海參腦苷脂和海參磷脂對阿爾茲海默病的改善作用研究.pdf

1、阿爾茲海默病是一種常發(fā)于老年期的慢性進(jìn)行性神經(jīng)退行性疾病,表現(xiàn)為記憶力下降、認(rèn)知障礙等不可逆退化,病理學(xué)特征為神經(jīng)纖維纏結(jié)、老年斑以及神經(jīng)元凋亡等。阿爾茲海默病的發(fā)病機(jī)制還未完全清楚,目前已形成多種假說,近年來氧化應(yīng)激假說越來越受到關(guān)注。海參作為佐膳珍品,具有多種活性成分,如海參多糖、海參皂苷、海參腦苷脂、海參磷脂等,目前有關(guān)海參活性成分在神經(jīng)保護(hù)和腦功能方面的研究還鮮見報道。本實(shí)驗(yàn)分離提取了海參中的主要活性成分——海參多糖、海參皂苷、

2、海參腦苷脂和海參磷脂,建立體外模型評價了其對神經(jīng)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,在此基礎(chǔ)上利用動物模型進(jìn)一步評價了海參磷脂在神經(jīng)保護(hù)和腦功能方面的作用,并對其作用機(jī)制進(jìn)行了探討。主要研究結(jié)果如下:
　　本文首先對海參活性成分的神經(jīng)細(xì)胞毒性進(jìn)行了篩選,采用MTT法觀察各種海參活性成分對神經(jīng)細(xì)胞PC12的影響。結(jié)果表明,海參腦苷脂對PC12細(xì)胞的生長無明顯影響,海參磷脂可促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的增長,因此后期的實(shí)驗(yàn)以海參腦苷脂和海參磷脂為研究對象。

3、r>　　本文采用過氧化氫(H2O2)和叔丁基過氧化氫(t-BHP)分別誘導(dǎo) PC12細(xì)胞氧化損傷建立神經(jīng)細(xì)胞體外氧化損傷模型,研究海參腦苷脂和海參磷脂的神經(jīng)保護(hù)作用及其作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),H2O2和t-BHP使PC12細(xì)胞處于顯著的氧化損傷狀態(tài),模型建立成功;海參腦苷脂和海參磷脂處理后增加PC12細(xì)胞的存活率,細(xì)胞形態(tài)也有所恢復(fù),表明海參腦苷脂和海參磷脂對PC12細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用;機(jī)制研究結(jié)果顯示,海參腦苷脂和海參磷脂可減少

4、細(xì)胞內(nèi)LDH的漏出,保護(hù)細(xì)胞膜的完整性,提高細(xì)胞內(nèi)T-AOC和SOD的活性,增加細(xì)胞的抗氧化能力,下調(diào)促凋亡基因Bax、Caspase-9和Caspase-3,促進(jìn)抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá),抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,海參腦苷脂和海參磷脂的神經(jīng)細(xì)胞氧化損傷保護(hù)機(jī)制可能依賴于其抗氧化活性和抗凋亡活性。
　　在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,本文選取了海參磷脂為研究對象,利用快速老化小鼠SAMP8和東莨菪堿致小鼠癡呆為動物模型,通過敞箱實(shí)驗(yàn)

5、、Barnes迷宮、Morris水迷宮等多種行為學(xué)測定方法,進(jìn)一步研究海參磷脂對阿爾茲海默病的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,SAMP8小鼠存在焦慮現(xiàn)象,海參磷脂對此的改善作用并不明顯;SAMP8小鼠和東莨菪堿致小鼠癡呆兩種模型小鼠均表現(xiàn)出顯著的學(xué)習(xí)記憶能力障礙,Barnes迷宮實(shí)驗(yàn)中海參磷脂可縮短模型小鼠找到目標(biāo)箱的潛伏期,減少錯誤次數(shù);Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)海參磷脂可減小SAMP8小鼠找到隱蔽平臺的潛伏期,增加穿越平臺次數(shù),延長其在目標(biāo)象限的停

6、留時間。以上結(jié)果表明海參磷脂可改善阿爾茲海默病模型小鼠的學(xué)習(xí)和記憶障礙。
　　結(jié)合動物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,本文測定了快速老化小鼠SAMP8腦組織、肝臟和血清中的氧化應(yīng)激指標(biāo),進(jìn)一步研究了海參磷脂改善老年癡呆小鼠腦功能的機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn),SAMP8小鼠腦組織處于嚴(yán)重的氧化應(yīng)激狀態(tài),氧化損傷顯著強(qiáng)于肝臟和血清;海參磷脂的攝食可明顯降低 MDA、8-OHdG、8-oxo-G和NO的含量,提高SOD活力,抑制NOS活性。本研究結(jié)果表明攝食

7、海參磷脂對癡呆小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用與其抑制脂質(zhì)、DNA和RNA的過氧化,調(diào)節(jié)腦內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài),抑制NO的細(xì)胞毒性,減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用有關(guān),且此作用機(jī)制與體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的結(jié)論一致。
　　本文首次系統(tǒng)研究了海參中活性成分的神經(jīng)保護(hù)功效,發(fā)現(xiàn)了海參腦苷脂和海參磷脂對神經(jīng)細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)活性,海參磷脂可改善阿爾茲海默病模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力障礙,并通過體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)初步闡明其作用機(jī)制。本文為海參活性成分在阿爾茲海默病的治療與預(yù)防