DKK2在人結(jié)直腸癌中表觀遺傳學(xué)調(diào)控及其抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究.pdf

1、癌癥是全球重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題，同時(shí)也是各國(guó)最主要的致死性疾病之一。據(jù)2017年度美國(guó)國(guó)家癌癥中心數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示：美國(guó)所有癌癥疾病中，結(jié)直腸癌(Colorectal cancer,CRC)的發(fā)病率和死亡率高居前三位。而在發(fā)展中國(guó)家，癌癥發(fā)病率和死亡率遠(yuǎn)高于發(fā)達(dá)國(guó)家，據(jù)2016年發(fā)表于美國(guó)CA CANCER J CLIN雜志的中國(guó)癌癥數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示：中國(guó)癌癥患者的發(fā)病和死亡人數(shù)呈不斷上升的趨勢(shì)，2015年大約281400名患者死于癌癥，平均每天

2、7500名患者。結(jié)直腸癌是最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展及生活水平的改善，其發(fā)病率及死亡率有不斷上升的趨勢(shì)；因此，尋找新的癌癥治療方法對(duì)腫瘤病患者治療和預(yù)防有重要意義。
　　DKK2(Dickkopf WNT signaling pathway inhibitor2)是WNT信號(hào)通路最常見(jiàn)的調(diào)控因子，其家族成員主要包含4個(gè)(DKK1，DKK2，DKK3，DKK4)，均為外分泌型蛋白。其中DKK2位于染色體4q25，基因長(zhǎng)

3、度149kb，編碼的蛋白約28kd。目前已有文獻(xiàn)報(bào)道：DKK2在腎癌、卵巢癌組織中存在著不同程度的甲基化及組織表達(dá)下調(diào)，同時(shí)有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲等生物學(xué)能力；在消化道腫瘤中存在不同程度的甲基化現(xiàn)象，但其在結(jié)直腸癌中的功能及相關(guān)分子機(jī)制尚不清楚。因此我們推測(cè)DKK2可能作為抑癌基因(Tumor suppressor gene,TSG)參與結(jié)直腸癌的進(jìn)程。本研究采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Reverse transcription pol

4、ymerase chain reaction,RT-PCR)、甲基化特異性聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Methylation specific PCR,MSP)、在線數(shù)據(jù)庫(kù)分析等方法分析了DKK2在結(jié)直腸癌細(xì)胞系及組織中的表達(dá)和甲基化狀態(tài)；同時(shí)體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢測(cè) DKK2對(duì)細(xì)胞增殖及遷移的影響，并進(jìn)一步采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time fluorescence quantiattive polymerase chain reac

5、tion,qRT-PCR)、RT-PCR及蛋白印跡法(Western blot,WB)等方法檢測(cè)DKK2對(duì)增殖及遷移能力影響的相關(guān)分子機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：DKK2基因在7株(100%)結(jié)直腸癌細(xì)胞中均有不同程度的表達(dá)下調(diào)或缺失；聯(lián)合去甲基化藥物5-氮雜-2脫氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-dC)及組蛋白去乙酰化酶抑制劑曲骨菌素A(Trichostatin A,TSA)處理后,DKK2信使RNA(Messeng

6、er RNA,mRNA)表達(dá)下調(diào)或沉默的細(xì)胞株(HCT116、HT-29、SW480)能恢復(fù)表達(dá)；同時(shí)MSP發(fā)現(xiàn)，A+T處理后細(xì)胞(HT-29)，其甲基化程度有不同程度的降低，因此提示了DKK2啟動(dòng)子甲基化可能是導(dǎo)致mRNA表達(dá)水平下調(diào)的主要原因之一。體外功能實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：DKK2能通過(guò)Wnt/β-catenin通路抑制腫瘤的生長(zhǎng)及遷移。
　　綜上所述，DKK2作為抑癌基因參與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展，可能為結(jié)直腸癌早期診斷及治療提供了相關(guān)