白楊素磺酰胺衍生物的合成與抗腫瘤活性評價.pdf

1、以天然產(chǎn)物為先導(dǎo)化合物進行結(jié)構(gòu)改造，是研制抗腫瘤藥物的重要策略之一。白楊素具有抗腫瘤作用，但因其腸道吸收少，易被糖基化代謝，靶向性差，生物利用度低限制了它的臨床應(yīng)用。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)：5-羥基-7-甲氧基-N-（4-甲基苯基）-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮-8-磺酰胺（化合物4a）、5-羥基-7-甲氧基-N-（3-乙炔基苯基）-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮-8-磺酰胺（化合物4d）具有較強的抗肝癌細胞增殖作用。本文主要

2、進行目標化合物的急性毒性實驗并探究作用機制。
　　在化合物4a的急性毒性實驗預(yù)實驗中，按照2 g/kg劑量口服灌胃給藥，小鼠均未死亡，測得化合物4a的血藥濃度偏低?；衔?a水中溶解度為0.03μg/mL，口服給藥后因水溶性差難被胃腸黏膜壁吸收，進而無法得出最大致死量。本文采用液體制劑技術(shù)和結(jié)構(gòu)修飾兩種策略提高化合物4a在水中的溶解度。
　　通過加入潛溶劑、表面活性劑、制備成微乳三種制劑技術(shù)改善化合物4a的溶解能力。當(dāng)微乳處

3、方為油酸乙酯：Cremophor RH40：EtOH：H2O=4.5:19.1:6.4:70（體積比）時，4a在水中的溶解度可達224.83μg/mL。雖然溶解度提高了7493倍，但是溶解度仍不能滿足體內(nèi)研究的要求，還需要繼續(xù)進行制劑處方篩選。
　　在化合物4a分子中引入親水性基團進行結(jié)構(gòu)改造，制備了兩類化合物。一是白楊素的5位連接羧基的衍生物。另一個是白楊素7位連接羥基衍生物。雖然改造后的化合物在水中的溶解度提高了，但是對Hep

4、G2細胞的抑制活性下降，這表明5位和7位的結(jié)構(gòu)改造破壞了分子與靶標的結(jié)合，不是提高水溶性的適宜修飾位點。
　　MTT法證實了白楊素磺酰胺衍生物4a、4d能抑制HepG2細胞的生長，本文繼續(xù)探究其抗增殖機制與作用靶點。采用Annexin V FITC/PI流式細胞術(shù)在檢測化合物4a、4d對HepG2細胞凋亡的影響，實驗表明，4a對肝癌細胞的作用既有凋亡也有壞死，4d則主要誘導(dǎo)細胞早期凋亡（加入4d孵育24h后早期凋亡率為36.94%

5、）。應(yīng)用流式細胞儀碘化丙啶染色法檢測加藥后HepG2細胞的細胞周期，結(jié)果顯示化合物4a、4d均將肝癌HepG2細胞阻滯在G2/M期，G2期細胞比率分別為89.85%、95.76%。采用雙熒光素報告基因?qū)嶒灆z測化合物對HIF-1的轉(zhuǎn)錄活性的抑制作用，化合物4a、4d對HIF-1轉(zhuǎn)錄的均有較強的抑制活性，4a抑制HIF-1轉(zhuǎn)錄的活性為IC50>0.005μM，4d抑制HIF-1轉(zhuǎn)錄的活性為0.045μM。
　　根據(jù)化合物作用于HepG