國產(chǎn)丙型肝炎抗體檢測試劑盒檢測灰區(qū)的設(shè)置及其處置方案的研究.pdf

1、目的：
　　設(shè)置目前在上海地區(qū)臨床實驗室常用的四種國產(chǎn)抗-HCV檢測試劑盒檢測的灰區(qū)范圍，并獲得各方法檢測結(jié)果灰區(qū)樣本的處置方案。
　　方法：
　　（1）分別用榮盛、新波、科華和科美四家國產(chǎn)抗-HCV檢測試劑檢測不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，評價各國產(chǎn)試劑盒的線性關(guān)系及不精密度；
　?。?）收集抗-HCV臨床初檢陽性樣本656例，分別用榮盛、新波、科華和科美四家國產(chǎn)抗-HCV復(fù)檢，分別計算不同初檢范圍的復(fù)檢率；
　　（

2、3）選擇抗-HCV初復(fù)檢結(jié)果不一致的弱陽性樣本338例，用RIBA確認(rèn)試驗和熒光定量PCR檢測HCV RNA作為確認(rèn)，以RIBA和HCV RNA確認(rèn)為“金標(biāo)準(zhǔn)”，繪制ROC曲線，探討其最佳臨界值，即約登指數(shù)最大時的四家國產(chǎn)檢測試劑的最佳臨界測量值/陽性判斷值（S/CO值）；
　　（4）以95％的真陽性和真陰性的S/CO值，分析四家國產(chǎn)抗-HCV檢測試劑S/CO值陰、陽性灰區(qū)范圍；
　　（5）分析36份四家國產(chǎn)試劑復(fù)檢抗-HC

3、V結(jié)果不一致且在灰區(qū)范圍內(nèi)，RIBA或HCV RNA確認(rèn)為陽性的樣本，分析假陰性率；
　?。?）分析四種不同國產(chǎn)試劑在不同抗-HCV濃度下（S/CO＜1和S/CO≥1＝HCV RNA的檢出率及檢測值；
　?。?）四種國產(chǎn)抗HCV檢測試劑在不同抗-HCV濃度水平與HCV RNA基因型的關(guān)系；
　?。?）發(fā)現(xiàn)12例特殊處于“窗口期”樣本，分析抗體檢測結(jié)果、RIBA確認(rèn)與HCV RNA的關(guān)系，以及基因分型。
　　結(jié)果：

4、
　?。?）標(biāo)準(zhǔn)品濃度在0.5NCU/ml，四家國產(chǎn)檢測系統(tǒng)的批內(nèi)不精密度分別從20.2%～36.2%；總不精密度分別從18.9%～34.8%。新波和科美線性關(guān)系斜率非常接近，分別為2.495和2.510；科華相對較低為1.348；榮盛最低為0.634。
　　（2）四家國產(chǎn)抗-HCV檢測試劑的陰性復(fù)檢率均在90%以上，S/CO值＞12.01，四家國產(chǎn)抗-HCV檢測試劑陽性復(fù)檢率均在95%以上。
　?。?）榮盛檢測抗-H

5、CV的最佳臨界S/CO值為1.31，敏感性為94.8%，特異性為94.6%，約登指數(shù)為0.894，ROC曲線下面積為0.989；新波檢測抗-HCV的最佳臨界S/CO值為2.48，敏感性為97.7%，特異性為94.6%，約登指數(shù)為0.923，ROC曲線下面積為0.989；科華檢測抗-HCV的最佳臨界S/CO值為3.22，敏感性為97.2%，特異性為97.3%，約登指數(shù)為0.945，ROC曲線下面積為0.992；科美檢測抗-HCV的最佳S/

6、CO值為4.32，敏感性為96.2%，特異性為94.6%，約登指數(shù)為0.908，ROC曲線下面積為0.991。
　　（4）四家試劑均陽性的樣本，RIBA和HCV RNA的陽性率高達96.3%（157/163）；而四家試劑結(jié)果不一致的RIBA和HCV RNA的陽性率39.2%（31/79），四家試劑均陰性的樣本，RIBA和HCV RNA的陽性率為26.0%（25/96）；
　　（5）36份樣本中，單個試劑假陰性率為27.8%～

7、94.4%之間，兩兩試劑組合后，假陰性率為8.3%～61.1%之間；
　　（6）四家國產(chǎn)檢測結(jié)果的S/CO＜1的樣本HCV RNA的檢出率顯著低于S/CO≥1樣本的檢出率；抗-HCV S/CO＜1的樣本的HCV RNA的檢測中位值分別為3.62、3.22、3.31、3.22，S/CO≥1的中位值為6.67、6.65、6.65、6.65（P＜0.05）。另外，在抗-HCV S/CO≥1的每家國產(chǎn)試劑的抗-HCV濃度中位數(shù)分別為：15

8、.5、49.6、15.8、121.4；而HCV RNA中位數(shù)值均在6.65左右。
　?。?）113例得到丙肝基因型結(jié)果，其基因型為1a7（6.2%）、1b72(63.7%)、2a11(9.7%)、3a7(6.2%)、3b11(9.7%)、6a5(4.4%)；在S/CO＜1和S/CO≥1的不同濃度下基因型分布沒有顯著性差異；
　　（8）12例特殊樣本抗體檢測結(jié)果為，四家國產(chǎn)檢測結(jié)果均為陰性或者部分廠家處于陰性或陽性灰區(qū)范圍，R

9、IBA確認(rèn)結(jié)果為陰性或不確定，而HCV RNA病毒載量為弱陽性。12例樣本的RNA基因分型，有8例均為1b型，提示早期感染的基因分型可能以1b為主。
　　結(jié)論：
　?。?）確認(rèn)了四種常用國產(chǎn)抗-HCV抗體檢測試劑的最佳臨界S/CO值，并為臨床提供了四種抗-HCV抗體檢測試劑的灰區(qū)范圍（復(fù)檢范圍）；
　?。?）四種抗-HCV抗體檢測試劑灰區(qū)結(jié)果的解決方案，建議科華、新波、科美可作為榮盛的復(fù)檢試劑；科華和科美可作為新波的復(fù)

10、檢試劑；科華和科美兩者可互為對方的復(fù)檢試劑。必要時，可引入雙抗原夾心的檢測方法作為復(fù)檢的補充；
　　（3）嘗試分析了灰區(qū)樣本產(chǎn)生的原因包括分析了說明了在初篩檢測抗-HCV的不同方法（ELISA、TRFIA、CLIA），樣本的S/CO值的大小不能代表HCV RNA含量的多少；HCV基因型與HCV濃度水平無顯著相關(guān)性，在臨床診斷中無任何提示意義；在進行血清HCV抗體檢測的同時，可以增加HCV RNA試劑進行補充試驗，以減少窗口期樣本的