丙型肝炎病毒抗體檢測試劑盒(磁微?;瘜W(xué)發(fā)光法)的開發(fā)與應(yīng)用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、丙型肝炎病毒感染已成為全球所面臨的衛(wèi)生難題之一。因此,在醫(yī)學(xué)上丙型肝炎的臨床檢測對患者非常重要。臨床上常以丙型肝炎病毒抗體作為診斷依據(jù),常用的檢測手段有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法、化學(xué)發(fā)光免疫法、膠體金免疫層析試驗(yàn)法。而這些技術(shù)手段存在著檢測時(shí)間長、靈敏度低、特異性差等缺點(diǎn),因此,研發(fā)一種能夠提高HCV檢測靈敏度和特異性、縮短檢測時(shí)間的體外診斷試劑迫在眉睫。在體外診斷領(lǐng)域,利用磁性復(fù)合微粒的特點(diǎn)并將其和化學(xué)發(fā)光免疫法結(jié)合起來,開發(fā)出一種高靈敏度

2、和特異性,操作簡便快速的HCV抗體檢測學(xué)手段對HCV檢測是一種創(chuàng)新性的突破。
  本論文研究的內(nèi)容主要包括:(1)試劑盒原材料的篩選;(2)生產(chǎn)工藝與反應(yīng)體系的研究;(3)試劑盒質(zhì)控品及企業(yè)內(nèi)控品的制備;(4)參考值(范圍)的確定;(5)試劑盒穩(wěn)定性的研究;(6)試劑盒分析性能的評估。
  主要的研究結(jié)果如下:
 ?。?)在原材料篩選方面,我們通過配對實(shí)驗(yàn)最終確定了伊美諾公司的產(chǎn)品作為本試劑盒的包被抗原和標(biāo)記抗體。

3、r> ?。?)在生產(chǎn)工藝方面,我們最終篩選出氨基磁珠作為固相載體,并采用氨基兩步法進(jìn)行包被;活化和包被緩沖液為B液;活化時(shí)間為1h;包被時(shí)間為1h;包被濃度0.7μl/人份;封閉液主要組分為 Tris-HCl(pH7.4)和2%的Casein;酶濃度為1/2000,酶稀釋液主要組分為PBS和3%BSA;樣品稀釋液為PBS和1‰Casein。陰陽性對照稀釋液為含Casein的Tris-Hcl緩沖液。
 ?。?)在反應(yīng)體系方面,加樣模

4、式為10μl樣本-20μl磁微粒-100μl樣稀,加酶100μl;37℃反應(yīng),反應(yīng)模式為15min+17min;加入底物混勻后1-5min測定。
 ?。?)結(jié)合國家參考品的設(shè)置和本試劑的特點(diǎn),我們建立了一套企業(yè)內(nèi)控品,共有67份,主要包括30份陰性參比品、30份陽性參比品、6份靈敏度參比品和1份精密性參比品。
 ?。?)通過用本試劑盒對592份丙肝患者陽性樣本和3480例健康人陰性樣本檢測所得的OD進(jìn)行相關(guān)分析,我們確定cu

5、t off值=0.4*PC均值。
 ?。?)在試劑穩(wěn)定性方面,通過對三批成品試劑進(jìn)行加速、拆分、實(shí)時(shí)穩(wěn)定性考核,最終確定該產(chǎn)品的有效期為12個(gè)月以上(2~8℃儲存),各組分拆封后至少可以使用30天。
 ?。?)經(jīng)過對三批成品試劑進(jìn)行分析性能評估,我們得到以下結(jié)論:三批產(chǎn)品對企業(yè)內(nèi)控品的陰性符合率、陽性符合率、靈敏度、變異均符合要求,且不同規(guī)格、不同機(jī)型檢測結(jié)果沒有明顯區(qū)別;不同抗凝劑(EDTA-2Na或K、枸櫞酸鈉、肝素)對

6、檢測結(jié)果無顯著影響,可以滿足臨床對血清/血漿樣本檢測的需要;其它抗體以及內(nèi)源性干擾物質(zhì)等對檢測結(jié)果無顯著影響;試劑機(jī)載穩(wěn)定性:可穩(wěn)定放置28天;AutoLumoA2000 Cutoff值有效期:28天;該產(chǎn)品與RIBA的檢測一致率較高;該產(chǎn)品符合HCV抗體國家參考品考核要求;本試劑盒對Seracare BBI血清轉(zhuǎn)換盤的檢測能力與國際知名廠家HCV抗體檢測試劑盒ORTHO?3.03.0 ELISA及ORTHO3.0 EnhancedSA

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