簡(jiǎn)介：目的評(píng)價(jià)血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST與血小板PTL比值A(chǔ)PRI在判斷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶及天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶AST及ALT均在正常檢測(cè)范圍上限40UL2倍以下的慢性乙型肝炎病毒HBV感染患者肝臟纖維化程度中的作用發(fā)現(xiàn)潛在抗病毒對(duì)象并指導(dǎo)臨床抗病毒治療。方法選擇20102011年在安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染病科住院行肝組織病理學(xué)檢查的349例臨床診斷慢性HBV感染患者且肝臟穿刺檢查前一周內(nèi)行肝功能檢查丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶均小于2倍正常檢測(cè)范圍上限值即小于80UL。完善常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查如血常規(guī)、乙肝五項(xiàng)定量雅培、乙肝病毒定量檢測(cè)等和肝臟活組織檢查計(jì)算出APRI比較不同的肝臟纖維化程度與APRI指數(shù)的關(guān)系。應(yīng)用受試者工作特征ROC曲線評(píng)價(jià)APRI模型在評(píng)估肝臟纖維化程度中的臨床診斷及應(yīng)用價(jià)值采用SPEARMAN等級(jí)相關(guān)分析判斷APRI與肝臟纖維化病理分期的相關(guān)性。研究結(jié)果1符合標(biāo)準(zhǔn)的慢性乙性肝炎病毒感者349例HBVDNA陽(yáng)性297例占851％血清HBEAG陽(yáng)性196例占562。根據(jù)肝纖維化分期S0期21例S1期123例S2期96例S3期58例S4期51例。以S2以上為顯著肝纖維化。當(dāng)APRI≥0273時(shí)患者有顯著肝纖維化ROC曲線下面積為0641靈敏度為483特異度為757陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為739P00001APRI≥0311時(shí)患者為肝硬化ROC曲線下面積為0771靈敏度為686特異度為768陰性預(yù)測(cè)值為935P00001。2在HBVDNA為1103～1105拷貝ML組中APRI≥0179為明顯肝纖維化最優(yōu)截點(diǎn)APRI≥0283為肝硬化最優(yōu)截點(diǎn)在HBVDNA為1106～1108拷貝ML組中APRI≥0275為明顯肝纖維化最優(yōu)截點(diǎn)APRI≥0326為肝硬化最優(yōu)截點(diǎn)。3HBEAG陽(yáng)性的慢性乙型肝炎病毒感染的病例中APRI≥0283為明顯肝纖維化最優(yōu)截點(diǎn)APRI≥0287為肝硬化最優(yōu)截點(diǎn)HBEAG陰性的慢性乙性肝炎病毒感染的病例中APRI≥0179為明顯肝纖維化最優(yōu)截點(diǎn)APRI≥0349為肝硬化最優(yōu)截點(diǎn)4在297例HBVDNA陽(yáng)性病例中APRI≥0273為明顯肝纖維化最優(yōu)截點(diǎn)APRI≥0311為肝硬化最優(yōu)截點(diǎn)在52例HBVDNA陰性病例中APRI≥0153為明顯肝纖維化最優(yōu)截點(diǎn)APRI≥0258為肝硬化最優(yōu)截點(diǎn)。5SPEARMAN相關(guān)分析顯示APRI與肝纖維化分期呈顯著正相關(guān)性R0370P結(jié)論APRI可用于丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶及天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶均在正常值上限2倍以下的慢性HBV感染患者肝纖維化程度的判斷APRI≥0273時(shí)為有明顯肝纖維化纖維化病理分級(jí)在S2及以上739符合病理分級(jí)對(duì)臨床選擇抗病毒治療的時(shí)機(jī)具有一定指導(dǎo)意義。若APRI指數(shù)不超過(guò)0311則935的轉(zhuǎn)氨酶正常值上限2倍以下的慢性乙性肝炎病毒感染者可排除已進(jìn)展為肝炎肝硬化。根據(jù)HBVDNA水平不同制定相應(yīng)的APRI指數(shù)評(píng)價(jià)肝纖維化程度可提高臨床應(yīng)用價(jià)值。

簡(jiǎn)介：【目的】研究人乳頭瘤病毒（HPV）相關(guān)疾病中HPV亞型分布，HPV16的E2、E6、E7基因突變和E6、E7抗原表達(dá)，及其與疾病臨床特征間的相關(guān)性?！痉椒ā?、標(biāo)本收集收集廈門(mén)大學(xué)附屬中山醫(yī)院病理科20072013年HPV相關(guān)疾病的庫(kù)存石蠟包埋組織共91例，包括31例尖銳濕疣（CA）、11例2級(jí)宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN2）、23例3級(jí)宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN3）、3例鮑溫樣丘疹病（BP）、9例鮑溫?。˙D）和14例派吉特?。≒D）。2、從福爾馬林固定石蠟包埋組織中提取HPV基因組DNA，用PCR膜雜交法檢測(cè)HPVDNA并做HPV分型。3、應(yīng)用DNA測(cè)序法測(cè)定HPV16的E2、E6和E7基因序列，并應(yīng)用BLAST軟件將測(cè)序結(jié)果與基因庫(kù)中野生型HPV16序列（GENEBANKNC001526）比對(duì)，以分析HPV16的E2、E6和E7基因突變。4、應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)HPV16的E6和E7抗原表達(dá)。5、分析HPV相關(guān)疾病中HPV亞型分布、HPV16的E2、E6和E7基因突變、HPV16的E6和E7抗原表達(dá)與疾病臨床特征（性別、年齡、部位、組織病理特征等）間相關(guān)性。6、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析HPVDNA檢出率差異比較采用X2檢驗(yàn)，設(shè)P【結(jié)果】1、HPV分型91例標(biāo)本中檢出10個(gè)HPV亞型，其中1431例CA（452％）、511例CIN2（455）、1423例CIN3（609）和19例BD（111）中檢出HRHPVDNA，331例CA（97）、211例CIN2（182）、823例CIN3（348）和19例BD（111）中檢出HPV16DNA，但14例PD和3例BP中未檢出HPVDNA，所有標(biāo)本中都未檢出HPV18DNA。男性CA患者檢出HPV均為L(zhǎng)RHPV，但女性CA患者檢出LRHPV和HRHPV混合感染。女性CA患者HRHPV檢出部位主要為宮頸，且年齡50歲組HRHPV檢出率高于年齡2、HPV16的E2、E6和E7基因突變1例CA和1例CIN3中檢出HPV16的E2基因置換突變，2例CIN3中檢出HPV16的E2、E6和E7基因置換突變。HPV16的E2基因中共檢出10個(gè)堿基置換突變G2827A（ASP→ASN）、C3158A（THR→LYS）、G3248A（ARG→GLN）、T3383C（ILE→THR）、C3409T（PRO→SER）、G3448A（GLU→LYS）、C3683A（THR→LYS）和C3786A（ASP→GLN）為錯(cuò)義突變；HPV16E6基因中共檢出5個(gè)堿基置換突變，其中G94A置換突變位于起始密碼子之前導(dǎo)致一個(gè)調(diào)控氨基酸改變，G132T（ARG→ILE）、T178A（ASP→GLU）、T178G（ASP→GLU）和C278G（PRO→ALA）為錯(cuò)義突變，T178A（ASP→GLU）和T178G（ASP→GLU）突變后編碼的氨基酸相同；HPV16的E7基因中共檢出4個(gè)堿基置換突變，其中A647G（ASN→SER）為錯(cuò)義突變。3、HPV16的E6和E7抗原表達(dá)14例HPV16DNA陽(yáng)性標(biāo)本中1例BD、1例CA、1例CIN2和3例CIN3呈HPV16E6抗原陽(yáng)性，1例BD和3例CIN3呈HPV16E7抗原陽(yáng)性?！窘Y(jié)論】1、女性CA中存在LRHPV和HRHPV混合感染，HRHPV檢出部位主要為宮頸。2、CIN中檢出的HRHPV主要為HPV16。3、發(fā)現(xiàn)CA中存在HPV16E2基因突變。4、HPV16E2、E6和E7基因置換突變可能與CA、CIN2和CIN3的發(fā)生和進(jìn)展有關(guān)。5、HPV16E7抗原只在癌前病變或原位癌中檢出，因此可能作為疾病惡性指標(biāo)之一。6、PD可能與所檢測(cè)HPV亞型無(wú)關(guān)。

簡(jiǎn)介：研究生姓名研究生姓名徐妍遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文中圖法分類號(hào)100104學(xué)校代碼10661學(xué)號(hào)2011059密級(jí)碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文（學(xué)術(shù)型學(xué)位）EB病毒陽(yáng)性的彌漫性大病毒陽(yáng)性的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞淋巴瘤臨床病理學(xué)研究臨床病理學(xué)研究（ACLINICOPATHOLOGICALSTUDYOFEBVPOSITIVEDIFFUSELARGEBCELLLYMPHOMA）姓名名徐妍專業(yè)業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)病理學(xué)與病理生理學(xué)研究方向研究方向淋巴造血組織腫瘤淋巴造血組織腫瘤導(dǎo)師師徐鋼教授教授培養(yǎng)單位培養(yǎng)單位遵義醫(yī)學(xué)院遵義醫(yī)學(xué)院2014年5月研究生姓名研究生姓名徐妍遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文目錄1論文EB病毒陽(yáng)性的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤臨床病理學(xué)研究1中英縮略詞對(duì)照表1中文摘要2英文摘要5前言8材料和方法9結(jié)果17討論37結(jié)論43參考文獻(xiàn)452綜述503致謝664作者簡(jiǎn)介67基金課題編號(hào)四川省衛(wèi)生廳科研基金資助項(xiàng)目（編號(hào)100510）

簡(jiǎn)介：目的了解輪狀病毒感染膽管上皮細(xì)胞對(duì)HMGB1MRNA表達(dá)及蛋白釋放的影響。方法1體外培養(yǎng)小鼠膽管上皮細(xì)胞，設(shè)立對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組接種輪狀病毒，對(duì)照組接種等量病毒培養(yǎng)液，24小時(shí)后免疫組化分析HMGB1表達(dá)。2體外培養(yǎng)小鼠膽管上皮細(xì)胞，設(shè)對(duì)照組、病毒組、SIRNA組，分別于12H、24H、36H、48H收集細(xì)胞和培養(yǎng)上清，RTPCR及ELISA分別檢測(cè)膽管上皮細(xì)胞HMGB1MRNA表達(dá)及培養(yǎng)上清蛋白表達(dá)。結(jié)果1HMGB1存在于正常膽管上皮細(xì)胞的胞核。2病毒感染后胞核HMGB1含量較正常明顯下降。312H、24H膽管上皮細(xì)胞HMGB1MRNA表達(dá)病毒組表達(dá)較對(duì)照組升高（P436H、48H細(xì)胞培養(yǎng)上清HMGB1濃度病毒組HMGB1蛋白濃度較對(duì)照組顯著升高（P結(jié)論1輪狀病毒感染能引起膽管上皮細(xì)胞HMGB1MRNA表達(dá)上調(diào)及胞外HMGB1蛋白濃度升高。2SIRNA干擾能有效抑制病毒感染引起的胞外HMGB1蛋白水平。

簡(jiǎn)介：目的觀察依托咪酯持續(xù)輸注在腹腔鏡膽囊切除術(shù)中的應(yīng)用及其對(duì)患者術(shù)后認(rèn)知功能的影響。方法139例行擇期行腹腔鏡膽囊切除術(shù)LAPAROSCOPICCHOLECYSTECTOMYLC患者ASAⅠⅡ級(jí)年齡2280歲排除術(shù)前有認(rèn)知功能障礙手術(shù)相關(guān)病史神經(jīng)、精神系統(tǒng)疾病史或者服用相應(yīng)藥物史聽(tīng)力和語(yǔ)言障礙顱腦疾患病史術(shù)后送入重癥監(jiān)護(hù)病房INTENSIVECAREUNITICU者患者拒絕或家屬不配合做調(diào)查者。記錄術(shù)前指標(biāo)年齡、性別、民族、體重、文化程度、ASA分級(jí)家庭住址和聯(lián)系電話。術(shù)前均常規(guī)準(zhǔn)備麻醉維持隨機(jī)分為兩組依托咪酯組E組N68異丙酚組P組N71。記錄指標(biāo)入室時(shí)T0、誘導(dǎo)前T1、插管后T2、手術(shù)開(kāi)始T3、手術(shù)5MINT4、手術(shù)10MINT5、手術(shù)30MINT6以及手術(shù)結(jié)束時(shí)T7各時(shí)間點(diǎn)平均動(dòng)脈壓MAP、心率HR、脈搏血氧飽和度SPO2、呼吸末二氧化碳分壓PETCO2、麻醉時(shí)間、手術(shù)時(shí)間、術(shù)中出血量、液體輸入量、術(shù)后睜眼時(shí)間以及拔管時(shí)間。認(rèn)知功能評(píng)估通過(guò)簡(jiǎn)易精神狀態(tài)量表MINIMENTALSTATEEXAMINATIONMMSE評(píng)分總分為30分術(shù)后評(píng)分與術(shù)前評(píng)分比較若下降2分或2分以上判斷為認(rèn)知功能障礙檢測(cè)并記錄所有患者在術(shù)前1D、術(shù)后第1D、第3D、第7D測(cè)定患者的定向力、注意和計(jì)算力、識(shí)記能力、語(yǔ)言能力、回憶能力的評(píng)分。結(jié)果共有139例完成隨訪。1兩組患者術(shù)后第1D均有POCD發(fā)生其中依托咪酯組7例104％異丙酚組8例105兩組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P005術(shù)后第3D依托咪酯組6例89異丙酚組5例65兩組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P005術(shù)后第7D依托咪酯組發(fā)生1例14異丙酚組無(wú)發(fā)生兩組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P005。兩組術(shù)后1周累計(jì)發(fā)生率依托咪酯組12例179丙泊酚組11例154兩組總發(fā)生率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P005。2影響因素分層分析顯示異丙酚組年齡P0298、性別P0083、民族P0169、文化程度P0556、麻醉時(shí)間P0412、手術(shù)時(shí)間P0506無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P005。依托咪酯E組年齡P0347、性別P1000、民族P1000、麻醉時(shí)間P0410、手術(shù)時(shí)間P0110無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P005依托咪酯組文化程度P0021是影響早期POCD發(fā)生的危險(xiǎn)因素。結(jié)論1、依托咪酯持續(xù)輸注用于腹腔鏡膽囊切除術(shù)麻醉維持與異丙酚具有相同的效果均能保證術(shù)中患者生命體征各項(xiàng)指標(biāo)平穩(wěn)順利完成手術(shù)。2、依托咪酯用于短小手術(shù)麻醉維持不會(huì)增加患者POCD的發(fā)生率。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R71密級(jí)公開(kāi)UDC碩士學(xué)位論文攜帶CRTHPV18E2基因的腺病毒包裝及其在宮頸癌CASKI細(xì)胞中的表達(dá)學(xué)位申請(qǐng)人羅飛學(xué)科專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師李志英主任醫(yī)師柳長(zhǎng)柏教授二○一二年五月三峽大學(xué)碩士學(xué)位論文三峽大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果，除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體均已在文中以明確方式標(biāo)明，本人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期三峽大學(xué)研究生知識(shí)產(chǎn)權(quán)承諾書(shū)本人承認(rèn)我作為三峽大學(xué)碩士研究生在校學(xué)習(xí)期間，在導(dǎo)師指導(dǎo)下，依據(jù)研究工作所作學(xué)位論文的知識(shí)產(chǎn)權(quán)全部權(quán)歸三峽大學(xué)所有。本人承諾我有義務(wù)維護(hù)三峽大學(xué)的知識(shí)產(chǎn)權(quán)，凡是以我本人學(xué)位論文內(nèi)的全部或部分研究成果，或?qū)嶒?yàn)數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)所形成的研究論文及成果，無(wú)論是以何種形式刊發(fā)學(xué)術(shù)論文、進(jìn)行成果鑒定或申報(bào)獎(jiǎng)勵(lì)，均以三峽大學(xué)為第一作者單位或完成單位，并事先征得導(dǎo)師或?qū)W校相關(guān)部門(mén)的同意。我愿承擔(dān)因違背上述承諾而引起的一切法津和經(jīng)濟(jì)后果。學(xué)位論文作者簽名日期I

簡(jiǎn)介：獲得性免疫缺陷綜合征（ACQUIREDIMMUNODEFICIENCYSYNDROME，AIDS）已成為嚴(yán)重危害人類健康的傳染病之一。目前，高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（HIGHLYACTIVEANTIRETROVIRALTHERAPYHAART）雖然能大大降低AIDS的發(fā)病率和死亡率，有效抑制患者體內(nèi)病毒復(fù)制，卻不能徹底清除細(xì)胞內(nèi)特別是潛伏感染儲(chǔ)存庫(kù)中的人免疫缺陷病毒1型（HUMANIMMUNODEFICIENCYVIRUS1，HIV1）。HIV1潛伏感染已成為治愈AIDS的巨大障礙。載脂蛋白BMRNA編輯酶催化多肽家族（APOLIPOPROTEINBMRNAEDITINGENZYMECATALYTICPOLYPEPTIDE，APOBEC）的發(fā)現(xiàn)，使得人們對(duì)于固有免疫系統(tǒng)抑制HIV1的重要作用有了新的認(rèn)識(shí)。APOBEC家族包括11個(gè)成員，分別是APOBEC1、APOBEC2、APOBEC3AH、APOBEC4以及活化誘導(dǎo)脫氨基酶（ACTIVATIONINDUCEDDEAMINASE，AID。多數(shù)家族成員能夠在DNA或RNA水平上突變病毒，從而抑制多種逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制，例如HIV1、鼠白血病病毒、馬傳染性貧血病毒，其中APOBEC3G（A3G）和APOBEC3FA3F的抗HIV1作用最受關(guān)注。靜止初始CD4T細(xì)胞是HIV1潛伏感染的主要儲(chǔ)存庫(kù)。研究發(fā)現(xiàn)，雖然A3GF能夠抑制靜止初始CD4＋T淋巴細(xì)胞中HIV1的復(fù)制，但這種天然屏障似乎不夠強(qiáng)大。HIV1病毒感染因子（VIRIONINFECTIVITYFACT，VIF可以通過(guò)蛋白酶降解途徑阻止A3GF整合入病毒顆粒，從而拮抗其抗病毒作用。較前研究顯示增加細(xì)胞內(nèi)A3GF的表達(dá)量可以有效抑制VIF的拮抗。KEYANGCHEN等發(fā)現(xiàn)IFNΑ通過(guò)經(jīng)典的JAKSTAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路增強(qiáng)人初始CD4T細(xì)胞中A3G的表達(dá)量。家族另一成員A3F，被認(rèn)為在組織分布和氨基酸序列上與A3G最接近，而且A3F較A3G具有更強(qiáng)地抑制HIV1整合和前病毒形成的能力。但I(xiàn)FNΑ是否介導(dǎo)人初始CD4T細(xì)胞中A3F表達(dá)及相關(guān)機(jī)制，至今未有研究。因此，本課題觀察了IFNΑ對(duì)初始CD4T細(xì)胞A3F轉(zhuǎn)錄活性、蛋白表達(dá)的影響，并初步探討其機(jī)制，為利用A3F清除潛伏庫(kù)中HIV1提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下1、免疫磁珠法分離出人初始CD4T淋巴細(xì)胞，用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（QUANTITATIVEREVERSETRANIONPOLYMERASECHAINREACTION，QRTPCR）檢測(cè)IFNΑ（1000UL）刺激不同時(shí)間后，人初始CD4T淋巴細(xì)胞內(nèi)A3F轉(zhuǎn)錄水平的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)刺激3H、5H、7H的轉(zhuǎn)錄水平顯著高于0H（P2、WESTERNBLOT法檢測(cè)IFNΑ刺激（1000UL）對(duì)人初始CD4T淋巴細(xì)胞A3F蛋白表達(dá)的影響。發(fā)現(xiàn)IFNΑ可以上調(diào)人初始CD4T細(xì)胞中A3F蛋白的表達(dá)。3、用5′CDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（5′RAPIDAMPLIFICATIONOFCDNAENDS，5RACE）確認(rèn)A3F轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)。結(jié)果顯示可能的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)位（TRANIONALSTARTSITES，TSS于GENBANK公布的A3FCDNA起始位置上游13個(gè)核苷酸（NUCLEOTIDE，NT）處。4、選擇人基因組DNA為模板，采用高保真TAQ酶行PCR法，擴(kuò)增出大小1485BP的A3F啟動(dòng)子，相對(duì)TSS位置為147213BP。5、構(gòu)建含A3F啟動(dòng)子的PGL3A3FPROM重組質(zhì)粒，并以此重組質(zhì)粒為模板，采用以PCR為基礎(chǔ)的定點(diǎn)突變技術(shù)，擴(kuò)增出突變重組質(zhì)粒（GTTTCACTTCTT突變成ATCGATCGATCG）。6、用PGL3A3FPROM重組質(zhì)粒、突變質(zhì)粒以及PGL3BASIC質(zhì)粒（陰性對(duì)照組）轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，采用雙熒光素酶基因報(bào)告系統(tǒng)觀察IFNΑ對(duì)A3F啟動(dòng)子活性的影響。發(fā)現(xiàn)IFNΑ能夠增強(qiáng)A3F啟動(dòng)子活性（P綜上所述，通過(guò)本研究證實(shí)IFNΑ能夠上調(diào)人初始CD4T細(xì)胞中A3F表達(dá)，并且初步認(rèn)為是通過(guò)作用于A3F啟動(dòng)子干擾素刺激應(yīng)答元件（IFNSTIMULATEDRESPONSEELEMENT，ISRE）來(lái)實(shí)現(xiàn)的，為深層次研究信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制打下基礎(chǔ)，并為利用A3F抑制潛伏庫(kù)中HIV1復(fù)制提供新的方法和思路，為IFNΑ聯(lián)合HAART治療提供理論依據(jù)。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多老年人失眠與輕度認(rèn)知功能障礙的臨床研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多認(rèn)知與情緒相互作用的神經(jīng)與免疫學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多蟲(chóng)草治肝片治療慢性乙型病毒性肝炎(毒熱未清,氣陰兩虛證)的臨床研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：IL33INTELEUKIN33IL33作為IL1家族的一員與其特異性受體ST2結(jié)合參與固有免疫和獲得性免疫。IL33主要通過(guò)促進(jìn)TH2細(xì)胞免疫反應(yīng)在自身免疫疾病、變態(tài)反應(yīng)性疾病、心血管疾病和神經(jīng)退行性疾病等的發(fā)生發(fā)展中起重要的作用。慢性阻塞性肺疾病CHRONICOBSTRUCTIVEPULMONARYDISEASESCOPD是一組以肺實(shí)質(zhì)與小氣道受到病理?yè)p害后導(dǎo)致慢性不可逆性氣道阻塞、呼氣阻力增加、肺功能不全為共同特點(diǎn)的肺疾病的總稱。吸煙是COPD發(fā)病的重要因素。為了研究IL33下調(diào)對(duì)相關(guān)炎癥反應(yīng)的影響本研究應(yīng)用RNA干擾技術(shù)RNAINTERFERENCERNAI特異性下調(diào)小鼠IL33MRNA和蛋白的表達(dá)探討IL33下調(diào)在吸煙誘導(dǎo)的小鼠急性肺炎模型中的作用。研究?jī)?nèi)容如下一、根據(jù)GENBANK中小鼠IL33MRNA序列AY905582按照RNA干擾序列設(shè)計(jì)原則運(yùn)用GEN公司的SIRNADESIGNCENTERSIRNATARGETFINDER設(shè)計(jì)針對(duì)小鼠IL33的小干擾RNASMALLINTEFERENCERNASIRNA同時(shí)加入酶切位點(diǎn)XHOI和MLUI由上海生工生物工程有限公司合成編碼SIRNA序列的DNA單鏈。二、運(yùn)用基因克隆技術(shù)將化學(xué)合成的靶向小鼠IL33基因的短發(fā)卡RNASMALLHAIRPINRNASHRNA與逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PRNATINH14RETRO連接。經(jīng)測(cè)序鑒定重組載體中插入的SHRNA序列和設(shè)計(jì)序列一致證明我們成功構(gòu)建了小鼠IL33RNAI逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。空逆轉(zhuǎn)錄病毒載體作為陰性對(duì)照經(jīng)脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE2000轉(zhuǎn)染病毒包裝細(xì)胞PT67并以潮霉素BHYGROMYCINB篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系收集、保存病毒上清。三、收集的病毒上清經(jīng)尾靜脈注射作用于實(shí)驗(yàn)小鼠。應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)REVERSETRANIONPOLYMERASECHAINREACTIONRTPCR檢測(cè)IL33MRNAMESSENGERRNAMRNA在肺組織的表達(dá)應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)IMMUNOHISTOCHEMISTRYIHC檢測(cè)IL33蛋白的表達(dá)。RTPCR和免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示我們構(gòu)建的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PRNATINH14IL33A和33B均可有效沉默小鼠肺組織中IL33MRNA和蛋白的表達(dá)并且RTPCR結(jié)果顯示PRNATINH14IL33A的沉默效果更為顯著為以后研究IL33在相關(guān)疾病中的作用提供了可行方法。HE染色結(jié)果顯示IL33干擾處理組的小鼠肺組織炎癥病理改變有所減輕為研究IL33在COPD中的作用提供了有用的實(shí)驗(yàn)證據(jù)?？傊诒狙芯恐形覀兂晒?gòu)建了針對(duì)小鼠IL33的RNAI逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染病毒包裝細(xì)胞PT67并篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)設(shè)計(jì)的SHRNA具有明顯的沉默效果并對(duì)小鼠肺部炎癥有一定的治療作用為IL33的理論基礎(chǔ)和臨床應(yīng)用的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：背景與目的乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球性的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問(wèn)題，是嚴(yán)重危害人類健康的重要傳染病之一。依托國(guó)家“十一五”傳染病重大專項(xiàng)，進(jìn)一步完善中國(guó)HBV耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)，從平臺(tái)對(duì)中國(guó)慢性乙型肝炎乙肝及乙肝后肝硬化患者核苷（酸）類藥物治療耐藥情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)和分析。研究方法第一部分采用網(wǎng)絡(luò)信息與生物信息技術(shù)，建立并初步完善中國(guó)乙肝病毒（HBV）耐藥網(wǎng)絡(luò)監(jiān)測(cè)平臺(tái)，分析當(dāng)前HBV逆轉(zhuǎn)錄酶RT區(qū)耐藥相關(guān)基因突變的特點(diǎn)及耐藥現(xiàn)狀。第二部分抽提HBV感染者外周血血清HBVDNA，PCR分三段擴(kuò)增HBVRT區(qū)后構(gòu)建片段化DNA文庫(kù)，分別采用454和SANGER測(cè)序法測(cè)定DNA序列。對(duì)結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行處理后利用生物信息學(xué)軟件進(jìn)行比較分析。主要結(jié)果第一部分建立了目前國(guó)內(nèi)覆蓋面最廣的大型HBV基因多功能共享數(shù)據(jù)庫(kù)。截止2012年12月份為止，已對(duì)9998例乙肝患者進(jìn)行了基因耐藥檢測(cè)，其中基因型明確的患者有7551例，B基因型為2421例，占3206％（24217551），C基因型為5088例，占6738（50887551），D基因型患者為42例，占056（427551）。在檢測(cè)到原發(fā)性耐藥相關(guān)位點(diǎn)突變及代償性突變5207例52297551，6896）患者中，C基因型占3700例（370050887272），B基因型占1482例（14822421，6121），C基因型的構(gòu)成比明顯高于B基因型P結(jié)論為實(shí)現(xiàn)對(duì)乙肝患者耐藥數(shù)據(jù)的實(shí)時(shí)監(jiān)控、共享和標(biāo)準(zhǔn)化，本研究建立了我國(guó)HBV耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)平臺(tái)。目前國(guó)內(nèi)HBV基因突變及其導(dǎo)致的核苷（酸）藥耐藥現(xiàn)狀值得關(guān)注。在耐藥相關(guān)變異的檢測(cè)方法上，超深度測(cè)序較SANGER測(cè)序具有更好的敏感性，適用于低豐度病毒變異的檢測(cè)及準(zhǔn)種的分析。

簡(jiǎn)介：目的通過(guò)構(gòu)建雙質(zhì)粒表達(dá)系統(tǒng)和單質(zhì)粒表達(dá)系統(tǒng)兩種原核表達(dá)系統(tǒng)，并通過(guò)應(yīng)用19MER莖環(huán)結(jié)構(gòu)的C變異體和在目的序列中增加包裝位點(diǎn)的數(shù)量，探討構(gòu)建內(nèi)含大片段嵌合體RNA的耐核糖核酸酶RIBONUCLEASE，RNASE病毒樣顆粒VIRUSLIKEPARTICLES，VLPS的可能性。方法雙質(zhì)粒系統(tǒng)表達(dá)內(nèi)含長(zhǎng)片段嵌合體RNA的耐核糖核酸酶的VLPS首先設(shè)計(jì)含BAMHI和HINDIII酶切位點(diǎn)的引物，擴(kuò)增MS2噬菌體的編碼成熟酶蛋白和衣殼蛋白的1，700BP序列，BAMHI和HINDIII酶切后，與用同樣酶切的表達(dá)載體PET28B相連接，得到重組載體PETMC。應(yīng)用重疊延伸PCR技術(shù)擴(kuò)增3種病毒的6段嵌合體序列，在設(shè)計(jì)引物時(shí)，使嵌合體兩端含有FSEI和PACI酶切位點(diǎn)，F(xiàn)SEI和PACI酶切后，與用同樣酶切的表達(dá)載體PACYCDUET1相連接，得到重組載體PACYC3V。將雙質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化入表達(dá)菌株BL21DE3，通過(guò)誘導(dǎo)進(jìn)行表達(dá)，將表達(dá)后的VLPS純化。應(yīng)用RTPCR驗(yàn)證VLPS是否包裝了全長(zhǎng)的RNA片段。然后進(jìn)行VLPS的穩(wěn)定性試驗(yàn)和應(yīng)用HCVRNA國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品定值含有嵌合體RNA的VLPS。單質(zhì)粒系統(tǒng)表達(dá)耐RNASE內(nèi)含長(zhǎng)片段嵌合體RNA的VLPS擴(kuò)增MS2噬菌體的編碼成熟酶蛋白和衣殼蛋白的1，700BP序列，并將原來(lái)的19MER的包裝位點(diǎn)序列改變?yōu)镃變異體，酶切后，與用同樣酶切的表達(dá)載體PET28B相連接，得到重組載體PETMS2C。應(yīng)用重疊PCR擴(kuò)增3種病毒的5段嵌合體序列3VFIVE，包括3段SARSCOV基因、一段HCV基因和一段H5N1基因，并在SABSCOV3和HCV序列之間插入一個(gè)19MER的變異體包裝位點(diǎn)序列，在設(shè)計(jì)引物時(shí)，使嵌合體兩端含有NOTI酶切位點(diǎn)，與NOTI酶切的重組載體PETMS2C相連接，構(gòu)建得到表達(dá)載體PETMS23V。同時(shí)構(gòu)建三種對(duì)照組表達(dá)載體NP3VPETP、NP3VPETC和P3VPETP。通過(guò)誘導(dǎo)進(jìn)行表達(dá)。最后分別測(cè)定NP3VPETP、NP3VPETC、P3VPETP和PETMS23V4種表達(dá)產(chǎn)物的260NM吸光度值A(chǔ)260，根據(jù)公式LA2600125MGML計(jì)算4種表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)效率。結(jié)果雙質(zhì)粒系統(tǒng)表達(dá)內(nèi)含長(zhǎng)片段嵌合體RNA的耐RNASE的VLPS成功構(gòu)建了兩種原核表達(dá)載體PETMC和PACYC3V。經(jīng)原核表達(dá)后得到含全長(zhǎng)為2248NT的三種病毒6段嵌合體RNA的VLPS所包裝的RNA具有耐RNASE和脫氧核糖核酸酶DEOXYRIBONULCEASE，DNASE消化的特性以及良好的不同溫度條件下的穩(wěn)定性。VLPS五個(gè)濃度106、105、104、103和102COPIESML與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的溯源定值結(jié)果分別是1354107IUML、5740105IUML、6580104IUML、5428103IUML和9613102IUML。單質(zhì)粒系統(tǒng)表達(dá)耐RNASE內(nèi)含長(zhǎng)片段嵌合體RNA的VLPS成功構(gòu)建了4種原核表達(dá)載體PETMS23V、P3VPETP、NP3VPETP和NP3VPETC。PETMS23V和P3VPETP經(jīng)原核表達(dá)后得到含全長(zhǎng)為1891NT的5段嵌合體RNA的VLPS；NP3VPETP、NP3VPETC其原核表達(dá)產(chǎn)物VLPS中僅包裝了1200NT的目的嵌合體RNA。NP3VPETP、NP3VPETC、P3VPETP和PETMS23V的表達(dá)效率分別為023、035、035和051MGML。NP3VPETC比NP3VPETP表達(dá)效率高52％，而PETMS23V比P3VPETP表達(dá)效率高38％。結(jié)論我們構(gòu)建的表達(dá)載體及原核表達(dá)系統(tǒng)，可作為構(gòu)建和制備耐RNASE的含三種病毒嵌合體序列的VLPS的平臺(tái)，這種VLPS可以作為對(duì)同一個(gè)標(biāo)本進(jìn)行多個(gè)病毒的同時(shí)檢測(cè)時(shí)可應(yīng)用的多靶核酸標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品，既節(jié)省了成本，也簡(jiǎn)化了操作程序。同時(shí)也解決了其它無(wú)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品RNA病毒檢測(cè)的溯源問(wèn)題。

簡(jiǎn)介：目的觀察中醫(yī)藥治療小兒偏肺病毒、博卡病毒肺炎的臨床療效，并對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)，為臨床提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。方法按照隨機(jī)、平行對(duì)照原則，選取江蘇省中醫(yī)院兒科病房中醫(yī)診斷為肺炎喘嗽風(fēng)熱閉肺證或痰熱閉肺證，西醫(yī)診斷為小兒病毒性肺炎的患兒，采用實(shí)時(shí)熒光PCR法檢測(cè)鼻咽分泌物脫落細(xì)胞中偏肺病毒、博卡病毒的特異性基因片段，陽(yáng)性者納入觀察病例，使用區(qū)組隨機(jī)法分為治療組和對(duì)照組。治療組給予清肺口服液口服，喜炎平注射液靜滴對(duì)照組給予氨溴特羅口服液（易坦靜）口服，利巴韋林注射液靜滴，療程10天。比較治療后兩組患兒的主癥積分、次癥積分、綜合療效等，并記錄不良事件，對(duì)其安全性作出評(píng)價(jià)。結(jié)果本次研究共收集病例61例，因?qū)φ战M脫落2例，實(shí)際統(tǒng)計(jì)59例，其中治療組31例、對(duì)照組28例。治療組痊愈8例2581％、顯效19例6129％、進(jìn)步4例1290％、無(wú)效0例0％，總有效率100％對(duì)照組痊愈1例357％、顯效15例5357％、進(jìn)步11例3929％、無(wú)效1例357％，總有效率9643％。兩組療效經(jīng)卡方檢驗(yàn)，X29857，P00017，有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜001），治療組療效顯著優(yōu)于對(duì)照組。治療后兩組主癥總積分、次癥總積分比較，治療組積分均低于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜001）。治療后癥狀、體征咳嗽、食欲、舌象改善治療組均顯著優(yōu)于對(duì)照組P＜001痰鳴、X線胸片改善治療組優(yōu)于對(duì)照組（P＜005）發(fā)熱、惡寒、氣喘、肺部聽(tīng)診、心率、紫紺、面色、精神、惡心嘔吐、出汗、口渴、鼻咽分泌物病毒檢測(cè)，兩組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005）。臨床安全性研究結(jié)果治療組臨床未出現(xiàn)不良反應(yīng)，對(duì)照組2例出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，其中1例脫落，余未見(jiàn)不良反應(yīng)，兩組安全性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005）。結(jié)論中醫(yī)藥治療小兒偏肺病毒、博卡病毒肺炎是安全有效的。

簡(jiǎn)介：溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目北京與上海ARI患兒中小RNA病毒和人冠狀病毒分型檢測(cè)答辯委員會(huì)主席王成彬教授解放軍總醫(yī)院答辯委員會(huì)成員高基民教授溫州醫(yī)科大學(xué)張泓泰副研究員中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所論文答辯日期2015年5月18日溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文