簡介：目的研究乙型肝炎病毒（HBV）前C區(qū)G1896A變異、基本核心啟動子（BCP）區(qū)A1762TG1764A變異及聯(lián)合變異G1896A與A1762TG1764A同時變異在HBEAG陰性和HBEAG陽性慢性乙型肝炎（CHB）患者中的變異特點，分析HBEAG陰性CHB患者前C區(qū)G1896A變異、BCP區(qū)A1762TG1764A變異及聯(lián)合變異與病情進展的關(guān)系以及CHB患者前C區(qū)及BCP區(qū)變異與細(xì)胞因子的關(guān)系。方法收集120例HBVDNA（）CHB患者及60例健康對照者血清標(biāo)本，將其分為三組A組為HBEAG陰性CHB患者60例輕度19例，中度29例，重度12例；B組為HBEAG陽性CHB患者60例輕度22例，中度28例，重度10例；C組為健康對照者60例。用熒光定量PCR法檢測A、B兩組HBVDNA水平，用直接測序法檢測A、B兩組前C區(qū)G1896A及BCP區(qū)A1762TG1764A變異的發(fā)生率，根據(jù)前C區(qū)及BCP區(qū)測序結(jié)果又分為變異組和無變異組，分析前C區(qū)及BCP區(qū)變異發(fā)生與病情進展的關(guān)系。雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測變異組、無變異組和正常對照組細(xì)胞因子IFNΓ、IL10的水平，分析前C區(qū)及BCP區(qū)變異與細(xì)胞因子的關(guān)系。結(jié)果120例HBVDNA（）CHB患者中A組檢出變異株48例，B組檢出變異株24例，A組和B組CHB患者中G1896A變異檢出率分別為383％（2360）和1671060Х2706P0008；A1762TG1764A變異的檢出率分別為167（1060）和233（1460）Х2083P0361；聯(lián)合變異的檢出率分別為25（1560）和0（060）Х21714P0000。60例HBEAG陰性CHB患者中G1896A、A1762G1764A、聯(lián)合變異的變異組HBVDNA含量分別為（587±085）LGCOPIESML、（584±082）LGCOPIESML、（595±050）LGCOPIESM均明顯高于無變異組HBVDNA含量，分別為（450±071）LGCOPIESML、（446±069）LGCOPIESML、（475±094）LGCOPIESML，T值分別為T758、T794、T442，P均結(jié)論（1）HBV前C區(qū)G1896A變異和聯(lián)合變異是導(dǎo)致HBEAG陰性，HBVDNA持續(xù)陽性的主要機制之一。（2）HBV前C區(qū)G1896A變異和BCP區(qū)A1762TG1764A變異可能加重HBEAG陰性CHB患者病情的發(fā)展。（3）HBV前C區(qū)G1896A變異和BCP區(qū)A1762G1764A變異后可能導(dǎo)致IFNΓ、IL10水平升高。

簡介：目的了解蘇州地區(qū)人鼻病毒HUMANRHINOVIRUSHRV在呼吸道感染RESPIRATYTRACTINFECTIONSRTIS住院患兒中檢出情況、流行特點及臨床特征并探討HRV感染與哮喘的關(guān)系。方法搜集2012年12月2013年11月于蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院呼吸科住院的RTIS患兒的鼻咽深部吸取物1933份2013年9月2014年3月份于哮喘中心就診的哮喘患兒咽拭子153份提取呼吸道標(biāo)本RNA采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)REVERSETRANIONPOLYMERASECHAINREACTIONRTPCR檢測HRVRNA分析HRV呼吸道感染的臨床特征同時對RTIS患兒的呼吸道標(biāo)本采用直接免疫熒光法進行呼吸道合胞病毒RESPIRATYSYNCYTIALVIRUSRSV、流感病毒A、B型INFLUENZAVIRUSTYPESABINFAB、副流感病毒13型PARAINFLUENZAVIRUSTYPES13PINF13、腺病毒ADENOVIRUSADV檢測實時熒光PCR檢測人博卡病毒HUMANBOCAVIRUSHBOV、RTPCR檢測偏肺病毒HUMANMETAPNEUMOVIRUSHMPV。結(jié)果⑴呼吸道病毒檢出情況1933份標(biāo)本中共檢出728株病毒株377％其中HRV214例111％、RSV210例109％、HBOV146例76％、PINF396例50％、PINF124例33％等。35例HRV感染為混合感染35214164％以HRV混合HBOV多見1535429％。⑵流行特點HRV全年散發(fā)在9月份達(dá)高峰夏秋季節(jié)檢出率高于冬春季節(jié)男性檢出率顯著高于女性Χ27452P0006706％HRV感染者為2歲以下兒童隨年齡增長感染人數(shù)下降。⑶臨床特征呼吸道HRV感染可表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、喘息等與其他呼吸道病毒感染類似混合感染以小于1歲的男性兒童多見但混合感染并不增加疾病嚴(yán)重程度。在大葉性肺炎及哮喘急性發(fā)作中HRV陽性檢出高于其他常見呼吸道病毒在毛細(xì)支氣管炎中HRV陽性檢出僅次于RSV感染。⑷HRV在門診哮喘急性發(fā)作患兒中檢出陽性率為286％與哮喘急性發(fā)作密切相關(guān)HRV在過敏原皮膚點刺陽性的哮喘患兒中檢出率較高。結(jié)論HRV是蘇州地區(qū)呼吸道感染的主要病毒病原之一全年散發(fā)9月份達(dá)高峰以2歲以下兒童多見HRV感染可引起哮喘急性發(fā)作且與過敏性體質(zhì)相關(guān)。

簡介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文重慶地區(qū)兒童呼吸道博卡病毒感染特點姓名丁媛申請學(xué)位級別碩士專業(yè)兒科學(xué)指導(dǎo)教師趙曉東20070201重慶醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得重慶醫(yī)科大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任．學(xué)位親文作者簽名蘭鎏日期芝Z±藝．．學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解重慶醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，印研究生在攻讀學(xué)位期聞?wù)撐墓ぷ鞯闹R產(chǎn)權(quán)單位屬重慶醫(yī)科大學(xué)．本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為重慶醫(yī)科大學(xué)．學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱．學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，可以采用影印，縮印或其他手段保存論文．論文作者簽名受蘭叁指導(dǎo)教師簽名盔型日期立丑絲2

簡介：山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文慢性鋁暴露對小鼠認(rèn)知功能及AΒ表達(dá)的影響姓名潘寶龍申請學(xué)位級別碩士專業(yè)勞動衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師牛僑20100525山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文延長PO05。鋁暴露時間與避暗實驗LTR。O684，尸001、MORRIS水迷宮LTRSO334，O01之間存在時間效應(yīng)關(guān)系。③中劑量組與3個月相比，12個月后小鼠跳臺實驗LT明顯縮短妒005；9月、12個月后小鼠避暗實驗LT明顯縮短尸O05，EN明顯增加戶O0512個月后MO玎IS水迷宮LT延長尸005。鋁暴露時間與避暗實驗ENRSO672，PO01之間存在時間效應(yīng)關(guān)系。④高劑量組與3個月相比，9個月、12個月后小鼠跳臺實驗LT明顯縮短P005；9個月、12個月避暗實驗LT明顯縮短尸O05，EN明顯增加P005；12個月MORRIS水迷宮LT明顯延長尸005，9個月、12個月穿越平臺次數(shù)明顯減少尸O05。鋁暴露時間與避暗實驗ENRSO672，P001、MORRIS水迷宮LTR產(chǎn)O667，PO01、穿越平臺次數(shù)RS0474，P005之間存在時間效應(yīng)關(guān)系。三病理組織學(xué)結(jié)果常規(guī)HE染色鏡下可見對照組小鼠海馬錐體層神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常，排列整齊，隨著染鋁劑量增加，細(xì)胞排列逐漸變零亂，高劑量組可見細(xì)胞連接松解，胞漿濃縮、深染、細(xì)胞核固縮，細(xì)胞周圍出現(xiàn)環(huán)狀帶，細(xì)胞數(shù)量減少等。四DAPPMRNA表達(dá)結(jié)果與對照組相比，12個月后高劑量組PAPPMRNA的表達(dá)量明顯增高尸O05。鋁暴露劑量與PAPPMRNA的表達(dá)量RSO289，O05之間存在劑量效應(yīng)關(guān)系。五PAPP和AP蛋白表達(dá)結(jié)果①與對照組相比，12個月后高劑量組PAPP蛋白的表達(dá)量明顯增高妒O05。鋁暴露劑量與PAPP的表達(dá)量RSO289，O05之間存在劑量效應(yīng)關(guān)系。②與對照組相比，9個月后中、高劑量組PAPP的表達(dá)量尸005、AP蛋白的表達(dá)量均明顯增多釁00112個月后，低、中、高劑量組PAPP的表達(dá)量妒O05、AP蛋白的表達(dá)量妒O01均明顯升高。鋁暴露劑量與PAPP蛋白的表達(dá)量RSO878，O01、AP蛋白的表達(dá)量RS0738，001呈正相關(guān)。結(jié)論鋁可導(dǎo)致小鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降，并可使小鼠海馬腦區(qū)錐體層神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。鋁暴露導(dǎo)致小鼠認(rèn)知功能障礙與P枷P和AP的表達(dá)上調(diào)有關(guān)，這可能是鋁致小鼠認(rèn)知功能障礙的重要機制之一。關(guān)鍵詞鋁學(xué)習(xí)記憶PAPPAPIII

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簡介：目的1觀察黃芩素BAICALEIN，BAI抑制HCMV體外感染人星形膠質(zhì)細(xì)胞引起的IE、PP65MRNA及蛋白表達(dá)的變化2探討黃芩素抗HCMV感染的機制方法1差速貼壁法純化人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞免疫熒光法標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志蛋白膠質(zhì)纖維酸性蛋白GLIALFIBRILLARYACIDICPROTEIN，GFAP，熒光顯微鏡下觀察并計算細(xì)胞純度。2在人胚肺成纖維細(xì)胞中擴增HCMVAD169株病毒，采用空斑定量法測定病毒滴度。3REALTIMEPCR和免疫熒光檢測IE、PP65MRNA及蛋白的表達(dá)，確定HCMV是否能在人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞中建立感染模型。4MTT法檢測BAI組、HCMV組、HCMVBAI組和對照組細(xì)胞的細(xì)胞活性，觀察BAI對HCMV感染致人星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖異常的抑制作用。5REALTIMEPCR檢測不同組間BAIHCMV組，HCMV組星形膠質(zhì)細(xì)胞中IE及PP65MRNA的變化。6免疫熒光和WESTERNBLOT檢測檢測不同組間（BAIHCMV組，HCMV組）星形膠質(zhì)細(xì)胞中IE、UL84、PP65及乙?；M蛋白H3K9的變化。結(jié)果1分離純化培養(yǎng)得到的人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞，經(jīng)免疫熒光染色后于倒置顯微鏡下觀察到細(xì)胞有較強的特異性紅色熒光，GFAP陽性率大于90％。2HCMV感染人胚肺成纖維細(xì)胞5D左右，超過80％細(xì)胞出現(xiàn)典型細(xì)胞病變效應(yīng)CPE，呈典型的巨細(xì)胞病毒感染后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變?？瞻邷y定結(jié)果顯示病毒空斑形成單位為1108PFUML。3REALTIMEPCR和WESTERNBLOT結(jié)果顯示HCMV感染組星形膠質(zhì)細(xì)胞可檢測到HCMVIE和PP65的表達(dá)，而未感染組細(xì)胞則檢測不到。4MTT結(jié)果顯示，20ΜMBAIHCMV組的吸光值在24H、48H、72H均高于HCMV組P＜005。5形態(tài)學(xué)觀察病毒感染48H時，HCMV組細(xì)胞出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變效應(yīng)CPE，而20ΜMBAIHCMV組細(xì)胞狀態(tài)較好，CPE不明顯。6REALTIMEPCR結(jié)果顯示在感染48H和72H時20ΜMBAIHCMV組IE、PP65的MRNA表達(dá)明顯低于HCMV組P＜005。7免疫熒光、WESTERNBLOT結(jié)果顯示20ΜMBAIHCMV組細(xì)胞的IE、UL84、PP65、乙酰化組蛋白H3K9表達(dá)明顯低于HCMV組P＜005。結(jié)論1HCMV能夠在人原代星形膠質(zhì)細(xì)胞中建立感染模型。2適當(dāng)濃度的黃芩素能抑制HCMV感染所致的星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖異常。3一定濃度的黃芩素能降低HCMVIE及PP65在細(xì)胞中的MRNA和蛋白表達(dá)量。4黃芩素抗HCMV的機制可能是通過抑制了IE2的乙?；l(fā)揮作用的。

簡介：山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥合并乙型肝炎病毒感染對妊娠結(jié)局的影響姓名富曉敏申請學(xué)位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師張延麗20100605【FLI醫(yī)科人學(xué)碩J學(xué)位論文護，藥物治療同時適時終止妊娠，對母嬰的結(jié)局具有重要意義。關(guān)鍵詞妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥；乙型肝炎病毒；妊娠結(jié)局

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簡介：單純皰疹病毒1型HSV1為雙鏈包膜DNA病毒具有親神經(jīng)的特性在人群中感染廣泛。HSV1感染外周神經(jīng)后可逆行跨越神經(jīng)元進入中樞神經(jīng)系統(tǒng)并建立潛伏感染病毒裂解后引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)嚴(yán)重?fù)p傷。HSV1基因組表達(dá)有很高時序性分即早基因IE早期基因E和晚期基因L。作為IE基因產(chǎn)物之一的即早蛋白ICP4可刺激E基因表達(dá)和DNA合成誘導(dǎo)L基因的表達(dá)是HSV1基因表達(dá)從而引發(fā)感染的關(guān)鍵激活因子。因此有效抑制ICP4的表達(dá)可以通過阻止HSV1的復(fù)制達(dá)到治療HSV1感染性疾病的目的。RNA干擾RNAI是一種細(xì)胞本身固有的對抗外源基因侵犯的自我保護現(xiàn)象雙鏈RNADSRNA分子在MRNA水平關(guān)閉相應(yīng)序列及基因的表達(dá)使其沉默。在此基礎(chǔ)上建立的RNAI技術(shù)不僅僅是一種經(jīng)濟、快捷、高效的抑制基因表達(dá)的技術(shù)手段更為研究者在基因功能測定和基因治療等方面開辟了新思路。本實驗構(gòu)建表達(dá)ICP4SIRNA小干擾RNA的重組真核慢病毒質(zhì)粒PLKO1PUROICP4SIRNA將產(chǎn)生的重組病毒顆粒感染VERO細(xì)胞建立穩(wěn)定表達(dá)ICP4SIRNA的重組VEROICP4SIRNA細(xì)胞系；進一步探討干擾HSV1ICP4基因后對HSV1復(fù)制能力的影響為臨床上運用RNAI治療HSV1感染性疾病提供思路和實驗依據(jù)。目的1建立穩(wěn)定表達(dá)ICP4特異性SIRNA的重組細(xì)胞系。2初步分析靶向ICP4的SIRNA對HSV1在VERO細(xì)胞中復(fù)制能力的影響。方法1基因工程技術(shù)構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒PLKO1PUROICP4SIRNA雙酶切及測序鑒定。2三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞產(chǎn)生重組慢病毒顆粒。3重組病毒顆粒感染VERO細(xì)胞嘌呤霉素篩選法建立ICP4SIRNA表達(dá)陽性的重組細(xì)胞系。4采用REALTIMCPCR和WESTERNBLOT鑒定重組VCROICP4SIRNA細(xì)胞系。5通過觀察HSV感染重組VERO細(xì)胞后CPE細(xì)胞病變效應(yīng)表達(dá)和TCID50半數(shù)組織培養(yǎng)感染劑量法測定HSV1滴度檢測靶向ICP4的SIRNAS對HSV1病毒復(fù)制能力的影響。結(jié)果1成功構(gòu)建重組真核慢病毒質(zhì)粒PLKO1PUROICP4SIRNA。2獲得有效濃度的穩(wěn)定表達(dá)ICP4的SIRNAS的重組慢病毒顆粒。3成功建立穩(wěn)定表達(dá)ICP4特異性SIRNA的重組細(xì)胞系。4在MRNA和蛋白水平證實重組VEROICP4SIRNA細(xì)胞中的HSV1ICP4表達(dá)被抑制。5感染野生型HSV1后SIRNA組VERO細(xì)胞的CPE表達(dá)率與陰性對照組比較有明顯降低。進一步采用TCID50法測定病毒滴度并對TCID值進行AVONA統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)SIRNA組HSV滴度與對照組存在顯著差異P結(jié)論1成功建立穩(wěn)定表達(dá)抗ICP4SIRNA的重組VERO細(xì)胞系。2SIRNA能夠有效地干擾HSV1ICP4基因表達(dá)且不同位點聯(lián)合干擾對HSV1ICP4基因的表達(dá)有協(xié)同的抑制效果進而對HSV1病毒復(fù)制有協(xié)同抑制效果。

簡介：點擊查看更多RU486在1型糖尿病大鼠神經(jīng)病理性痛及認(rèn)知功能障礙中的作用.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的本課題構(gòu)建輪狀病毒ROTAVIRUS，RV非結(jié)構(gòu)蛋白4NONSTRUCTURALPROTEIN4NSP4及其第86～175AA86TO175AMINOACIDPEPTIDEOFNONSTRUCTURALPROTEIN4，NSP486175基因的原核表達(dá)系統(tǒng)，通過轉(zhuǎn)化ECOLIBL21DE3、IPTG誘導(dǎo)表達(dá)、NINTA親和層析純化等方法制備重組蛋白。分析NSP4對CACO2細(xì)胞和原代培養(yǎng)的SD大鼠神經(jīng)元細(xì)胞的損傷作用，進一步探討RV對腸外細(xì)胞的損傷機制。方法1構(gòu)建PET28ANSP4和PET28ANSP486175表達(dá)載體膠體金法篩選A群輪狀病毒陽性糞便，提取總RNA逆轉(zhuǎn)錄為CDNA，PCR擴增出目的基因NSP4和NSP486175，將目的基因與PMD19TSIMPLEVECT連接，轉(zhuǎn)化ECOLIDH5Α感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)菌落PCR和質(zhì)粒酶切鑒定后送DNA測序。提取PMD19TNSP4、PMD19TNSP486175和PET28A質(zhì)粒分別進行雙酶切，T4DNA連接酶連接并轉(zhuǎn)化ECOLIBL21DE3感受態(tài)細(xì)胞，菌落PCR、質(zhì)粒酶切鑒定及DNA測序后應(yīng)用于后續(xù)試驗。2NSP4誘導(dǎo)表達(dá)和純化根據(jù)不同IPTG濃度和誘導(dǎo)時間分別對含有PET28ANSP4和PET28ANSP486175的ECOLIBL21DE3進行誘導(dǎo)表達(dá)，分析最佳誘導(dǎo)條件。收集菌體沉淀，高壓破碎，SDSPAGE分析蛋白的表達(dá)方式及表達(dá)量。破碎后的上清進行NINTA親和層析純化，脫鹽柱脫鹽。取部分純化蛋白進行SDSPAGE分析和WESTERNBLOT鑒定。3RVNSP486175蛋白對CACO2細(xì)胞胞內(nèi)游離鈣離子INTRACELLULARFREECA2，CA2I干擾作用用PBS溶解重組蛋白，BRADFD法檢測蛋白濃度。PBS作為陰性對照，F(xiàn)LUO3標(biāo)記CACO2細(xì)胞CA2I，激光共聚焦顯微鏡檢測NSP486175對CA2I的干擾。4NSP486175蛋白對神經(jīng)元細(xì)胞的損傷作用分離培養(yǎng)出生24H的SD大鼠神經(jīng)元細(xì)胞。用不同濃度的NSP486175刺激成熟的神經(jīng)元細(xì)胞，12H后倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。收集細(xì)胞培養(yǎng)液檢測LDH活力，激光共聚焦顯微鏡觀察添加蛋白前后神經(jīng)元細(xì)胞CA2I熒光強度和分布改變。結(jié)果1構(gòu)建PET28ANSP4和PET28ANSP486175表達(dá)載體PCR產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳分析，分別在500BP和300BP左右有預(yù)期大小的條帶。PET28ANSP4和PET28ANSP486175表達(dá)載體分別經(jīng)NCOⅠ、XHOⅠ和NCOⅠ、HINDⅢ雙酶切，目的基因均與預(yù)期大小相符。DNA測序結(jié)果與GENBANKAET434691序列一致。2NSP4誘導(dǎo)表達(dá)和純化完整的NSP4在大腸埃希菌中難以表達(dá)。NSP486175蛋白主要以可溶性方式存在，相對分子質(zhì)量為10000。NSP86175蛋白表達(dá)量在37℃，05MMOLLIPTG誘導(dǎo)7H達(dá)到高峰。SDSPAGE分析NSP486175蛋白主要存在于菌體破碎離心后的上清中，NINTA親和層析純化用不同濃度咪唑洗脫后發(fā)現(xiàn)200MMOLL咪唑洗脫下來的目的蛋白最多。純化后的蛋白能與抗HIS多克隆抗體結(jié)合，WESTERNBLOT驗證在NC膜上相對分子量10000處有特異性條帶。3RVNSP486175蛋白對CACO2細(xì)胞CA2I干擾作用激光共聚焦顯微鏡觀察到加入NSP486175前后CACO2細(xì)胞內(nèi)熒光強度及熒光分布的變化。時間平均光密度曲線顯示加入重組蛋白后平均光密度值立即升高，在24S達(dá)到峰值，之后逐漸下降，呈一過性變化未見第二峰對照組加入PBS后無明顯變化。對照組與實驗組熒光強度變化差值的比較，T4507，P0011，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。實驗組添加NSP486175蛋白前后熒光強度分析，T8211，P0015，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，加蛋白后熒光強度增高。4NSP486175蛋白對神經(jīng)元細(xì)胞損傷作用原代分離培養(yǎng)的新生SD大鼠神經(jīng)元細(xì)胞9D左右成熟，倒置顯微鏡下可見細(xì)胞胞體豐滿，呈不規(guī)則形或梭形，細(xì)胞突起變長增粗交錯成網(wǎng)絡(luò)，細(xì)胞生長狀態(tài)較好。不同濃度蛋白刺激12H后，細(xì)胞狀態(tài)變差，細(xì)胞間隙增大，貼壁細(xì)胞減少。培養(yǎng)液中50ΜGML組與對照組比較LDH活力升高，500ΜGML組LDH升高最明顯。添加NSP486175蛋白后胞內(nèi)鈣離子的熒光強度和分布均有變化。時間平均光密度曲線顯示加入重組蛋白后平均光密度值開始升高之后逐漸下降，呈一過性變化未見第二峰對照組加入PBS后沒有明顯變化。對照組與實驗組熒光強度變化差值的比較，T3394，P0027，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。實驗組添加NSP486175蛋白前后熒光強度分析，T4362，P0049，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，加蛋白后熒光強度增高。結(jié)論1構(gòu)建輪狀病毒完整的NSP4及其活性片段NSP486175原核表達(dá)系統(tǒng)，對表達(dá)過程進行優(yōu)化，實現(xiàn)了NSP486175蛋白的大量高效制備。2NSP486175蛋白能夠?qū)е翪ACO2細(xì)胞內(nèi)游離的CA2失衡，初步證實具有生物學(xué)活性，可進一步用于輪狀病毒腸外損傷機制的研究。3外源性添加NSP4后神經(jīng)元細(xì)胞細(xì)胞膜完整性受到影響，LDH釋放量增高，同時干擾胞內(nèi)鈣離子平衡，表明NSP4可能涉及RV腸道外細(xì)胞損傷，且與蛋白濃度相關(guān)。

簡介：目的應(yīng)用分子克隆技術(shù)獲得乙型肝炎病毒HBVB、C基因型X蛋白，為進一步研究X基因在乙型肝炎病毒所致疾病中的作用奠定基礎(chǔ)。方法①基因克隆應(yīng)用PCR技術(shù)，分別從本實驗室構(gòu)建的B、C基因型HBV保守的X基因真核表達(dá)重組子PCDNA31XB和PCDNA31XC中獲取X全長基因，產(chǎn)物經(jīng)EEI和XHOI酶切，分別與原核表達(dá)載體PET42A連接，轉(zhuǎn)化BL21感受態(tài)細(xì)胞，抗生素篩選陽性重組子，PCR、酶切、測序鑒定。②蛋白表達(dá)純化取鑒定后的B，C基因型X基因重組菌，IPTG誘導(dǎo)重組蛋白的表達(dá)，SDSPAGE電泳，用GST抗體經(jīng)WESTERNBREEZE化學(xué)發(fā)光法鑒定融合蛋白。優(yōu)化誘導(dǎo)時間和IPTG濃度，誘導(dǎo)重組蛋白大量表達(dá)；低溫誘導(dǎo)可溶性X蛋白的形成。分別用GST和NINTABIND純化試劑盒純化X蛋白，比較兩種方法的純化效果，并用BRADFD法測定重組蛋白濃度。結(jié)果①PCR法獲取的乙型肝炎病毒B、C基因型X基因的大小與預(yù)期一致；克隆后篩選的陽性重組子經(jīng)PCR、酶切、測序鑒定正確。②重組子均可被IPTG誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白，表達(dá)產(chǎn)物可被GST抗體識別當(dāng)誘導(dǎo)時間為2H、IPTG終濃度為05MMOLL時，表達(dá)量均達(dá)最大，約為菌體總蛋白的40％以上18℃，25℃，30℃均難以誘導(dǎo)可溶性蛋白的產(chǎn)生；溶解后的包涵體經(jīng)復(fù)性后進行GST純化，但是最終未能得到目的蛋白；而用NINTA純化后可直接得到大量融合蛋白，而且純度可達(dá)95％以上。結(jié)論成功構(gòu)建了B、C基因型乙型肝炎病毒X基因的原核表達(dá)系統(tǒng)，并獲得高效表達(dá)重組蛋白經(jīng)NI一柱純化后可得到大量重組蛋白，且純度較高，為進一步研究X基因在乙型肝炎病毒所致疾病中的作用奠定基礎(chǔ)。

簡介：背景與目的乙肝病毒HEPATITISBVIRUS，HBV感染呈世界性流行，不同地區(qū)HBV感染的流行強度不同。據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，全球約20億人曾感染過HBV，其中的35億人發(fā)展為慢性HBV感染者。2006年全國乙型肝炎流行病學(xué)會調(diào)查表明，我國1～59歲的人群中血清乙肝表面抗原HEPATITISBSURFACEANTIGEN，HBSAG攜帶率為718％。據(jù)此推算，我國現(xiàn)有的慢性HBV感染者約9300萬人，其中慢性乙型肝炎患者約2000萬例。因此，HBV感染是世界也是中國的重要公共衛(wèi)生問題。人類對HBV的認(rèn)識隨著生物學(xué)的發(fā)展而不斷加深。BLUMBERG于1965年在乙肝病毒感染者血液中發(fā)現(xiàn)HBSAG。起初HBSAG只用于對HBV感染的診斷，隨著HBSAG定量檢測的開發(fā)和分析的標(biāo)準(zhǔn)化，HBSAG定量不僅是診斷HBV感染的最基本的血清標(biāo)志物之一，而且被賦予了新的臨床意義，逐漸引起人們研究的興趣。臨床研究表明HBSAG定量值的變化與干擾素（INTERFERON，IFN）抗病毒療效及停藥后是否發(fā)生持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答密切相關(guān)近年發(fā)現(xiàn)HBSAG也可以用來觀察分析核苷（酸）類（NUCLEOTIDEANALOGUES）藥物抗病毒的療效還有研究證明，HBSAG的變化也可以用來預(yù)測自然狀態(tài)下HBSAG是否會發(fā)生自身清除。但是，對于未進行抗病毒治療干預(yù)的自然狀態(tài)下慢性HBV感染不同階段（如免疫耐受期、免疫清除期、非活動或低復(fù)制期及再活動期）HBSAG定量的分布特點，國外學(xué)者進行了初步的研究分析，但國內(nèi)還缺乏系統(tǒng)的研究報道。本文旨在研究未經(jīng)抗病毒治療干預(yù)的慢性HBV感染后不同臨床狀態(tài)HBSAG定量的分布特點及其與血清HBVDNA水平、年齡的相關(guān)性，為慢性HBV感染不同階段的診斷和未來可能的干預(yù)治療提供臨床依據(jù)。材料和方法收集564例未經(jīng)抗病毒治療的慢性HBV感染者血清，分為慢性HBV攜帶（65例）、非活動性HBSAG攜帶164例、HBEAG陽性慢性乙型肝炎171例、HBEAG陰性慢性乙型肝炎74例、HBEAG陽性乙肝肝硬化42例和HBEAG陰性乙肝肝硬化48例6組。采用美國雅培微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測HBSAG定量值，熒光PCR定量法檢測血清HBVDNA水平。結(jié)果慢性HBV攜帶、HBEAG陽性慢乙肝、HBEAG陰性慢乙肝、非活動性HBSAG攜帶、HBEAG陰性肝硬化和HBEAG陽性肝硬化6組的HBSAG定量值依次下降，中位數(shù)分別為471371～531、404245～522、350268～443、334138～437、325185～388和315251～392LOG10IUML6組間HBSAG定量值比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義X22630，P＜0001。慢性HBV感染者總體（非活動性HBSAG攜帶除外）血清HBSAG定量與血清HBVDNA呈正相關(guān)（R0719，P＜0001）。血清HBSAG定量與HBVDNA于HBEAG陽性組正相關(guān)（R0665，P＜0001），HBEAG陰性組相關(guān)性較低R0362，P＜0001。慢性HBV感染者總體的血清HBSAG定量與年齡呈負(fù)相關(guān)（R0397，P＜0001）。HBEAG陽性及陰性兩組與年齡均呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為R0353、R0316，P＜0001。年齡＞40歲的非活動性HBSAG攜帶與HBEAG陰性慢乙肝兩組血清HBSAG定量值具有統(tǒng)計學(xué)差異Z3783，P＜0001，區(qū)分兩組HBSAG定量的臨界值為329LOG10IUML。結(jié)論慢性HBV感染后不同階段血清HBSAG定量值分布不同，慢性HBV攜帶者最高，乙肝肝硬化及非活動性HBSAG攜帶最低血清HBSAG定量值與血清HBVDNA水平及年齡相關(guān)血清HBSAG定量值對監(jiān)測年齡＞40歲的非活動性HBSAG攜帶是否發(fā)展為HBEAG陰性慢乙肝有重要參考價值。

簡介：目的通過比較病毒性腦炎急性期伴癲癇發(fā)作與不伴癲癇發(fā)作患者血清白介素6（INTERLEUKIN6，IL6）及腫瘤壞死因子?。═UMNECROSISFACTA，TNF?。舛?，探討病毒性腦炎急性期血清IL6及TNFΑ濃度與癲癇發(fā)作之間的關(guān)系。方法1標(biāo)本采集收集2012年7月至2014年1月于山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的30例病毒性腦炎患者急性期血液標(biāo)本，同時選取原發(fā)性癲癇患者13名及健康志愿者10名作為對照組，并采集血液標(biāo)本，所采集的血液標(biāo)本經(jīng)3000RMIN離心后，提取血清，置于80℃冰箱備用。2實驗分組將所有研究對象分為四組A組病毒性腦炎伴癲癇發(fā)作組；B組病毒性腦炎不伴癲癇發(fā)作組；C組原發(fā)性癲癇組；D組正常健康對照組。3細(xì)胞因子濃度檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAYELISA）測定各組血清細(xì)胞因子IL6與TNFΑ濃度。4所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示，采用SPSS190統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析及LSD組間比較，以P＜005為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果共收集30例病毒性腦炎急性期患者，其中病毒性腦炎伴癲癇發(fā)作組15例，病毒性腦炎不伴癲癇發(fā)作組15例。1各組血清白介素6水平比較與對照組相比，A組血清IL6水平明顯升高，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）；B組血清IL6水平較對照組明顯升高，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）；C組血清IL6水平較健康對照組略低，差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005）。與C組相比，A組血清IL6水平明顯升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）；B組血清IL6水平較C組明顯升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）。A組血清IL6較B組血清IL6明顯升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）。提示病毒性腦炎急性期伴癲癇發(fā)作較不伴癲癇發(fā)作者血清IL6水平明顯升高。2各組血清腫瘤壞死因子Α水平比較與對照組相比，A組血清TNFΑ水平明顯降低，差異顯著（P＜005）；B組血清TNFΑ水平較對照組升高，差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005）；C組與對照組相比，血清TNFΑ水平降低，差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005）。與C組相比，A組血清TNFΑ水平降低，差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005）；B組較C組血清TNFΑ明顯升高，差異顯著（P＜005）；B組血清TNFΑ水平較A組明顯高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜005）。提示病毒性腦炎急性期伴癲癇患者較不伴癲癇發(fā)作患者血清TNFΑ水平明顯降低。結(jié)論1病毒性腦炎急性期血清白介素6水平升高，病毒性腦炎急性期伴癲癇發(fā)作者較病毒性腦炎急性期不伴癲癇發(fā)作者血清白介素6水平明顯升高；2病毒性腦炎急性期血清腫瘤壞死因子Α水平改變不明顯，病毒性腦炎急性期伴癲癇發(fā)作者較病毒性腦炎急性期不伴癲癇發(fā)作者血清腫瘤壞死因子Α水平明顯降低。

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