簡介：點(diǎn)擊查看更多慢病毒介導(dǎo)siRNAs沉默ADAMTS-5基因治療骨關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文APE1特異性SIRNA慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及其在人肝癌MHCC97H細(xì)胞中APE1基因沉默效應(yīng)的觀察姓名李艷菊申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)（腫瘤病理）指導(dǎo)教師黃愛民20100601周期實(shí)驗(yàn)顯示與未感染組和空載體病毒感染組相比，LVAPELSHRNA感染MHCC97H細(xì)胞后，細(xì)胞的G1期延長，而G2期和S期相對縮短。4在體外黏附、侵襲和趨化運(yùn)動實(shí)驗(yàn)中，與未感染組和空載體病毒感染組相比，LVAPELSHRNA組的MHCC97H細(xì)胞的黏附能力、侵襲能力及趨化運(yùn)動能力均不同程度的下降。結(jié)論1本課題所構(gòu)建的慢病毒載體可顯著、穩(wěn)定的抑制APEL基因的表達(dá)，為后續(xù)研究奠定可靠的基礎(chǔ)。2APEL基因抑制后MHCC97細(xì)胞的增殖、黏附、趨化運(yùn)動和侵襲能力等惡性生物學(xué)行為均受到不同程度的抑制，提示APEL參與調(diào)控肝細(xì)胞癌增殖活性以及侵襲轉(zhuǎn)移能力，為肝細(xì)胞癌患者的腫瘤靶向治療提供理論基礎(chǔ)，并為后續(xù)的肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。關(guān)鍵詞RNA干擾，APEL基因，慢病毒載體，肝細(xì)胞癌，增殖，侵襲，轉(zhuǎn)移4

簡介：復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文白介素8（IL8）單核苷酸多態(tài)性與呼吸道合胞病毒易感性關(guān)聯(lián)的研究姓名陸愛珍申請學(xué)位級別碩士專業(yè)兒科學(xué)指導(dǎo)教師王立波20070410論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究的啟發(fā)和所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作R明確的聲明并表示的謝意。作者簽名翟L壘日期竺生』論文使用授權(quán)聲明本人完全了解復(fù)旦大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱；學(xué)校可以公布論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存論文。保密的論文在解密后遵守此規(guī)定。作者簽名擗導(dǎo)師簽名扯吼業(yè)

簡介：內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文中度頸動脈狹窄與腦白質(zhì)疏松對認(rèn)知功能的影響姓名劉振麗申請學(xué)位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師王寶軍20100501OTHEINFLUENCEOFMID‘GRADECAROTIDARTERYSTENOSISANDLEUKOARAIOSISONCOGNITIVEFUNCTIONABSTRACTOBJECTIVETHROUGHTHESTUDYOFINFLUENCEONCOGNITIVEFUNCTIONINPATIENTSWITHNLIDGRADECAROTIDSTENOSISANDLEUKOARAIOSISTOFINDOUTTHECLINICALMANIFESTATIONSOFCOGNITIVEDYSFUNCTIONSEAL1SEDBYTHESETWISKFACTORSPROVIDINGTHECLINICALBAS玉SFOREARLYPREVENTIONOFVAOSCLALAL“DEMENTIAANDSELECTIONOFCOGNITIVEREHABILITATIONMETHODSFROMTHEPERSPECTIVEOFCLINICALNEUROPSYCHOLOGYMETHODSPATIENTSWITHMIDGRADECAROTIDSTENOSISANDLEUKOARAIOSISWEREVALIDATEDBYCRANIALMRISCANNING、CAROTIDULTRASONOGRAPHY、TRANSERANIALDOPPLERU1TRASOUNDANDDIGITAL跚LBTRACTIONANGIOGRAPHYTHENMINIMENTALSTATEEXAMINATIONMMSE、ADASCOG、WAISNUMERICSYMBOLSTEST、DIGITSPANFORWARDANDBACKWARDTEST，LINGUISTICALFLUENCYTESTWEREAPPLIEDTOGENERALLYEVAHMTETHECOGNITIVEFTMCTIONOFTHEPATIENTSRESULTSAFTERCORRECTIONBYAGE，J麟IDENTITY，EDUCATIONALBACKGROUND、HYPERTENTION，DIABETESMEUITUS、CARDIACDISEASES，CIGARET鋤OKINGANDALCOHOLDRINKING，HYPERH甌NOCYSTEINAEMIA，1THERESULTSOFMMSE、WAISNUMERICSYMBOLSTEST、DIGITSPANFORWARDANDBACKWARDTEST、LINGUISTICALFLUENCYTESTFROMPATIENTS誦THMIDGRADECAROTIDSTENOSISANDMID。GRADECAROTIDSTENOSISASSOCIATEDWITHRARINGDEGREESLEUKOARAIOSISWEREDECREXSEDWHENCOMPAREDTOTHECONTROLGROUPTHETESTINGVALUESOFADSACOGWEREELEVATEDAMLPAREDTOTHEOONTROLGROUP2PATIENTSWITHMIDGARDECAROTIDSTENOSISASSOCIATEDWITHMILDLEUKOARAIOSISINVOLINGMMSE、DIGITSPANFORWARDTESTWEREDECREASEDSIGNIFICANTLYWHENXMPAREDTOTHEMIDGRADECAROTIDSTENOSISGROUPPO053PATIENTSWITHMIDGARDECAROTIDSTENOSISASSOCIATEDWITHMIDG批DELEUKOARAIOSISINVOLINGTHERESULTSOF

簡介：點(diǎn)擊查看更多2009～2011年江蘇季節(jié)性H3N2流感流行和病毒分子特征研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點(diǎn)擊查看更多內(nèi)蒙古錫林郭勒盟中老年人群吸煙、飲酒與輕度認(rèn)知功能障礙的關(guān)系.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點(diǎn)擊查看更多乙型腦炎病毒與樹突狀細(xì)胞的互作研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：背景器官移植后器官功能維持的主要障礙是術(shù)后排斥反應(yīng)和免疫抑制劑毒性。共刺激信號是調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫反應(yīng)狀態(tài)的重要機(jī)制，直接影響移植后機(jī)體T細(xì)胞介導(dǎo)的排斥反應(yīng)的發(fā)生及反應(yīng)強(qiáng)弱。NAIVET細(xì)胞的激活除了需要MHC抗原肽提供的第一信號以外，還需要共刺激分子提供的第二信號。CD28分子家族提供的第二信號能夠提供給T細(xì)胞激活所需的第二信號，共抑制分子在自身耐受和防止自身免疫疾病的維持和發(fā)生中也扮演了重要的角色，近期克隆出的HVEMBTLA分子途徑是繼CTLA4和PD1之后的又一個對T細(xì)胞激活有重要調(diào)控作用的分子。近年的發(fā)現(xiàn)顯示CD28家族的BTLA分子與TNFR超家族的HVEM分子是一對發(fā)揮對T細(xì)胞活化調(diào)控的分子基礎(chǔ)之一。HVEM除了能夠與BTLA結(jié)合之外，它還是淋巴毒素LT和LIGHT分子的配體，其中HVEMLIGHT途徑在T細(xì)胞激活過程中扮演的是一個激活效應(yīng)。在我們的研究中我們對HVEM分子進(jìn)行改造，其中對LIGHT結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行了突變處理，刪除其與LIGHT分子途徑的效應(yīng)，保留對BTLA分子途徑的效應(yīng)。并將其構(gòu)建到復(fù)制缺陷型腺病毒轉(zhuǎn)染載體中，對移植物進(jìn)行原位的基因轉(zhuǎn)染，觀察其對小鼠異位心臟移植物存活的影響。目的通過巢式PCR擴(kuò)增HVEM全長CDNA片斷，并對其進(jìn)行分子改造；將突變后的HVEM分子構(gòu)建到帶EGFP基因的復(fù)制缺陷型腺病毒載體中，構(gòu)建雙表達(dá)腺病毒載體；觀察HVEM突變體對體外混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)MLR的影響和對小鼠實(shí)體器官轉(zhuǎn)染效率的測定；建立小鼠小鼠異位心臟移植模型同時觀察HVEM突變體轉(zhuǎn)染對心臟移植物存活的影響。方法用巢式PCR擴(kuò)增HVEM全長CDNA，并用PCR的方法對CDNA片段中LIGHT結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行突變，將HVEM突變體基因片斷插入復(fù)制缺陷型腺病毒載體，構(gòu)建帶HVEM基因和EGFP基因雙表達(dá)的腺病毒基因組重組質(zhì)粒；轉(zhuǎn)染293包裝細(xì)胞，篩選HVEM和EGFP高效表達(dá)的重組腺病毒，對腺病毒毒性和可復(fù)制性進(jìn)行檢測；通過體外實(shí)驗(yàn)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)MIR檢測HVEM蛋白的生物學(xué)功能；通過對比常溫和低溫對腺病毒轉(zhuǎn)染實(shí)體臟器效率的影響，并觀測目的基因在心臟等實(shí)體臟器中的表達(dá)；改良并穩(wěn)定建立同種異體小鼠頸部異位心臟移植模型，應(yīng)用小鼠異位心臟移植模型平臺觀察攜帶HVEM突變體基因腺病毒對小鼠心臟移植物存活的影響。結(jié)果I成功構(gòu)建了含有HVEM突變體的重組腺病毒載體；II該重組腺病毒能成功地使靶細(xì)胞表達(dá)HVEM突變體蛋白，并且具有相應(yīng)的生物學(xué)功能。III重組后豫病毒能有效轉(zhuǎn)染染供體小鼠心臟。IV使用攜帶HVEM突變體基因腺病毒感染供體小鼠心臟，能有效減輕移植后急性排斥反應(yīng)，以及能顯著延長移植心的存活時間。結(jié)論在本研究中，成功構(gòu)建了表達(dá)HVEM重組腺病毒載體；使用攜帶HVEM基因腺病毒感染供體小鼠心臟，能有效減輕移植后急性排斥反應(yīng)，以及能顯著延長移植心臟的存活。

簡介：分類號R5441密級公開單位代碼10427學(xué)號2011030484磨。匆夕學(xué)碩士學(xué)位論文高血壓患者認(rèn)知功能障礙的事件相關(guān)電位研究研究生姓名司翠平導(dǎo)師姓名學(xué)科領(lǐng)域閏中瑞主任醫(yī)師內(nèi)科學(xué)所在學(xué)院未墨森矗醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院’。一’申請學(xué)位級別臨床醫(yī)學(xué)碩士答辯時間2014年5月研究生導(dǎo)師簡介閆中瑞，男，1965年07月出生，主任醫(yī)師、教授，學(xué)科帶頭人，碩士生導(dǎo)師。1987年畢業(yè)于山東醫(yī)科大學(xué)醫(yī)療系，2009年獲得山東中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合臨床專業(yè)碩士學(xué)位。主要研究方向?yàn)槔夏暾J(rèn)知障礙、高血壓病與腦血管病。衛(wèi)計委腦卒中篩查與防治基地醫(yī)院專家委員會常委，山東省醫(yī)學(xué)會神經(jīng)內(nèi)科專業(yè)委員會委員，山東省醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)內(nèi)科專業(yè)委員會常委，濟(jì)寧市醫(yī)學(xué)會神經(jīng)內(nèi)科專業(yè)委員會及腦血管病專業(yè)委員主任委員。曾榮獲濟(jì)寧市首屆有突出貢獻(xiàn)的中青年專家、首屆濟(jì)寧市名醫(yī)、山東省十佳優(yōu)秀醫(yī)師等。目前主持瑞典卡羅林斯卡醫(yī)學(xué)院老年病研究基金課題1項、國家基金科研項目3項、中華醫(yī)學(xué)會癡呆專項1項及省級科研項目4項，參與完成國家十二五科技支撐計劃2項?？蒲谐晒啻潍@獎，發(fā)表國內(nèi)外論著50余篇，2013年發(fā)表SCI論文8篇。課題指導(dǎo)小組成員任長杰，男，1969年04月出生，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，1992年7月泰山醫(yī)學(xué)院本科畢業(yè)，主要從事臨床心臟病學(xué)、高血壓病及介入心臟病研究。濟(jì)寧市介入心臟病專業(yè)委員會副主任委員，濟(jì)寧市高血壓病專業(yè)委員會副主任委員，第八屆濟(jì)寧市優(yōu)秀青年科技人才，榮獲第五屆濟(jì)寧市青年科技獎，榮獲全市衛(wèi)生系統(tǒng)先進(jìn)個人，多次榮獲濟(jì)寧市優(yōu)秀保健專家。在省級以上核心期刊發(fā)表論著20余篇，撰寫醫(yī)學(xué)專著3部。開展臨床科研課題6項，分別獲得濟(jì)寧市科技進(jìn)步一等獎2項、二等獎2項，三等獎L項。王海明，男，1967年08月出生，濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科主任醫(yī)師，教授，碩士生導(dǎo)師，院長辦公室主任，研究生管理辦公室主任。1990年本科畢業(yè)于山東醫(yī)科大學(xué)，2003年碩士畢業(yè)于山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，主要研究方向?yàn)樾呐K病學(xué)、高血壓病、冠脈介入治療等。在國家核心期刊發(fā)表發(fā)表論文20余篇，著作4部，獲市科技進(jìn)步二等獎2項。

簡介：目的通過對目前常用的乙型肝炎檢測指標(biāo)，即HBV前S1抗原、前S1抗體、前S2抗原、前S2抗體、HBSAG、抗HBS、HBEAG、抗HBE、抗HBC、HBVDNA及肝功能的檢測結(jié)果的比較分析，探討前S1抗原、前S1抗體、前S2抗原、前S2抗體、HBV五項指標(biāo)和DNA及肝功之間的相互關(guān)系及臨床意義。方法選擇菏澤市立醫(yī)院傳染科門診及住院病房急性乙肝和慢性乙肝患者（病程超過6個月、大三陽或小三陽）各30例，分別于初診時、3個月后及6個月后收集血清，檢測其HBVDNA、乙肝五項指標(biāo)（HBSAG、HBSAB、HBEAG、HBEAB、HBCAB）、前S1抗原和抗體PRES1AG、PRES1AB、前S2抗原和抗體PRES2AG、PRES2AB及ALT觀察其各項指標(biāo)變化。PRES1AG、PRES1AB、PRES2AG、PRES2AB、乙肝五項指標(biāo)檢查均采用ELISA法，按試劑盒的要求及有關(guān)程序進(jìn)行操作，結(jié)果判定嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行。HBVDNA檢測用實(shí)時熒光進(jìn)行定量分析。肝功檢測采用全自動生化分析儀。采用SPSS130軟件對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，陽性率的比較采用配對卡方檢驗(yàn)。結(jié)果1急性乙肝檢測結(jié)果。初次檢測中，急性乙肝患者DNA、前S1抗原、前S2抗原、HBSAG、HBEAG陽性率均為100％，完全一致。初檢后三個月二次采血檢測，DNA陽性率為933％，較初次檢測稍有降低，前S1抗原、前S2抗原、HBSAG、HBEAG的陽性率下降明顯，分別為300％、367％、500％、133％，與DNA檢測比較，前S1抗原、前S2抗原、HBSAG、HBEAG的陽性率與DNA陽性率的差別均有統(tǒng)計學(xué)意義；PRES1AB、PRES2AB、抗HBS、抗HBE的陽性率分別增高為70％、60％、50％和67％。表明隨著病程的進(jìn)展，機(jī)體的抗乙肝病毒免疫應(yīng)答遂步建立，病毒載量在下降，而各種抗原的相應(yīng)抗體的出現(xiàn)，影響到了抗原檢出的陽性率。而將各對抗原、抗體的陽性率合并，總陽性率與DNA陽性率接近，表明此階段如用乙肝病毒的抗原或抗體作為檢測指標(biāo)，需二者同時檢查才能更準(zhǔn)確地反映病人的乙肝病毒感染情況。第三次檢測中，各項檢測指標(biāo)的陽性率均呈明顯下降，DNA陽性率為300％，前S1抗原、前S2抗原、HBSAG、HBEAG的陽性率分別為33％，67％，233％，67％，與DNA檢測比較，前S1抗原、前S2抗原、HBEAG的陽性率與DNA陽性率之間差別有統(tǒng)計學(xué)意義，表明隨著病程的進(jìn)展，機(jī)體的抗乙肝病毒免疫應(yīng)答遂步加強(qiáng)和抗病毒藥物作用，病毒載量在繼續(xù)下降，部分患者DNA已降至不可檢出水平，而抗體的增高，對前S1抗原、前S2抗原檢出率的干擾影響，使得此階段此二項指標(biāo)再作為病毒感染的指標(biāo)已不適宜。HBSAG與DNA陽性率之間差別雖無統(tǒng)計學(xué)意義，但有兩例DNA陽性的樣本HBSAG檢測結(jié)果陰性，后者的陽性率低于前者。PRES1AB、PRES2AB、抗HBS的陽性率分別增高為97％、86％、73％，結(jié)合樣本DNA和肝功檢測的結(jié)果來看，這些指標(biāo)在此階段作為機(jī)體抗乙肝免疫的指標(biāo)或預(yù)后推測的指標(biāo)可能更有意義。抗HBE0％的完全消失原因和意義我們還未能作出滿意的解釋。大三陽和小三陽是臨床HBV檢測的常用指標(biāo)，通過對急性乙肝上述檢測結(jié)果中大、小三陽合并陽性率的計算并與DNA陽性率的比較，我們發(fā)現(xiàn)，急性乙肝初次檢測中，大三陽和小三陽的陽性率為100％，DNA的陽性率為100％，二者具有一致性，在第二次檢測中，大三陽和小三陽的合并陽性率為166％，DNA的陽性率為934％，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理后，P＜005，差別有統(tǒng)計學(xué)意義，第三次檢測中，大三陽和小三陽的合并陽性率為33％，DNA的陽性率為30％，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理后，P＜005，有統(tǒng)計學(xué)意義。表明隨著病程的延長，DNA檢測要比大、小三陽的檢測更有意義。2慢性乙肝檢測結(jié)果慢性乙肝患者標(biāo)本初次檢測中，DNA陽性率為733％，前S1抗原、前S2抗原、HBSAG、HBEAG的陽性率分別為900％、933％、100％、600％，與DNA檢測比較，前S1抗原、前S2抗原、HBSAG、HBEAG陽性率與DNA陽性率之間差別均無統(tǒng)計學(xué)意義；第二次檢測中，DNA陽性率為633％，前S1抗原、前S2抗原、HBSAG、HBEAG的陽性率分別為733％、633％、867％、和333％，與DNA檢測相比，前S1抗原、前S2抗原、HBSAG陽性率與DNA陽性率之間，差別均無統(tǒng)計學(xué)意義，HBEAG陽性率與DNA陽性率之間差別有統(tǒng)計學(xué)意義；第三次檢測中，DNA陽性率為400％，前S1抗原、前S2抗原、HBSAG、HBEAG的陽性率分別為333％、267％、767％、133％，與DNA檢測比較，前S1抗原、前S2抗原陽性率與DNA陽性率之間，差別無統(tǒng)計學(xué)意義，HBSAG、HBEAG的陽性率與DNA陽性率之間，差別有統(tǒng)計學(xué)意義。計算慢性乙肝患者大三陽和小三陽的合并陽性率與DNA陽性率的比較，結(jié)果可見，慢性乙肝初次檢測中，大三陽和小三陽的合并陽性率為100％，DNA的陽性率為733％，在第二次檢測中，大三陽和小三陽的合并陽性率為466％，DNA的陽性率為633％，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理后，P＞005，差別無統(tǒng)計學(xué)意義，第三次檢測中，大三陽和小三陽的陽性率為30％，DNA的陽性率為40％，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理后，P＞005，無統(tǒng)計學(xué)意義。這些結(jié)果提示，在慢性乙肝患者，各項乙肝檢查指標(biāo)結(jié)果多變，全面檢查方可減少漏診出現(xiàn)。結(jié)論在急性乙肝早期，HBVDNA的檢測可用為判斷病毒復(fù)制和患者傳染性的金標(biāo)準(zhǔn)，前S1抗原、前S2抗原、HBSAG、HBEAG的檢測陽性率在此階段與DNA檢測高度一致，可作為DNA檢測的替代檢測方法，在不具備DNA檢測的基層醫(yī)療單位不失為一項實(shí)用選擇。在急性乙肝晚期階段，HBVDNA的檢測仍是陽性率最高的檢測手段，可用為判斷病毒復(fù)制和患者傳染性的金標(biāo)準(zhǔn)，而其它乙肝血清學(xué)檢測的結(jié)果作為病毒復(fù)制和患者傳染性指標(biāo)，單一指標(biāo)的陽性率均低于DNA檢測，需多項指標(biāo)綜合考慮才能得出較可靠結(jié)論，使在病情和預(yù)后的判斷上可能更具意義。在慢性乙肝患者的不同時期，現(xiàn)有的各項乙肝檢測方法均未表現(xiàn)出非常明顯的優(yōu)勢，綜合采用多項檢測指標(biāo)可能是減少漏診的最隹選擇。

簡介：乙型肝炎病毒（HBV）是目前已知的最小動物嗜肝DNA病毒，其基因組結(jié)構(gòu)緊湊、功能高效。人類感染HBV后可引起急慢性肝炎，HBVDNA編碼的多種結(jié)構(gòu)蛋白和功能蛋白抗原性很強(qiáng)，能激發(fā)宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫應(yīng)答反應(yīng)而導(dǎo)致肝損傷，最終轉(zhuǎn)化為肝硬化和原發(fā)性干細(xì)胞癌。目前治療乙型肝炎多采用抗病毒、改善肝功能和免疫調(diào)節(jié)等聯(lián)合治療的方法，至今還沒有研究出一種能將HBV從患者體內(nèi)清除的特效藥。國內(nèi)外公認(rèn)的如A干擾素（IFNA）和拉米夫定（3TC）等核苷類藥物對HBV有較好的抑制作用，但長時間用藥副作用大且產(chǎn)生耐藥株，停藥后易復(fù)發(fā)。我國具有幾千年利用中草藥治療疾病的經(jīng)驗(yàn)，這就為從天然產(chǎn)物和傳統(tǒng)藥用植物中篩選高效低毒的抗HBV藥物或先導(dǎo)化合物提供一條有效的途徑。本論文通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)和黎族藥志，從中選取20種清熱、解毒、保肝和民間用于治療慢性肝炎的藥用植物。60％乙醇回流提取得到該20種藥用植物的醇提物，以HEPG22215細(xì)胞株為體外抗HBV活性篩選模型，用MTT法檢測醇提物的細(xì)胞毒性；以ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBV的HBSAG和HBEAG的滴度，最后以醇提物對HEPG22215細(xì)胞HBEAG分泌的抑制作用作為抗HBV活性篩選的指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，最大無毒濃度時田基黃醇提物對HEPG22215細(xì)胞HBEAG分泌的抑制率最高，即為6906，IC50值為1457ΜGML，治療指數(shù)TI2。田基黃醇提物用水分散，依次用氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水部位，用MTT和ELISA法對這四個部位進(jìn)行體外抗HBV活性的評價，其中乙酸乙酯部位抗HBV活性最強(qiáng)，最大無毒濃度時對HEPG22215細(xì)胞HBEAG分泌的抑制率為6346，IC50為11107ΜGML，TI2。采用硅膠、SEPHADEXLH20及薄層色譜等方法對田基黃醇提物進(jìn)行進(jìn)一步活性追蹤分離。從田基黃乙酸乙酯的活性部位分離得到4個單體化合物。根據(jù)理化性質(zhì)、1HNMR和13CNMR波譜數(shù)據(jù)分析鑒定了這4個化合物的結(jié)構(gòu)，分別為槲皮素7O鼠李糖苷（VINCETOXICOSIDEB）、（2R，3R）雙氫槲皮素7OΑL鼠李糖苷（（2R3R）TAXIFOLIN7OΑLRHAMNOSIDE）、槲皮苷（QUERCITRIN）和1，3，6，7四羥基呫噸酮（1，3，6，7TETRAHYDXXYNAHTNONI）。其中化合物4是體外抗乙型肝炎病毒活性最高的化合物，其對HEPG22215細(xì)胞HBEAG分泌的抑制率最高，為6766，IC50值為4025ΜGML，治療指數(shù)TI2。本論文只對本次實(shí)驗(yàn)體外篩選的田基黃醇提物及化合物4和以前實(shí)驗(yàn)室體外篩選出來的活性較高的金蕎麥、石花醇提物進(jìn)行了初步定性的體內(nèi)抗HBV活性的評價。北京鴨感染DHBV第7天開始給藥，醇提物的高劑量組為26MGKG，低劑量組為65MGKG，化合物4的高劑量組為80MGKG，低劑量組為20MGKG，一天2次，連續(xù)給藥10天。結(jié)果顯示，石花和田基黃醇提物高劑量組在感染DHBV的北京鴨體內(nèi)模型上也有較好的抗病毒作用，且停藥后幾乎不反彈；金蕎麥醇提物對HBVDNA有一定抑制作用，且易反彈；而化合物4對HBVDNA無直接抑制作用。1，3，6，7四羥基咕噸酮（1367TETRAHYDXXYNAHTNONI）體外抗HBV活性和石花醇提物體內(nèi)抗DHBV活性為本實(shí)驗(yàn)首次發(fā)現(xiàn)，具有進(jìn)一步研究開發(fā)的潛力。

簡介：【背景】漢灘病毒HANTAANVIRUSHTNV在我國主要引起腎綜合征出血熱HEMRHAGICFEVERWITHRENALSYNDROMEHFRS該病危害極為嚴(yán)重目前尚缺乏特效的治療藥物主要使用疫苗進(jìn)行預(yù)防。目前我國已成功研制HFRS滅活疫苗其推廣使用對預(yù)防HFRS的發(fā)生和流行起到了積極作用。但該類疫苗仍存在一些問題主要是不能有效刺激細(xì)胞免疫應(yīng)答誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的能力也較弱抗體滴度不高等因而研發(fā)新型的HFRS疫苗成為當(dāng)務(wù)之急。近年來病毒樣顆粒VIRUSLIKEPARTICLEVLP疫苗由于其安全性好和免疫原性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)使得其成為目前最有發(fā)展前景的新型基因工程候選疫苗之一。同時研究發(fā)現(xiàn)通過對VLP進(jìn)行修飾將細(xì)胞因子錨定到VLP表面使其成為嵌合VLP可以使其具有更好的免疫原性。本研究通過桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)BACULOVIRUSEXPRESSIONVECTSYSTEMBEVS分別表達(dá)HTNV包膜糖蛋白GLYCOPROTEINGP和核衣殼蛋白NUCLEOCAPSIDPROTEINNP來構(gòu)建HTNVVLP同時表達(dá)糖基磷脂酰肌醇GLYCOSYLPHOSPHATIDYLINOSITOLGPI錨定的粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子GRANULOCYTEMACROPHAGECOLONYSTIMULATINGFACTGMCSF或CD40配體CD40LIGCD40L使之修飾在VLP表面獲得了兩種HTNV嵌合VLPVLPGMCSFVLPCD40L并對其生物學(xué)活性和免疫學(xué)特性進(jìn)行了研究以期為進(jìn)一步研制HFRS新型基因工程疫苗奠定理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。【方法】將HTNV76118株編碼GP的M基因和編碼NP的S基因以及小鼠的GPIGMCSF以下簡稱GMCSF、CD40L基因分別克隆入BEVS中的PFASTBACTMDUAL轉(zhuǎn)移載體中構(gòu)建各重組桿狀病毒RECOMBINANTBACULOVIRUSRBV轉(zhuǎn)移載體PFASTBACTMDUALM、PFASTBACTMDUALS、PFASTBACTMDUALGMCSF、PFASTBACTMDUALCD40L酶切后瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行鑒定并進(jìn)行序列測定。將構(gòu)建好的各RBV轉(zhuǎn)移載體分別轉(zhuǎn)化大腸埃希菌ESCHERICHIACOLIECOLIDH10BACTM后提取各RBV桿粒即BACM、BACS、BACGMCSF、BACCD40L并利用PCR進(jìn)行鑒定。將構(gòu)建好的各RBV桿粒轉(zhuǎn)染SF9昆蟲細(xì)胞后獲得各RBV分別命名為RBVM、RBVS、RBVGMCSF、RBVCD40L。取各RBV感染SF9昆蟲細(xì)胞利用間接免疫熒光法INDIRECTIMMUNOFLUESCENCEASSAYIFA檢測各目的蛋白的表達(dá)。將RBVM、RBVS以及RBVGMCSF或RBVCD40L通過共感染SF9昆蟲細(xì)胞的方式分別制備各組VLPVLP、VLPGMCSF、VLPCD40L在電鏡下觀察SF9昆蟲細(xì)胞內(nèi)及培養(yǎng)上清中的各組VLP的組裝情況。分別大量制備和收集各組VLP通過蔗糖密度梯度離心法純化各組VLP并利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ENZYMELINKEDIMMUNOADSDENTASSAYELISA、十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰氨凝膠電泳SODIUMDODECYLSULFATEPOLYACRYLAEGELELECTROPHESISSDSPAGE、蛋白質(zhì)印跡法WESTERNBLOTWB、免疫共沉淀COIMMUNOPRECIPITATIONCOIP等方法進(jìn)行鑒定。在上述工作的基礎(chǔ)上研究分析了各組VLP的生物學(xué)活性及免疫學(xué)特性。通過流式細(xì)胞術(shù)FLOWCYTOMETRYFCM分別檢測了各組VLP促小鼠骨髓細(xì)胞增殖能力、促小鼠骨髓細(xì)胞向樹突狀細(xì)胞DENDRITICCELLSDC分化能力以及促B淋巴細(xì)胞活化能力。將各組VLP通過皮下注射途徑免疫C57BL6小鼠以添加外源重組細(xì)胞因子的VLPVLPGMCSF、VLPCD40L、HFRS滅活疫苗以及PBS為對照。通過ELISA及微量細(xì)胞中和試驗(yàn)分別檢測免疫后各組小鼠血清中抗HTNVGP及NP的特異性抗體及中和抗體的滴度以反映各組小鼠的體液免疫應(yīng)答的情況通過酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)ENZYMELINKEDIMMUNOSPOTASSAYELISPOT及細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞CYTOTOXICTLYMPHOCYTECTL殺傷試驗(yàn)分別檢測免疫后各組小鼠脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的水平以及其CTL殺傷活性以反映各組小鼠的細(xì)胞免疫應(yīng)答的情況取HTNV76118株通過肌肉注射途徑接種各組免疫小鼠通過ELISA及實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)QUANTITATIVEREALTIMEPOLYMERASECHAINREACTIONQRTPCR分別檢測接種后各組免疫小鼠臟器組織中HTNV抗原及核酸通過蘇木精伊紅HEMATOXYLINEOSINHE染色各組小鼠臟器組織并進(jìn)行鏡檢觀察接種后各組免疫小鼠臟器組織的病理學(xué)變化以評價各組VLP預(yù)防接種對HTNV感染的保護(hù)作用。【結(jié)果】將各目的片段克隆入BEVS轉(zhuǎn)移載體后酶切鑒定結(jié)果顯示各RBV轉(zhuǎn)移載體均切出與相應(yīng)目的基因大小相一致的核酸條帶測序結(jié)果顯示各目的基因序列正確無突變產(chǎn)生表明成功地構(gòu)建了各RBV轉(zhuǎn)移載體。對重組桿粒PCR鑒定結(jié)果顯示各RBV桿粒中均擴(kuò)增出與預(yù)期大小相一致的核酸條帶證實(shí)各組RBV桿粒構(gòu)建正確。將各重組桿粒轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞獲得RBV感染細(xì)胞后IFA檢測結(jié)果顯示各組RBV均可表達(dá)相應(yīng)的目的蛋白。將各RBV共感染昆蟲細(xì)胞后電鏡觀察結(jié)果顯示在昆蟲細(xì)胞內(nèi)及培養(yǎng)上清中均可清楚地觀察到直徑大小約為80220NM的顆粒初步判定為各組VLP。大量制備各組VLP利用蔗糖密度梯度離心進(jìn)行純化離心結(jié)束后能夠清晰的觀察到各組VLP的聚集帶。SDSPAGE及WB檢測各組VLP結(jié)果發(fā)現(xiàn)各組VLP中均含有與相應(yīng)目的蛋白大小相一致的特異性蛋白條帶。ELISA及COIP檢測結(jié)果顯示在嵌合VLP中GMCSF或CD40L均成功地錨定在VLP上。對各VLP進(jìn)行生物學(xué)活性檢測的結(jié)果顯示各組VLP均可刺激小鼠骨髓細(xì)胞的增殖和向DC的分化并有效地促進(jìn)了小鼠B淋巴細(xì)胞的活化且VLPGMCSF的刺激能力要強(qiáng)于VLPCD40L和VLPP005。在HTNVGP或NP刺激下與PBS組相比各組VLP均可增強(qiáng)小鼠脾細(xì)胞的殺傷活性且隨著效靶比EFFECTCELLTARGETCELLET的升高而增強(qiáng)。VLPCD40L、VLPGMCSF組小鼠脾細(xì)胞殺傷活性在不同ET時均高于VLP組、滅活疫苗組以及相應(yīng)的外源細(xì)胞因子添加組其中VLPCD40L組殺傷活性最高P免疫小鼠保護(hù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示PBS對照組小鼠的肝臟、脾臟和腎臟組織中的HTNV抗原檢測均為陽性而其他各實(shí)驗(yàn)組以及正常對照組小鼠的所有臟器組織均未檢測到HTNV抗原。RTPCR檢測各組小鼠臟器中HTNV核酸的結(jié)果與病毒抗原結(jié)果結(jié)果相一致。HE染色鏡檢結(jié)果顯示PBS組小鼠的脾臟中出現(xiàn)了彌漫性出血淋巴細(xì)胞彌漫性浸潤以及白髓增多等病理學(xué)變化而其他各實(shí)驗(yàn)組以及正常對照組小鼠的所有臟器組織均未觀察到病理學(xué)變化。上述結(jié)果提示HTNV能夠感染未經(jīng)免疫的C57BL6小鼠而經(jīng)各VLP免疫后能夠保護(hù)小鼠免受HTNV的攻擊?！窘Y(jié)論】本研究通過BEVS表達(dá)系統(tǒng)獲得了嵌合有GMCSF或CD40L的HTNVVLP各嵌合VLP均具有有良好的生物學(xué)活性同時嵌合在VLP表面的CD40L或GMCSF有效地增強(qiáng)了其刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的能力且各項指標(biāo)均優(yōu)于HFRS滅活疫苗組。免疫小鼠保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)嵌合VLP可以有效地保護(hù)C57BL6小鼠免受HTNV的攻擊。本研究為進(jìn)一步研制HFRS新型基因工程疫苗奠定了良好的理論、實(shí)驗(yàn)和物質(zhì)基礎(chǔ)。

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簡介：中南大學(xué)博士學(xué)位論文治療不敏感性抑郁癥的臨床特征、認(rèn)知功能與彌散張量成像的研究姓名郭文斌申請學(xué)位級別博士專業(yè)精神病與精神衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師趙靖平20070501中南大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要治療前后在這些測驗(yàn)上的能力大致相當(dāng)。治療前后治療不敏感性抑郁癥在HANOI塔的計劃時間、執(zhí)行時間均長于治療敏感性抑郁癥。5兩組患者治療后、ⅣCST、詞語流暢性作業(yè)的各個指標(biāo)均有改善，但與正常對照仍存在差異，可能具有素質(zhì)性特征；治療后TMT、河內(nèi)塔的各個指標(biāo)有改善，達(dá)到正常對照水平，可能具有狀態(tài)性特征。6總病程、治療前HANOI塔計劃時間、TMTA提筆次數(shù)和VF的重復(fù)數(shù)四個指標(biāo)進(jìn)入治療不敏感性LOGISTIC回歸分析方程。7不同性別、共病焦慮、總病程長短的抑郁癥患者的癥狀、認(rèn)知功能存在差異。結(jié)論1治療不敏感性抑郁癥患者治療前精神性焦慮癥狀較輕，治療4周后遺留較多抑郁焦慮的癥狀。2治療不敏感性抑郁癥患者存在以額葉功能障礙為主的認(rèn)知功能障礙，總病程、治療前HANOI塔計劃時間、TMTA提筆次數(shù)和VF的重復(fù)數(shù)是治療不敏感性的四個預(yù)測指標(biāo)。3性別、共病焦慮、病程對抑郁癥患者的癥狀和認(rèn)知功能有影響。關(guān)鍵詞精神病學(xué)抑郁癥抗抑郁劑治療反應(yīng)認(rèn)知功能第二章難治性抑郁癥腦白質(zhì)纖維的比較研究目的運(yùn)用能夠提示自質(zhì)纖維WHITEMATTERWM完整性的彌散張量成像DIFFUSIONTENSORIMAGING，DTI技術(shù)，探討未服藥的首發(fā)治療敏感性的抑郁癥及難治性抑郁癥患者全腦白質(zhì)纖維是否受到損害，通過比較試圖找出難治性抑郁癥治療效果欠佳的依據(jù)之一。Ⅱ

簡介：東南大學(xué)碩士學(xué)位論文遺忘型輕度認(rèn)知損害與血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因多態(tài)性及其血清水平關(guān)系研究姓名鄧玲瓏申請學(xué)位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師張志珺20080508摘要型組。AMCI組血清ACE活力與聽覺詞語記憶測試延遲回憶得分呈顯著負(fù)相關(guān)嚴(yán)一0230、P0029。結(jié)論ACE基因I／D多態(tài)性與AMCI及血清ACE活力呈基因量效關(guān)系，D等位基因可能為AMCI的發(fā)病危險因子，AMCI認(rèn)知障礙可能與高血清ACE活力水平有關(guān)。關(guān)鍵詞遺忘型輕度認(rèn)知損害；基因多態(tài)性；血管緊張素轉(zhuǎn)換酶III