GANT61通過下調(diào)Gli1改善成年小鼠實驗性心肌梗死后心肌纖維化的研究.pdf

1、背景：
　　Hedgehog（HH）通路是一條經(jīng)典的信號通路，在從低等動物到高等動物中普遍存在。正常表達的HH信號在人類生長發(fā)育過程中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，如參與諸如血管、神經(jīng)管、末梢組織等的形成。但持續(xù)異常激活的HH信號可導致不同類型增殖性疾病的發(fā)生，包括各種腫瘤。此外，活化的HH信號也參與了組織的纖維化。而Gli1是HH信號通路中最重要的下游核轉(zhuǎn)錄因子，目前許多研究已經(jīng)證實Gli1在纖維化的形成和發(fā)展中扮演著重要的角色，但Gli1在

2、心血管系統(tǒng)疾病研究甚少，特別是在心肌梗死方面。因此通過檢測成年小鼠心肌梗死后Gli1在缺血心肌組織中的表達特點，來探討Gli小分子抑制劑GANT61減輕心肌梗死后心肌纖維化的分子機制意義重大。
　　第一部分、探討Gli1在心肌梗死后心肌組織的表達特點
　　目的：
　　通過建立小鼠心肌梗死動物模型，探討Gli1在心肌梗死后心肌組織的表達特點。
　　方法：
　　在27只C57BL/6雄性小鼠中，運用隨機數(shù)字法選

3、擇15只小鼠作為心肌梗死組（心梗組）建立心肌梗死模型，并分組為心梗組1周、心梗組2周、心梗組3周。在余下的12只小鼠中再次運用隨機數(shù)字法選擇9只作為假手術(shù)組，分組為假手術(shù)組1周、假手術(shù)組2周、假手術(shù)組3周。最后的3只作為正常組。運用實時熒光定量PCR和Western blot檢測心梗組1周、2周、3周梗死周圍區(qū)缺血心肌組織Gli1 mRNA及蛋白的表達，并與正常組及假手術(shù)組相比較。運用免疫熒光檢驗心肌梗死和周邊區(qū)缺血心肌組織Gli1的表

4、達。
　　結(jié)果：
　　與心梗組2周相比較，心梗組3周Gli1 mRNA的表達量明顯升高（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義；假手術(shù)組與正常組心肌組織中Gli1 mRNA表達無明顯變化（P＞0.05），差異無統(tǒng)計學意義；與心梗組2周相比，心肌梗死后第3周Gli1蛋白表達量明顯升高，其結(jié)果與qRT-PCR相似；免疫熒光結(jié)果提示：在正常組的心肌組織，Gli1不表達；在心肌梗死后2周的表達量少于心肌梗死后3周。
　　結(jié)論：

5、>　　Gli1在正常組、假手術(shù)組及心梗組1周不表達，而在心梗組2周Gli1存在激活的現(xiàn)象，并表現(xiàn)為隨著時間的延長，Gli1 mRNA及蛋白的表達量有逐漸升高的趨勢。
　　第二部分、探討GANT61改善成年小鼠實驗性心肌梗死后心肌纖維化的分子機制
　　目的：
　　探討GANT61改善成年小鼠實驗性心肌梗死后心肌纖維化的分子機制。
　　方法：
　　在80只C57BL/6雄性小鼠中，隨機取60只小鼠建立心肌梗死動

6、物模型。心梗術(shù)后死亡18只。將存活的小鼠按照隨機數(shù)字表法分為心梗組、生理鹽水組、干預組。干預組于手術(shù)當天起以50mg/kg/d的劑量皮下注射GANT61,生理鹽水組皮下注射與GANT61相等體積的生理鹽水。此外隨機取10只小鼠則作為假手術(shù)組，假手術(shù)組打開胸腔后，縫線只穿過左前降支血管，不拉緊。剩下的10只小鼠則作為正常組。分別運用實時熒光定量PCR和Western blot檢測心梗組1周、2周、3周，生理鹽水組1周、2周、3周及干預組1

7、周、2周、3周梗死和周圍區(qū)缺血心肌組織Gli1、TGF-β1、Ⅰ型及Ⅲ型膠原mRNA及蛋白表達。并與正常組及假手術(shù)組相比較.運用Masson染色觀察心臟梗死周邊區(qū)組織形態(tài)及心肌纖維化程度。
　　結(jié)果：
　　Masson染色顯示，心梗模型小鼠術(shù)后心肌纖維化程度隨著時間延長而加重，GANT61干預后能減輕心肌纖維化；qRT-PCR和Western blot結(jié)果顯示，與心梗組3周相比較，GANT61干預3周后，可以明顯下調(diào)組織中G

8、li1 mRNA和蛋白的表達水平（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義；與正常組相比，心梗后2周TGF-β1、Ⅰ型及Ⅲ型膠原mRNA及蛋白表達升高（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義；與心梗組3周相比，經(jīng)過GANT61干預3周后TGF-β1、Ⅰ型及Ⅲ型膠原mRNA及蛋白表達均有下降（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　GANT61可以通過抑制HH信號通路中Gli1的表達來減輕心肌纖維化。預測Gli1可能成為改善心肌