N-乙酰半胱氨酸對(duì)糖尿病大鼠腎臟足細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　足細(xì)胞即腎小囊臟層上皮細(xì)胞，是一種獨(dú)特的、終末分化細(xì)胞。足細(xì)胞作為腎小球?yàn)V過(guò)屏障結(jié)構(gòu)的重要組成部分，由于其特殊結(jié)構(gòu)和獨(dú)特膜蛋白分子決定了其在腎小球中的重要地位，也決定了其損傷在糖尿病腎病發(fā)生與發(fā)展中扮演重要角色。目前多項(xiàng)研究顯示足細(xì)胞數(shù)量和密度、足細(xì)胞裂孔隔膜及細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)改變、足細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)分子及信號(hào)通路的異常激活均與糖尿病腎病密切相關(guān)。本研究通過(guò)動(dòng)態(tài)觀察足細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白WT1，足細(xì)胞裂孔隔膜的關(guān)鍵分子之一nep

2、hrin，由足細(xì)胞分泌在糖尿病腎病中發(fā)揮重要作用的VEGF蛋白表達(dá)水平，并給予NAC進(jìn)行干預(yù)，探討NAC對(duì)于糖尿病大鼠腎臟足細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制。
　　方法:
　　1.以Wistar大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物建立糖尿病模型（一次性STZ尾靜脈注射）。隨機(jī)分為正常、糖尿病及干預(yù)組，觀察時(shí)間為6周和12周。
　　2.檢測(cè)腎功能、尿蛋白;光鏡下觀察大鼠腎臟組織病理學(xué)改變，通過(guò)免疫組化法觀察nephrin、WT1及VEGF蛋白表達(dá)水平，通過(guò)We

3、stern blot法檢測(cè)足細(xì)胞裂孔隔膜蛋白nephrin表達(dá)水平。
　　3.應(yīng)用Image-Pro Plus6.0軟件分析免疫組化圖像平均IOD值，應(yīng)用Image J分析Western blot圖像目標(biāo)帶光密度值。各組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析(ANOVA)。
　　結(jié)果:
　　1.成功建立糖尿病大鼠模型。
　　2.與同期對(duì)照組相比，糖尿病組及干預(yù)組大鼠血糖明顯升高，體重顯著下降，尿量明顯增加。光鏡下可見(jiàn)糖尿病

4、組大鼠腎小球體積增大，部分腎小球萎縮;系膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)增生，系膜區(qū)明顯增寬，甚至彌漫性系膜硬化;大量腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生空泡變性，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以上表現(xiàn)符合糖尿病腎病病理表現(xiàn)。NAC干預(yù)組與同期糖尿病組比較，系膜細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)增生減輕，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少。
　　3.糖尿病組及干預(yù)組大鼠腎臟nephrin表達(dá)水平顯著低于同期對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與同期糖尿病組相比，干預(yù)組nephrin表達(dá)水平有所升高，差異有統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)意義(P＜0.05)。免疫組化染色可見(jiàn)，與正常組相比較，同期糖尿病組及干預(yù)組棕黃色物質(zhì)顏色變淺，排列方式發(fā)生改變。經(jīng)NAC干預(yù)后免疫組化染色顏色有所加深。
　　4.糖尿病組及干預(yù)組大鼠腎臟WT1免疫組化染色較同期對(duì)照組顏色變淡，平均IOD值明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。經(jīng)NAC干預(yù)后WT1免疫組化染色有所加深，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.與同期對(duì)照組相比，糖尿病組及干預(yù)組大鼠腎臟VEGF表達(dá)水

6、平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。糖尿病組及干預(yù)組大鼠腎臟VEGF免疫組化染色著色明顯增加。與同期糖尿病組相比，干預(yù)組大鼠腎臟VEGF表達(dá)水平有所下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，免疫組化染色后可見(jiàn)著色變淡。
　　結(jié)論:
　　1.成功建立糖尿病腎病大鼠模型，腎功能異常的同時(shí)出現(xiàn)腎組織nephrin、WT1表達(dá)減少，VEGF表達(dá)增加。
　　2.NAC治療可以減少尿蛋白排泄，具有腎臟保護(hù)作用。