己酮可可堿處理對擬衰老大鼠行為改變的改善作用.pdf

1、衰老是人體隨著時(shí)間的推移發(fā)生的一種自然過程，主要表現(xiàn)為機(jī)體結(jié)構(gòu)的退行性變和器官功能的退化，常伴有運(yùn)動(dòng)、記憶能力的減弱，嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量，如何預(yù)防或緩解衰老機(jī)體的相關(guān)改變是當(dāng)前研究的一個(gè)焦點(diǎn)問題。
　　目前的抗衰老藥物效果都不甚理想，有研究發(fā)現(xiàn)己酮可可堿可改善自然衰老大鼠模型和東莨菪堿擬衰老小鼠模型的學(xué)習(xí)記憶障礙。己酮可可堿能否改善D-半乳糖擬衰老大鼠模型的曠場行為尚無研究顯示。因此，本實(shí)驗(yàn)研究中采用了D-半乳糖誘發(fā)擬衰老大

2、鼠模型，通過口服給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不同劑量的己酮可可堿，觀察己酮可可堿處理對D-半乳糖擬衰老大鼠模型體重增長的影響；通過曠場實(shí)驗(yàn)檢測實(shí)驗(yàn)大鼠相關(guān)曠場行為參數(shù)的影響，觀察己酮可可堿處理對D-半乳糖擬衰老大鼠模型行為活動(dòng)的改變；通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)檢測實(shí)驗(yàn)大鼠腦內(nèi)DA、DOPAC及HVA含量的變化，分析己酮可可堿處理對D-半乳糖擬衰老大鼠模型腦內(nèi)DA能神經(jīng)元功能活動(dòng)的作用，探討己酮可可堿處理對D-半乳糖擬衰老大鼠模型曠場行為

3、的作用的可能機(jī)制，期望為衰老等神經(jīng)退行性疾病的治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的：觀察己酮可可堿處理對D-半乳糖擬衰老大鼠曠場行為和腦內(nèi)DA能神經(jīng)元功能活動(dòng)的影響，深入探討己酮可可堿處理對D-半乳糖擬衰老大鼠模型曠場行為的作用及其機(jī)制，期望為衰老等神經(jīng)退行性疾病的治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：將40只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為5個(gè)實(shí)驗(yàn)組：空白對照組（CON， n=8），D-半乳糖擬衰老組（D-galactose，n=

4、8），D-半乳糖+10mg/kg己酮可可堿給藥組（PTX10mg，n=8），D-半乳糖+30mg/kg己酮可可堿給藥組（PTX30mg，n=8）和D-半乳糖+50mg/kg己酮可可堿給藥組（PTX50mg， n=8）。
　　從3月齡開始（day0），D-galactose處理的四個(gè)實(shí)驗(yàn)組和CON組的大鼠分別連續(xù)腹腔注射D-半乳糖（150mg/kg/day）或等體積生理鹽水57天；從3月齡開始（day0）PTX10mg組、PTX30

5、mg組和PTX50mg組的大鼠接受D-galactose處理的同時(shí)，分別接受10mg/kg、30mg/kg或50mg/kg劑量的Ptx連續(xù)處理57天。每周稱量實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重來矯正給藥劑量，實(shí)驗(yàn)大鼠在處死前最后一次稱重減去實(shí)驗(yàn)開始后第一次測量的體重?cái)?shù)據(jù)用作試驗(yàn)中對體重的分析。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)第55天、56天和57天進(jìn)行曠場行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)58天處死大鼠，迅速取腦通過LC-MS/MS檢測DA及其代謝產(chǎn)物的含量。
　　結(jié)果：
　　1、

6、曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　1.1、靜止聞嗅行為（Immobile sniffing）
　　與CON組大鼠相比，D-galactose組大鼠Immobile sniffing次數(shù)明顯減少（P<0.01）；與D-galactose組大鼠相比，PTX50mg組大鼠靜止聞嗅次數(shù)明顯增多（P<0.01）。
　　1.2、探索行為
　　與CON組相比，D-galactose組大鼠Walking次數(shù)明顯減少（P<0.01）；與D-gal

7、actose組大鼠相比，PTX30mg組和PTX50mg組大鼠Walking次數(shù)明顯增多（P<0.01）；與PTX10mg組大鼠相比， PTX50mg組大鼠Walking次數(shù)明顯增多（P<0.01）。
　　與CON組相比， D-galactose組大鼠Climbing次數(shù)明顯減少（P<0.01）；與D-galactose組大鼠相比，PTX10mg大鼠的Climbing次數(shù)明顯增加（P<0.01）；與PTX10mg組大鼠相比，PTX

8、50mg組大鼠Climbing次數(shù)明顯增多（P<0.01），但仍低于正常水平（P<0.05）。
　　與CON組相比，D-galactose組大鼠Rearing次數(shù)明顯減少（P<0.01）；與D-galactose組大鼠相比，PTX10mg大鼠的Rearing次數(shù)明顯增加（P<0.05）；與PTX10mg組或PTX30mg組大鼠相比，PTX50mg組大鼠Rearing次數(shù)明顯增多（P<0.05）。
　　與CON組相比，D-ga

9、lactose組大鼠Sniffing次數(shù)明顯減少（P<0.01）；與D-galactose組大鼠相比，PTX30mg組和PTX50mg組大鼠Walking次數(shù)明顯增多（P<0.01）；與PTX10mg組大鼠相比，PTX50mg組大鼠Sniffing次數(shù)明顯增多（P<0.01）。
　　1.3、運(yùn)動(dòng)行為
　　與CON組相比，D-galactose組大鼠Vertical activity次數(shù)明顯減少（P<0.01）；與D-gala

10、ctose組大鼠相比，PTX10mg大鼠的Vertical activity次數(shù)明顯增加（P<0.01）；與PTX10mg組或PTX30mg組大鼠相比， PTX50mg組大鼠Vertical activity次數(shù)明顯增多（P<0.05）。
　　與CON組相比，D-galactose組大鼠Horizontal activity次數(shù)明顯減少（P<0.01）；與D-galactose組和PTX10mg大鼠相比，PTX30mg組大鼠Hor

11、izontal activity次數(shù)明顯增多（P<0.01）；與PTX30mg組大鼠相比， PTX50mg組大鼠Horizontal activity次數(shù)明顯增多（P<0.05），但仍低于正常水平（P<0.01）。
　　與CON組相比，D-galactose組大鼠的Total path length明顯減少（P<0.01）；與D-galactose組和PTX10mg大鼠相比，PTX30mg組大鼠的Total path length

12、明顯增加（P<0.01）；與PTX30mg組大鼠相比，PTX50mg組大鼠的Total path length明顯增多（P<0.01），但仍低于正常水平（P<0.01）。
　　1.4、理毛行為
　　與CON組相比， D-galactose組大鼠Grooming次數(shù)明顯減少（P<0.01）；與D-galactose組或PTX10mg組大鼠相比，PTX30mg組或PTX50mg組大鼠Grooming次數(shù)明顯增多（P<0.05）；

13、與PTX30mg組大鼠相比， PTX50mg大鼠的的Grooming次數(shù)無明顯增加（P>0.05），但存在增多的趨勢。
　　2、 LC-MS/MS檢測結(jié)果
　　2.1、 Ptx處理對擬衰老大鼠尾殼核DA及其代謝產(chǎn)物的影響
　　與CON組相比，D-galactose組大鼠DA含量明顯減少（P<0.01）；與D-galactose組大鼠相比，PTX10mg大鼠的DA含量明顯增加（P<0.05）；與PTX10mg組大鼠相比，

14、PTX30mg組大鼠DA含量明顯增加（P<0.05）；與PTX30mg組大鼠相比，PTX50mg組大鼠DA含量明顯增加（P<0.01）。
　　與CON組相比，D-galactose組大鼠DOPAC含量明顯減少（P<0.01）；與D-galactose組大鼠相比，PTX30mg組大鼠的DOPAC含量著增加（P<0.01）；與PTX30mg組大鼠相比，PTX50mg組大鼠DOPAC含量明顯增加（P<0.05）。
　　與CON組相

15、比，D-galactose組大鼠HVA含量明顯減少（P<0.01）；與D-galactose組或PTX10mg組大鼠相比，PTX50mg組大鼠HVA含量明顯增加（P<0.01）。
　　2.2、 Ptx處理對擬衰老大鼠伏核DA及其代謝產(chǎn)物的影響
　　與CON組相比，D-galactose組大鼠DA含量明顯減少（P<0.01）；與D-galactose組或PTX10mg組大鼠相比，PTX30mg組大鼠DA含量明顯增加（P<0.0

16、1）；PTX30mg組大鼠相比，PTX50mg組大鼠DA含量明顯增加（P<0.01）。
　　與CON組相比，D-galactose組大鼠DOPAC含量明顯減少（P<0.01）；與D-galactose組大鼠相比，PTX10mg大鼠的DOPAC含量明顯增加（P<0.05）；與PTX10mg組大鼠相比，PTX30mg大鼠的DOPAC含量明顯增加（P<0.05）；與PTX30mg組大鼠相比，PTX50mg大鼠的DOPAC含量明顯增加（P

17、<0.01），但仍低于正常水平（P>0.05）。
　　與CON組相比，D-galactose組大鼠HVA含量明顯減少（P<0.01）；與D-galactose組、PTX10mg組或PTX30mg組大鼠相比，PTX50mg組大鼠HVA含量明顯增加（P<0.05）。
　　結(jié)果顯示D-半乳糖顯著減低了大鼠伏核DA、DOPAC和HVA的含量，己酮可可堿處理增加了D-半乳糖擬衰老大鼠伏核DA、DOPAC和HVA的含量，具有一定劑量依賴