒng)疾病，主要由柯薩奇病毒B3型CVB3感染造成，目前已成為青少年心源性猝死的主要原因。VMC發(fā)病具有較明顯的性別差異，其中男性好發(fā)、病情嚴重，目前導致該發(fā)病的性別差異機制尚不明確。在本研究中，我們首先探討了CVB3感染雌雄小鼠病毒性心肌炎的發(fā)病情況，結(jié)果顯示雄性小鼠心肌組織出現(xiàn)彌漫性炎癥和壞死灶，心肌損傷血清學指標顯著上升，心肌炎發(fā)病率及死亡率均顯著高于雌性，提示雌雄小鼠對于CVB3誘導的心肌炎呈現(xiàn)不同敏感性。為了探討該心肌炎差異性誘導的機制，我們分析了CVB3感染小鼠脾臟T細胞亞群TH1、TH2、TH17、TREG標志性細胞因子IFNΓ、IL4、IL17、FOXP3的表達情況，發(fā)現(xiàn)在雌雄小鼠間IL17的表達差異最為顯著P＜005。同時流式結(jié)果顯示，雄性脾臟TH17CD4IL17百分比為234％，顯著高于雌性的092％，上調(diào)約255倍，且該上調(diào)效應存在明顯的病毒劑量依賴性。進一步分析脾臟TH17比例改變與病毒性心肌炎疾病進程、嚴重程度間的相關(guān)性后發(fā)現(xiàn)，雄性小鼠脾臟TH17于病毒感染后第5天即出現(xiàn)明顯上調(diào)趨勢，至感染第7天其比例達到高峰約25％，顯著高于感染前的05％P＜005。該動態(tài)變化曲線與病毒性心肌炎的疾病進程高度一致，且與心肌炎嚴重程度指標體重減輕率、心肌病理評分呈現(xiàn)正相關(guān)，其中與心肌病理評分的R2值高達078。上述結(jié)果充分說明，對病毒性心肌炎敏感性不同的雌雄小鼠差異性誘導了TH17細胞，并且后者在病毒性心肌炎發(fā)病過程中扮演了重要角色。隨后，我們分析了心肌炎小鼠脾臟局部參與TH17分化發(fā)育的重要細胞因子如TGFΒ、IL6、IL21、IL22以及轉(zhuǎn)錄因子RΓT和RΑ的表達情況。結(jié)果顯示正常雌雄小鼠上述分子表達未見差異，而在CVB3感染7天后，雄性小鼠脾臟IL6、IL21、IL22、RΓT和RΑ等表達較雌性顯著上調(diào)，提示雄性脾臟免疫微環(huán)境更易誘導TH17細胞產(chǎn)生。那么，心肌炎中TH17性別差異性誘導分化是否由性激素不同而導致呢我們向感染雄小鼠體內(nèi)注射雌激素，發(fā)現(xiàn)其脾臟TH17比例下調(diào)約33倍，同時心肌炎癥浸潤和壞死明顯減少，生存率大幅上升30％VS80％，提示雌激素可通過下調(diào)TH17進而保護心肌炎。而當向雌小鼠注射雄激素后，并未見到TH17比例的顯著改變，同時心肌病理改變及生存率也無明顯變化，提示雄激素可能未參與TH17細胞的分化發(fā)育。本研究不僅有助于解析病毒性心肌炎發(fā)病的性別差異機制，了解TH17在病毒性心肌炎發(fā)病中的重要作用并認識其差異性誘導的免疫學機制，同時也為闡明性激素在誘導TH17分化發(fā)育中的差異性作用提供了一定基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

簡介：8、9歲的小學兒童，是心理發(fā)展中的一個重要轉(zhuǎn)折時期，他們進入學校后，學習活動就逐漸取代游戲活動成為兒童主要的活動形式，并對兒童的心理產(chǎn)生重大的影響。而注意力是他們有效學習的重要基礎(chǔ)。兒童注意力的發(fā)展主要與兩個方面有關(guān)一是兒童本身心理發(fā)展的成熟。二是環(huán)境與教育的作用。隨著社會的發(fā)展和教育的普及使大眾對小學兒童教育越來越重視，有意識的對兒童進行注意力提升訓練正逐漸成為家長與老師的關(guān)注重點，有針對性的注意力提升訓練應運而生，本研究主要從腦電生物反饋訓練和認知行為團體訓練兩個方面出發(fā)，并結(jié)合兩種訓練模式對被試兒童進行注意力訓練，考察三類注意力訓練模式的可行性以及有效性。實驗被試為湖南省婁底市40名小學三年級兒童，年齡在9歲左右，隨機分為四組，每組10名。實驗組一進行腦電生物反饋訓練，實驗組二進行認知行為團體訓練，實驗組三進行腦電生物反饋和認知行為團體的綜合訓練，對照組不做訓練。訓練時間為8周，每周2次，共16次。結(jié)果如下1、結(jié)果顯示通過腦電生理測量儀測量出來的注意力指數(shù)與通過中小學生注意力測驗量表測出來注意力分數(shù)之間存在明顯的相關(guān)，表明這兩類指標的吻合度高，都能有效檢測被試的注意力水平，因此具有良好的信度和效度。2、腦電生物反饋訓練和認知行為團體訓練對注意力都有提高，但是各自提高的側(cè)重點不同。通過腦電生物反饋訓練，被試兒童大腦的自我調(diào)節(jié)功能得到顯著提高。通過認知行為團體訓練，兒童注意指標顯著提高。對照組的被試兒童，注意力三項指標都沒有提高。3、綜合訓練的效果和單一訓練方式差異顯著，綜合訓練要優(yōu)于單一訓練，說明從不同的方面進行訓練，彌補相互的不足之處，相輔相成，能取得更好的效果。4、實驗結(jié)果表明，小學三年級兒童的注意力是可訓練的。兩種訓練方式都顯著提高了注意力測驗分數(shù)，進一步說明了注意力和大腦控制能力之間的密切關(guān)系。

簡介：華中科技大學博士學位論文電視觀看與受眾認知培養(yǎng)關(guān)于涵化研究的后設(shè)分析（19962008）姓名周莉申請學位級別博士專業(yè)新聞學指導教師石長順20090519II華中科中科技大學博士學位論大學博士學位論文在涵化關(guān)系的調(diào)節(jié)因素上，傳統(tǒng)的和新加入的控制變量共同影響著當代電視涵化關(guān)系；在涵化機制的控制方式上，當代電視涵化的主流化特征在共時性維度和歷時性維度上都是存在的，當代電視涵化對受眾認知的控制方式就是跨群體、跨時間的整合受眾認知。最后，在后設(shè)分析得出的結(jié)論基礎(chǔ)上，本研究建構(gòu)了當代電視涵化模式，并進一步挖掘了當代電視涵化的意識形態(tài)內(nèi)涵。本研究的電視涵化模式引入了多種影響因素，呈現(xiàn)了各種因素與電視涵化之間的動態(tài)關(guān)系，在因素構(gòu)成和關(guān)系建構(gòu)上都超越了以往的涵化模式。此外，本研究還從權(quán)力宰制、符號選擇和認知整合三個方面對當代電視涵化的意識形態(tài)功能進行了考察。本研究的不足和下一步研究的計劃也在結(jié)尾處加以討論。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞電視觀看認知培養(yǎng)涵化后設(shè)分析

簡介：喉癌1ARYNGEALCARCINOMA，LC死亡率以中國為最高。人乳頭瘤病毒HUMANPAPILLOMAVIMSHPV與喉癌的關(guān)系，一直是病因?qū)W研究的熱點。自首次從喉癌中發(fā)現(xiàn)HPV以來，人們進行了廣泛深入的研究，并取得了一些共識，但不可否認的是陽性檢出率相差很大3～100％不等。本課題設(shè)計了多對引物進行聚合酶鏈反應POLYMERASECHAINREACTION，PCR，同時進行DNA測序，并利用原位雜交INSITUHYBRIDIZATION，ISH方法，對北京地區(qū)的123例喉癌組織進行檢測，從多方面印證HPV的感染率及闡明引起以往文獻報道陽性率差異的原因。研究結(jié)果表明1用PCR檢出HPVL1引物GP5／GP6、一16E6、一16E7、18E6、一18E7、一31E7、33E7、45E7和52E7的陽性率分別為7642％、5447％、5854％、4228％、4878％、1057％、813％、732％和1220％。2DNA測序的結(jié)果為HPV6型、一N型、一26型、一54型、58型、73型和84型的陽性率分別為¨38％、1220％、244％、488％、325％、L63％和325％。3ISH檢出HPV16E6的陽性率為4634％，HPV18E6的陽性率為3577％。HPVL1的高檢出率及HPVE6、E7基因常伴隨檢出且檢出率較高，提示可能在腫瘤細胞中通用型引物GP5／GP6可作為檢測HPV的指標；HPVE6、E7常在整合中保留。HPV16型可能與喉癌發(fā)生密切相關(guān)。對“正常人”的喉粘膜上皮進行研究，以探討HPV與喉病變過程的關(guān)系。對北京地區(qū)123例“正常人的喉粘膜樣品進行HPV感染的檢測。PCR和DNA測序結(jié)果表明低危型HPV的陽性率與喉癌相近；高危型HPV的陽性率雖遠遠低于喉癌，但隨著組織病變程度加重從正常喉上皮一輕度不典型增生一重度不典型增生一癌前病變陽性率逐漸升高；HPV16E6、E7的檢出率非常接近；HPVU的陽性率高于HPV16E6、E7，隨著組織病變程度加重，HPVL1的檢出率逐漸增高。ISH結(jié)果表明HPV一16E6和一18E6的表達率為1382％和N38％。HPV16E6和18E6的表達率隨著組織病變的加重顯著升高。此外，HPV18E6的檢出率與E7相同，而且大多數(shù)HPV18陽性的標本同時HPV16陽性。對上述結(jié)果用SPSS100軟件進行CASECONTR01X2分析，HPV16感染會增加喉上皮病變的風險508，而同時感染HPV18時，喉上皮病變的風險進一步增加890。通過本研究得出的結(jié)論是HPV16感染是北京地區(qū)喉癌的重要發(fā)病因素；HPV一16感染后E6／E7片段的保留并持續(xù)表達與喉組織的癌變進程密切相關(guān)；HPV16感染會增加喉上皮病變的風險，而HPV18有協(xié)同作用；U片段適合用于檢測HPV感染。

簡介：最近幾十年來由于全球人口數(shù)量和流動性持續(xù)增加登革熱在全球的流行范圍不斷擴大并已成為目前世界上分布最廣、發(fā)病最多的蟲媒病毒病對人類健康造成嚴重的威脅。由于缺乏疫苗登革熱的防治一直是世界性難題。除了媒介控制外感染者的及時發(fā)現(xiàn)、隔離以及治療是目前預防登革熱進一步擴散的重要手段因此早期診斷對于登革熱的預防控制至關(guān)重要。登革熱的早期診斷一直是登革熱防治研究領(lǐng)域的熱點相關(guān)的實驗診斷技術(shù)也在不斷發(fā)展包括病毒核酸檢測、抗原抗體檢測在內(nèi)的多種實驗診斷技術(shù)已被應用于常規(guī)的實驗檢測工作。目前國外已經(jīng)有多家試劑公司研制成功并推出了包括酶聯(lián)免疫吸附法ELISA、膠體金免疫層析法ICT等在內(nèi)的商品化病毒抗體檢測試劑盒此類試劑盒具有快速、操作簡便等特點為大多數(shù)實驗室特別是基層實驗室所采用。近年來國內(nèi)雖然也有不少研究機構(gòu)開展登革病毒抗體檢測試劑盒的研制并有相關(guān)研制的報道但其實際應用一直沒有取得突破試劑的國產(chǎn)化一直是國內(nèi)登革熱防控工作的短板。本課題以登革2型病毒外膜蛋白ENVELOPEE為研究對象在其編碼基因的DIII區(qū)上下游各設(shè)計8條引物分別引入NDEI和XHOI兩個酶切位點交叉配對共擴增出64條DIII區(qū)基因片段利用PET30A表達系統(tǒng)在大腸桿菌BL21DE3中分別克隆和表達經(jīng)SDSPAGE和WESTERNBLOT驗證其表達含量及重組蛋白的免疫反應性篩選表達量大且有較強免疫反應性的重組蛋白抗原進行純化并建立間接ELISA法用以檢測登革熱IGM抗體為國產(chǎn)試劑提供候選抗原和方法。為評價實驗建立的ELISA法檢測效果我們以PANBIO公司生產(chǎn)的登革熱IGM檢測試劑盒作為對照選取112份臨床血清標本進行了初步的試劑評估。檢測結(jié)果表明以IFA檢測結(jié)果為金標準本研究ELISA法檢測IGM的靈敏度為9464％特異度為9107與PANBIO公司生產(chǎn)試劑盒相比本研究建立的ELISA法檢測登革病毒IGM抗體的檢測陽性符合率為9285陰性符合率為8929總符合率為9107KAPPA值為08214提示兩檢測方法具有較高的一致性且兩種檢測方法差異無統(tǒng)計學意義Χ203P005。提示本研究所建立的方法具有較好的應用前景。

簡介：Y30112單位代碼L壁壘塹學號2壁Q塑2I西南蟲學碩士學位論文35～55歲兒童心理理論與時序認知能力關(guān)系的實驗研究論文作者黃彥萍指導教師李紅學科專業(yè)發(fā)展與教育心理學研究方向認知發(fā)展提交論文日期’2006年4月論文答辯日期2006年6月學位授予單位疆南大學中國重慶2006年6月序，這實際上是一種動作推理。2、45歲以后兒童的心理理論開始發(fā)展起來，到了55歲兒童的心理理論水平日趨成熟。所不同的是，在本研究中側(cè)重了從時間因素的角度，考察了心理理論任務問題的不同含義，具體包括了兒童對自己過去心理狀態(tài)的認識、兒童對他人將米心理狀態(tài)的認識、兒童對他人現(xiàn)在心理狀態(tài)的認識。發(fā)現(xiàn)兒童認識這三者之間的順序為對自己過去心理狀態(tài)的認識對他人現(xiàn)在心理狀態(tài)的認識對他人將來心理狀態(tài)的認識。3、時序認知能力與兒童對他人將來心理狀態(tài)理解能力有顯著相關(guān)，但與兒童對自己過去心理狀態(tài)理解能力沒有顯著性的相關(guān)。這說明區(qū)分自己和他人心理狀態(tài)能力的發(fā)展和錯誤信念能力的發(fā)展可能是兒童心理理論發(fā)展的前后兩個階段。4、兒童的心理理論與時序認知有一定的相關(guān)，但是排除年齡的影響，兩者相關(guān)不顯著。在排除了年齡影響后，心理任務排序和預測問題之間仍然有顯著的相關(guān)。影響兒童心理理論水平的是兒童對任務本身所含時序的理解程度，應該對時序進行更準確的定義兒童對心理理論任務本身所含時序的認知。5、兒童在知否問題上的得分明顯高于他們在預測問題上的得分，兩者差異顯著。知否問題任務本身沒有包含地點或內(nèi)容的轉(zhuǎn)化，而預測任務涉及到了一個信息轉(zhuǎn)換的問題在3～4歲這個年齡階段，兒童還不能很好地對信息進行轉(zhuǎn)換。說明心理理論任務本身的時序問題更能影響兒童在心理理論任務中的表現(xiàn)。關(guān)鍵詞時序認知心理理論兒童

簡介：目的本文主要研究嬰幼兒人巨細胞病毒HCMV臨床分離株包膜糖蛋白HGH的基因多態(tài)性分析該基因不同型別在HCMV感染引起的不同疾病中的分布情況及其與不同疾病之間的關(guān)系為進一步了解HCMV致病機理及亞單位疫苗研究提供參考。方法1、HCMV臨床分離株的分離培養(yǎng)取患兒尿液標本接種于人胚肺細胞孵育812小時后換液連續(xù)培養(yǎng)至細胞發(fā)生病變CPE再取上清液接種于新鮮人胚肺成纖維細胞培養(yǎng)至CPE達80％90病變時收集和保存。2、GH基因分型應用巢式PCR擴增HCMV臨床分離株和AD169株GH基因核苷酸純化試劑盒純化PCR產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶HHAI酶切酶切片段經(jīng)12聚丙烯酰胺凝膠電泳銀染顯色比對分型。3、GH基因序列多態(tài)性分析將部分PCR擴增陽性的產(chǎn)物純化后測序與AD169株、TOWNE株序列進行比對用DNASIS軟件分析。結(jié)果1、HCMV臨床分離株的分離培養(yǎng)共選擇105例樣本進行分離最終CPE陽性病毒株50株分離成功率為476。2、GH基因分型經(jīng)巢式PCR擴增50例臨床分離株中有34例14例為嬰兒肝炎綜合征12例為無黃疸型肝炎5例為肺炎1例為先天性CMV感染GH基因陽性陽性率為68分型顯示GH1型21株占618GH2型13株占382未見混合型和發(fā)現(xiàn)新的型別GH基因型別在不同疾病間呈散在分布X20336P005。3、GH基因序列多態(tài)性分析隨機挑選15株GH基因陽性標本測序分型并與AD169和TOWNE株序列比對GH1型有10株GH2型有5株其結(jié)果與酶切分型結(jié)果完全符合。其中所選的第2、4、5、6、7、9、10、11臨床株堿基序列相同編碼的氨基酸也相同同源性為100與AD169株核苷酸相似性、氨基酸一致性分別為972、9552同源性較高第8、12、14臨床株堿基序列、氨基酸相同相互間同源性也高達100與TOWNE株核苷酸相似性為9953氨基酸一致性為9552。GH序列變異以核苷酸替換為主也可見插入和缺失突變與AD169株相比核苷酸相似性為891～972氨基酸一致性為7424～9552與TOWNE株相比核苷酸相似性為9112～9953氨基酸一致性為8006～985。DNA變異位點分布比較散在氨基酸變異相對集中與AD169相比氨基酸變異集中在41～87位點與TOWNE株比對則集中于33～74位點。結(jié)論1、嬰幼兒HCMV臨床分離株GH基因型別以GH1為主GH基因型別在嬰兒肝炎綜合征、無黃疸型肝炎、肺炎疾病中的分布未見明顯差異。2、不同HCMV臨床分離株GH基因相對保守但仍存在一定的多態(tài)性。3、未發(fā)現(xiàn)HCMVGH基因多態(tài)性與不同臨床疾病的關(guān)聯(lián)性。

簡介：背景肝移植術(shù)后膽道并發(fā)癥發(fā)生率高，是影響患者長期存活及導致移植物丟失的最主要原因之一，因此肝移植后膽道并發(fā)癥的防治是進一步提高移植受體存活率和遠期療效的關(guān)鍵。移植肝膽管缺血再灌注損傷是肝移植術(shù)后膽道并發(fā)癥的重要病因?qū)W因素，肝臟缺血再灌注損傷是早期多種炎性因子激活的結(jié)果。NFΚB作為一種普遍存在的轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)節(jié)炎癥反應的基因中起關(guān)鍵作用。研究肝膽管缺血再灌注損傷過程中NFΚB的作用，并以其為靶點的干預措施有可能對移植肝膽管缺血再灌注損傷具有保護作用。本研究擬觀察腺相關(guān)病毒攜帶NFΚB超抑制物IΚBΑMRAAVIΚBΑM對肝移植膽道缺血再灌注損傷的保護作用。第一部分大鼠自體原位肝移植膽道缺血再灌注損傷模型的建立及肝臟再灌注損傷中NFΚB激活的研究目的建立穩(wěn)定的大鼠自體原位肝移植膽道缺血再灌注損傷模型，觀察建立模型手術(shù)并發(fā)癥、存活率及肝臟缺血再灌注損傷中NFΚB的激活。方法門靜脈和腹主動脈雙重灌注法建立大鼠自體原位肝移植膽道缺血再灌注損傷模型，將WEISTAR大鼠隨機分成兩組肝移植膽道缺血再灌注損傷手術(shù)組LTIRIGROUP行大鼠原位肝移植膽道缺血再灌注損傷；假手術(shù)組SHAMGROUP，SHGROUP僅行開腹和肝門區(qū)解剖手術(shù)；分別于術(shù)后12H，24H72H，7D取肝組織行NFΚB免疫組化檢測，取外周血檢測肝臟酶學指標。結(jié)果共進行大鼠自體原位肝移植膽道缺血再灌注損傷模型80例，其中穩(wěn)定模型60例，穩(wěn)定模型期手術(shù)存活率約90％，一周存活率約為817％。免疫組化顯示術(shù)后2HLTIRI組NFBΚ激活細胞明顯多于SH組；而其肝功能損傷指標外周血ALT在各時點IXIRI組均較SH組亦明顯增加，兩組比較具有明顯差異，以術(shù)后24H最為顯著4172±453VS576±54。結(jié)論成功建立大鼠自體原位肝移植膽道缺血再灌注損傷模型，無肝期約14±3MIN。肝移植缺血再灌注過程中早期即有NFΚB的激活。第二部分IΚBΑM基因重組腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建及鑒定目的構(gòu)建攜帶NFΚB超抑制物IΚBΑM基因的重組腺病毒載體。方法應用BAMHI和XHOII內(nèi)切酶雙酶切PAAVMCS質(zhì)粒和PCDNA30IΚBΑM，經(jīng)過膠回收和純化后，在T4連接酶作用下，構(gòu)建PAAVMCSIΚBΑM，酶切和測序鑒定，293細胞病毒包裝，重組腺病毒載體大量擴增，病毒滴度的測定及濃縮純化。結(jié)果經(jīng)雙酶切和連接成重組質(zhì)粒PAAVMCSIΚBΑM，雙酶切PAAVMCSIΚBΑM得到大小分別為64KB和970BP的載體和目的基因片段；經(jīng)PCR鑒定得到大小為970BP的IΚBΑM片段；測序鑒定正確；經(jīng)測定分離濃縮和純化重組腺相關(guān)病毒獲得病毒滴度約為7108PFUML～5109PFUML。結(jié)論成功構(gòu)建IΚBΑM基因重組腺相關(guān)病毒載體，病毒濃縮純化滴度滿足實驗要求。第三部分RAAVIΚBΑM對大鼠自體原位肝移植膽道缺血再灌注損傷的保護作用目的觀察RAAVIΚBΑM轉(zhuǎn)染肝臟術(shù)后肝內(nèi)NFΚB及其下游炎性分子的表達，膽管內(nèi)皮細胞的凋亡和電鏡形態(tài)學變化情況，探討RAAVIΚBΑM在大鼠肝移植膽道缺血再灌注損傷中的作用。方法將WEISTAR大鼠分為三組假手術(shù)組單純行開關(guān)腹手術(shù)，對照組行肝移植膽道缺血再灌注損傷手術(shù)，RAAVIΚBΑM轉(zhuǎn)染組術(shù)前兩天行RAAVIΚBΑM轉(zhuǎn)染。分別于術(shù)后2H，24H，72H，7D取材。常規(guī)HE染色觀察肝外膽管和肝組織學變化，用WESTERNBLOT檢測NFΚBP65的表達，RTPCR測定肝組織中TNFΑ、ICAM1MRNA的表達，免疫組化檢測TNFΑ、ICAM1的表達，ELESA檢測血清TNFΑ的水平，各時點肝臟酶學的變化及膽管內(nèi)皮細胞的凋亡和電鏡形態(tài)學變化。結(jié)果RAAVIΚBΑM轉(zhuǎn)染組與對照組相比NFΚBP65于術(shù)后2H、24H表達具有顯著性差異，核內(nèi)蛋白水平明顯降低，72H后各時點NFΚBP65核內(nèi)蛋白差異不明顯；術(shù)后2H、24HTNFΑ及ICAM1MRNA的表達水平具有顯著性差異；免疫組化示TNFΑ、ICAM1于移植后24H、72H的表達具有顯著性差異；術(shù)后24H血清TNFΑ具有顯著性差異；肝臟酶學指標ALT、GGT在各時點具有顯著性差異，尤其在術(shù)后24H，72H最為顯著；術(shù)后2H、24H、72H膽管內(nèi)皮細胞的凋亡明顯減少；術(shù)后24H電鏡下膽管內(nèi)皮細胞的損傷明顯減輕。各移植組與假手術(shù)組差異顯著。結(jié)論IΚBΑM通過抑制NFΚB核移位抑制其激活及抑制其下游基因的表達，從而減輕大鼠肝移植膽管缺血再灌注損傷。

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簡介：中圖分類號B849UDC1OO訶{L￡解■刪擘I砷密級學校代碼碩士學位論文學歷應用心理碩士公開100948～11歲兒童無意視盲的認知機制研究THECOGNITIVEMECHANISMOFINATTENTIONALBLINDNESSIN8。TO11一YEAR0LDCHILDREN研究生姓名王佳慧指導教師學科專業(yè)研究方向論文開題日期陳洪震副教授應用心理注意與記憶2016年3月10日H事尤乒巳0●摘要無意視盲是指當注意集中于一個具體的任務時，即使某個刺激十分明顯，人們也往往不能注意到這個非期望刺激的現(xiàn)象。研究者們對影響無意視盲現(xiàn)象產(chǎn)生的因素探討已久，但對于兒童無意視盲機制的研究甚少，且系統(tǒng)性不高。鑒于注意對兒童和青少年認知功能發(fā)展的重要影響，本研究從發(fā)展性的角度探索無意視盲現(xiàn)象的年齡發(fā)展進程，并試圖探討產(chǎn)生這種發(fā)展差異的原因。實驗一使用經(jīng)典靜態(tài)無意視盲范式，探究無意視盲現(xiàn)象在年齡發(fā)展上的差異。隨機選取某小學8～11歲的兒童120名，采用單因素被試問實驗設(shè)計，結(jié)果顯示，無意視盲現(xiàn)象的發(fā)生率隨年齡的增加而減少，與年齡較大的兒童相比，8歲到9歲的兒童對非期望刺激的覺察率顯著低于10歲和1L歲兒童。實驗二和實驗三在實驗一的基礎(chǔ)上，分別從注意資源有限的兩個角度來探索出現(xiàn)此年齡差異的相關(guān)原因。兩個實驗的被試與實驗一相同，自變量都為年齡和任務類型。研究結(jié)果與以往研究一致，反應時績效都隨年齡的增長而增長，兩種注意行為都顯著增強的關(guān)鍵年齡區(qū)間在9歲到10歲之間。實驗二考察注意資源總量在年齡發(fā)展上的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，任務類型與年齡因素的交互作用不顯著，說明注意資源總量的絕對有限性對轉(zhuǎn)折點前后兩個年齡階段的兒童影響一致。實驗三考察抑制控制能力在年齡發(fā)展上的差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同的任務類型與年齡因素的交互作用顯著，說明10歲和1L歲的兒童與8歲和9歲兒童相比，其抑制控制能力發(fā)展水平有了較明顯的提高。綜上，本研究發(fā)現(xiàn)年齡發(fā)展與無意視盲的發(fā)上存在密切關(guān)系，8歲和9歲的兒童比10歲和1L歲的兒童更容易發(fā)生無意視盲現(xiàn)象。而對于兒童無意視盲現(xiàn)象產(chǎn)生這種年齡差異的原因，我們認為主要是由于兒童抑制控制能力發(fā)生變化。關(guān)鍵詞無意視盲年齡發(fā)展抑制控制能力注意資源總量

簡介：本課題組一直致力于研究反式作用HDV核酶對于乙型肝炎病毒（HEPATITISBVIRUS，HBV）表達的工作，研究證實了HDV核酶作為HBV反義抑制劑的可行性，目前所需解決的是如何構(gòu)建高效、安全、且具有靶向性的轉(zhuǎn)移載體攜帶反式HDV核酶進入肝細胞內(nèi)發(fā)揮作用，更接近于臨床治療途徑。攜帶外源性治療基因的轉(zhuǎn)運載體是基因治療的一個中心環(huán)節(jié)，決定著外源性治療基因是否能夠成功轉(zhuǎn)運至靶細胞內(nèi)，也影響著外源性治療基因能否在細胞內(nèi)高效的表達。腺相關(guān)病毒（ADENOASSOCIATEDVIRUS，AAV）屬于微小病毒科，依賴病毒屬。AAV是一種可感染人類和一些其他靈長類動物的的小病毒。目前AAV不導致任何已知的疾病，因此這種病毒只引起非常輕微的免疫反應。AAV即可感染分裂期細胞也可感染非分裂期細胞，并可將其基因組整合入宿主細胞基因組中位于人19號染色體的特異位點（AAVS1）中。制備AAV基因治療載體是需要剔除AAV基因組中的REP和CAP區(qū)域，并將所需外源基因和能夠啟動其轉(zhuǎn)錄的啟動子插入到兩端的反向重復序列（INVERTEDTERMINALREPEATS，ITR）之間，有助于單鏈DNA的載體轉(zhuǎn)染的宿主細胞的DNA聚合酶作用下形成雙鏈DNA時在宿主細胞核內(nèi)形成多聯(lián)體結(jié)構(gòu)。腺相關(guān)病毒為基礎(chǔ)的基因治療載體在宿主細胞中主要以多聯(lián)體形式存在與宿主細胞核中。腺相關(guān)病毒還具有非常低的免疫原性，似乎僅限于新一代的中和抗體，但它們誘導沒有明確界定的細胞毒性反應。這些特點使得AAV成為備受矚目的基因治療潛在病毒載體。HBV侵入肝細胞的機制是研究熱點之一。自發(fā)現(xiàn)HBVPRES2多肽與聚合白蛋白的結(jié)合活性只限于人和黑猩猩的聚合白蛋白而證實肝細胞存在白蛋白受體以來，便認為HBV系借這種白蛋白受體同肝臟結(jié)合即侵入肝細胞。這種由HBV被膜抗原蛋白HBVDNAPRES2所編碼的聚合人血清白蛋白的受體（POLYMERIZEDHUMANSERUMALBUMINRECEPT，PHSAR），又稱HBV聚合白蛋白受體（HBVPAR）很可能具有HBV種特異性與臟器特異性，因而在HBV侵入肝細胞機制中起有基因的表達；探討重組腺相關(guān)病毒的靶向性改造以及重組后腺相關(guān)病毒的包裝制備方法。研究方法重組有HDV核酶的腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建利用DNA重組技術(shù)將本課題組前期設(shè)計合成的反式作用HDV片段及其啟動子U6一同構(gòu)建入腺相關(guān)病毒載體PSNAV中，并在此載體中摻入EGFP熒光標記蛋白基因。2、重組有HDV核酶的腺相關(guān)病毒載體抑制HBV基因表達用陽離子脂質(zhì)體法將帶有綠色熒光蛋白標簽的重組HDV核酶的腺相關(guān)病毒載體轉(zhuǎn)染入表達HBV的肝癌細胞HEPG2215中，用ELISA方法檢測其S抗原和E抗原的表達抑制作用。3、重組有HDV核酶的腺相關(guān)病毒載體系統(tǒng)的構(gòu)建利用DNA重組技術(shù)將反式作用HDV片段及其啟動子U6一同構(gòu)建入腺相關(guān)病毒載體PAAVIRESHRGFP中。將肝細胞靶向性序列PRES2構(gòu)建入表達AAV殼體蛋白的控制質(zhì)粒PAAVRC中，并將AAV殼體蛋白中的感染相關(guān)R585、R588位點通過突變的方式封閉。4、重組腺相關(guān)病毒的包裝將構(gòu)建好的帶有HDV核酶的結(jié)構(gòu)質(zhì)粒和靶向性改造后的控制質(zhì)粒及輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T包裝細胞，反復凍融方法收獲重組腺相關(guān)病毒顆粒。然后感染肝癌細胞HEPG2，檢測包裝效率。研究結(jié)果1、經(jīng)酶切鑒定和PCR鑒定，構(gòu)建了分別含有針對HBV基因組C區(qū)和PRES2區(qū)的反式作用HDV核酶的重組腺相關(guān)病毒載體PSNAVCMVEGFPCU6和PSNAVCMVEGFPPRES2U6。2、利用陽離子脂質(zhì)體法將PSNAVCMVEGFPCU6和PSNAVCMVEGFPPRES2U6質(zhì)粒轉(zhuǎn)染表達HBV的HEPG2215細胞，并用ELISA方法檢測到其對HBV表達的抑制作用。PSNAVCMVEGFPPRES2U6對HBEAG和HBSAG的抑制率約為2953％和25％，PSNAVCMVEGFPCU6對HBEAG和HBSAG的抑制效果約為635％和5007％，3、經(jīng)酶切鑒定和PCR鑒定，構(gòu)建了重組入反式作用HDV核酶的PAAVIRESHRGFPU6CRZ和PAAVIRESHRGFPU6S2RZ結(jié)構(gòu)質(zhì)粒和重組入肝細胞靶向序列PRES2和AAV殼體蛋白靶向相關(guān)序列突變的控制質(zhì)粒PAAVRCPRES2CAPA、PAAVRCCAPPRES2B、PAAVRCA585588。4、利用鈣磷沉淀法和陽離子脂質(zhì)體法將PAAVIRESHRGFPU6CRZ和PAAVIRESHRGFPU6S2RZ結(jié)構(gòu)質(zhì)粒和PAAVRCPRES2CAPA、PAAVRCCAPPRES2B、PAAVRCA585588控制質(zhì)粒及輔助質(zhì)粒PHELPER共轉(zhuǎn)染包裝細胞293T，收集包裝出的重組腺相關(guān)病毒顆粒。5、經(jīng)倒置熒光顯微鏡觀察，重組的腺相關(guān)病毒顆?？筛腥靖伟┘毎?，但其感染效率偏低。結(jié)論本實驗構(gòu)建了重組HDV核酶的腺相關(guān)病毒載體，在細胞水平上驗證了腺相關(guān)病毒載體轉(zhuǎn)運的反式作用HDV核酶可抑制HBV基因的表達。同時改造了AAV的殼體蛋白，使其帶有靶向肝細胞的PRES2序列，并通過基因突變封閉了其原有的感染相關(guān)位點，采用無輔助病毒的方法包裝出了重組腺相關(guān)病毒顆粒，為進一步研究重組了靶向HBV基因組特定區(qū)域反式作用HDV核酶的重組腺相關(guān)病毒顆粒特異性感染肝細胞的研究建立基礎(chǔ)。

簡介：蘇州大學博士學位論文腺病毒介導的雙基因（ANTIVEGF發(fā)夾狀核酶IL24）治療結(jié)腸癌的實驗研究姓名常樹建申請學位級別博士專業(yè)內(nèi)科學（消化內(nèi)科）指導教師陳衛(wèi)昌20090501腺病毒介導的雙基因ANTIVEGF發(fā)夾狀核酶IL24治療結(jié)腸癌的實驗研究中文摘要及ELISA檢測其對VEGFMRNA及蛋白表達的抑制作用，MTT法和流式細胞儀檢測ADRZ／Ⅱ，24對HT29細胞生長抑制和凋亡誘導作用。在BALB／C裸鼠皮下建立HT29細胞動物移植瘤模型，觀察ADRZ／IL24基因治療對結(jié)腸癌移植瘤生長的抑制作用，免疫組化法檢測白細胞介素。24、生長抑制和DNA損傷基因GADD及VEGF在移植瘤組織中的表達，CD34標記檢測移植瘤組織微血管密度MVD。結(jié)果成功將抗VEGF發(fā)夾狀核酶和白細胞介素24克隆至同一復制缺陷型腺病毒載體上。實驗所構(gòu)建復制缺陷型腺病毒ADRZ／IL24可以有效感染結(jié)腸癌HT29細胞，ADRZ／IL24感染HT29細胞后抗VEGF發(fā)夾狀核酶和白細胞介素24可在HT29細胞中高效表達。ADRZ／IL24能顯著抑制HT29細胞VEGF的表達，ADRZ／IL24、ADRZ、ADIL24感染48小時后HT29細胞中VEGFMRNA的相對表達量分別為PBS組的3901O％，45010％和91O10％，與PBS比較P005。ADRZ／IL24誘導的HT29細胞凋亡率為1100080％，大約為ADIL24所誘導凋亡的兩倍ADIL24凋亡率560土0271％，PO05。使用免疫組化方法在ADRZ／IL24及ADIL24處理組移植瘤中均檢測到了白細胞介素24及GADD的表達，ADRZ／IL24可以顯著抑制移植瘤組織中VEGF的表達及微血管密度MVD，各組MVD分別為PBS128111，ADGFP11510，ADIL一246010，ADRZ43O5，ADRZ／IL243506PO05。結(jié)論腺病毒載體介導的雙基因ANTIVEGF核酶和IL24ADRZ／IL24可顯著降低結(jié)腸癌HT29細胞中VEGF的表達和抑制HT29細胞的生長，可顯著減少移植瘤組織玨

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