2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  慢性阻塞性肺疾病(COPD)是全球范圍內(nèi)的主要致死病因之一,嚴重危害人類健康。如何有效地治療COPD,特別是減少COPD急性發(fā)作的頻次,對于肺功能的保護和患者預后都有重要的意義。
  羧甲司坦(S-CMC)是一種臨床常用的黏液調(diào)節(jié)劑。已有大量的基礎和臨床研究證實,羧甲司坦的抗炎、抗氧化作用比其本身的祛痰作用更為顯著。一項由鐘南山院士和康健教授牽頭的隨機雙盲對照研究(PEACE Study)顯示,長期規(guī)律口服羧甲司

2、坦能夠預防慢阻肺的急性加重。但國外一些研究與之尚存在分歧。分析其異同發(fā)現(xiàn),基礎應用糖皮質(zhì)激素可能對羧甲司坦的抗炎、抗氧化作用存在影響。
  目前國內(nèi)外雖然有較多關于黏液調(diào)節(jié)劑治療COPD的基礎和臨床研究,但研究者的興趣點均在于此類藥物是否有效,而忽視了在何種狀態(tài)下有效。本研究旨在通過比較羧甲司坦單用或聯(lián)合吸入性糖皮質(zhì)激素的療效證實羧甲司坦能夠改善COPD氣道炎癥和氧化應激水平,并探討吸入糖皮質(zhì)激素對羧甲司坦上述作用的影響機制,為羧

3、甲司坦在COPD治療中的應用提供重要的理論依據(jù)。
  材料和方法:
  一、體內(nèi)實驗:羧甲司坦對慢性阻塞性肺疾病大鼠氣道炎癥和氧化應激水平的影響
  1、COPD大鼠模型的制備
  SPF級雄性Wistar大鼠隨機分為5組:對照組(N組)、熏煙組(CN組)、羧甲司坦組(CC組)、布地奈德組(CB組)、聯(lián)合組(CCB組),每組10只。對照組(N組):正常飼養(yǎng);其余4組慢性熏煙刺激12周,采用自制吸煙染毒箱(玻璃制成

4、,體積0.8×0.6×0.6m3,箱頂留有2個2×2cm2通氣孔),燃燒紅金龍牌香煙,由三通管導入煙霧,一次熏煙12支,煙霧濃度約5%,0.5h/次,2次/天,5天/周。造模成功后分別加干預因素(CN組每日霧化生理鹽水30ml; CB組每日霧化布地奈德1mg/kg; CC組每日給予羧甲司坦500mg/kg灌胃;CCB組同時給予以上兩種藥物)4周后進行實驗。
  2、肺功能測定
  水合氯醛腹腔注射麻醉,采用Medlab醫(yī)學軟

5、件分析系統(tǒng)測定各組大鼠PEF、FEV0.3/FVC%。
  3、留取血清、BALF、肺組織標本
  水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠,眼球取血,離心后收集血清保存待檢。行氣管插管,以生理鹽水反復灌洗左肺收集BALF,留做細胞分類計數(shù)。將左肺組織固定于4%多聚甲醛中,制作石蠟切片用于組織病理和免疫組織化學檢測。右肺組織置-80℃保存用于Western-blot和Real-time PCR檢測。
  4、石蠟切片HE染色
 

6、 制作大鼠肺組織石蠟切片并行HE染色評價病理形態(tài)學改變,應用顯微圖像分析系統(tǒng)定量分析肺平均內(nèi)襯間隔(MLI)、平均肺泡數(shù)(MAN)。
  5、免疫組織化學染色
  免疫組織化學染色比較各組大鼠肺組織TNF-α、NF-κB、IκBα的表達。
  6、酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)
  檢測大鼠血清及肺組織勻漿的TNF-α、IL-8、IL-6水平。
  7、氧化應激
  檢測大鼠血清SOD、MDA水平。<

7、br>  8、蛋白印跡實驗(Westem-Blot)
  檢測大鼠肺組織NF-κB、ERK1/2蛋白的表達。
  9、實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈法(Real-time PCR)
  檢測大鼠肺組織NF-κB、ERK1/2 mRNA表達。
  二、體外實驗:羧甲司坦對人氣道上皮細胞炎癥及氧化應激水平的影響及其調(diào)控機制
  1、人氣道上皮細胞株(16HBE細胞)培養(yǎng)
  2、煙霧提取物(CSE)的制備:制

8、備的CSE濃度設定為100%,稀釋不同濃度的CSE30min內(nèi)用于實驗。
  3、MTT法檢測不同濃度CSE對細胞生存率的影響:分別加入不同濃度(80%、40%、20%、10%、5%、2.5%、1.25%、0.63%、0%) CSE于干預后1h、3h、6h、12h、24h、48h處理細胞。
  4、分7組給予藥物干預:(1)對照組(N組);(2)模型組(CN組):CSE;(3)羧甲司坦組(CC組): CSE+羧甲司坦;(4)

9、布地奈德組(CB組):CSE+布地奈德;(5)聯(lián)合組(CCB組):CSE+布地奈德+羧甲司坦;(6)抑制劑組(CNP組): CSE+ PD98059;(7)激動劑組(CCE組):CSE+羧甲司坦+EGF。
  5、ELISA法檢測炎癥因子IL-8、IL-6水平的變化。
  6、氧化應激水平檢測:Fe3+還原法測定血漿總抗氧化能力(T-AOC),DTNB法測定谷胱甘肽(GSH)含量。
  7、Western-Blot方法

10、檢測ERK、P-ERK、IκBα、P-IκBα蛋白水平的變化。
  8、Real-time PCR方法檢測ERK1/2、NF-κBmRNA水平的變化。
  結果:
  一、體內(nèi)實驗部分
  1、病理及肺功能改變
  組織病理學提示CN組肺泡腔擴張,肺泡壁斷裂,部分肺泡融合形成肺大皰,并伴有炎性細胞浸潤,MLI增加,MAN降低,肺功能檢測FEV0.3/FVC<70%,符合COPD診斷,證明COPD大鼠模型造模

11、成功。CC組、CB組和CCB組病理及肺功能均較CN組有所改善。
  2、TNF-α、NF-κB、IκBα免疫組化染色
  與N組比較,CN組大鼠氣道上皮、肺泡間隔及巨噬細胞漿內(nèi)TNF-α陽性表達增加,胞漿及胞核內(nèi)NF-κB陽染增多,其余三組較CN組減輕。IκBα免疫組化染色與NF-κB結果相反。
  3、BALF細胞分類計數(shù)
  與N組相比,CN組大鼠BALF細胞總數(shù)、中性粒細胞百分比明顯升高,巨噬細胞百分比明顯

12、降低,差異有顯著統(tǒng)計學意義;CC組BALF細胞總數(shù)及中性粒細胞百分比較CN組有所降低。
  4、炎癥因子和氧化應激水平
  與N組相比,CN組TNF-α、IL-8、IL-6、MDA水平明顯升高,SOD水平降低,CC組、CB組及CCB組較CN組改善,給藥三組間無統(tǒng)計學差異。
  5、NF-κB、ERK1/2蛋白和mRNA的表達
  與N組相比,CN組NF-κB、ERK1/2蛋白和mRNA的表達明顯增高,CC組、CB

13、組及CCB組較CN組降低,給藥三組間無統(tǒng)計學差異。
  二、體外實驗部分
  1、隨著CSE濃度的升高,HBE細胞的生存率呈下降趨勢。CSE濃度在10%-80%之間,隨著作用時間延長,細胞生存率明顯降低。
  2、CN組IL-8、IL-6水平均較N組明顯升高,CC組、CB組及CCB組上述指標較CN組有所降低,但此三組間無統(tǒng)計學差異。
  3、CN組GSH、T-AOC水平均較對照組明顯降低,CC組、CB組及CCB組

14、上述指標均較CN組有所升高。
  4、與N組相比,CN組P-ERK、P-Iκ Bα蛋白表達明顯增高;CC組、CB及CCB組上述指標較CN組明顯降低。給予PD98059干預后P-ERK明顯降低,給予EGF干預后P-ERK較CC組有所回升。
  5、與N組比較,CN組細胞ERK、NF-κBmRNA表達均明顯增高;CC組、CB組及CCB組上述指標較CN組均明顯降低。
  結論:
  1、被動熏煙12周成功復制出COPD

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