2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  探討從孕期開始的MVAD對仔鼠成年期學(xué)習(xí)記憶功能影響中,RARα對NR1的影響是否通過調(diào)節(jié)Src來實現(xiàn),并探討RARα、Src和NR1三者之間的聯(lián)系。
  方法:
  構(gòu)建孕期VAN和MVAD大鼠模型(VAN組和MVAD組);分離培養(yǎng)兩組新生鼠原代海馬神經(jīng)元,并利用細胞免疫熒光染色鑒定;利用real-time RCR和western blot檢測孕期MVAD和VAN組新生鼠海馬組織及原代海馬神經(jīng)元細胞RA誘

2、導(dǎo)前后RARα、SFKs和NR1的mRNA和蛋白表達量;利用細胞免疫熒光檢測RA誘導(dǎo)處理細胞前后三個指標的熒光表達量;體外利用RARα沉默和過表達以及空載腺病毒轉(zhuǎn)染VAN組和MVAD組神經(jīng)元細胞檢測三個指標的mRNA表達量;Src家族抑制劑PP2誘導(dǎo)處理神經(jīng)元后,western blot檢測三個指標蛋白表達量;利用免疫共沉淀檢測RARα與Src以及NR1是否有相互作用;利用鈣影像儀檢測對照及處理組細胞的鈣興奮性;利用Morris水迷宮實

3、驗檢測孕期MVAD和VAN組7周齡仔鼠空間學(xué)習(xí)記憶的能力。
  結(jié)果:
  ①成功構(gòu)建了孕期MVAD和VAN孕鼠模型;
  ②免疫熒光染色顯示,分離培養(yǎng)的新生鼠原代海馬神經(jīng)元95%表達神經(jīng)元標志物神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE);
  ③孕期MVAD新生鼠海馬組織以及神經(jīng)元中RARα、SFKs和NR1的mRNA和蛋白表達量明顯低于VAN組(P<0.05);
 ?、茉衅贛VAD組神經(jīng)元鈣興奮性明顯低于VAN組(

4、P<0.05);
 ?、萃ㄟ^水迷宮實驗發(fā)現(xiàn)孕期MVAD組生后7W仔鼠其學(xué)習(xí)記憶功能明顯低于孕期VAN組仔鼠(P<0.01);
  ⑥體外予1μmol/L的RA處理神經(jīng)元細胞24h后,RARα、SFKs和NR1的mRNA和蛋白表達量明顯增加(P<0.001),免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)樹突明顯增長且樹突中RARα表達明顯升高,并且RA處理后的神經(jīng)元細胞鈣興奮性明顯升高(P<0.01);
 ?、唧w外予神經(jīng)元RARα沉默(Si-RAR

5、α)和過表達(Over-RARα)干預(yù)后,Src的mRNA表達變化同RARα一致,有相應(yīng)的降低和升高,且變化有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),NR1無顯著變化;
 ?、囿w外給神經(jīng)元細胞予Src家族激酶抑制劑PP2處理,發(fā)現(xiàn)NR1的蛋白表達變化明顯降低,RARα蛋白無顯著變化;
 ?、嵩衅贛VAD和VAN組生后2W齡仔鼠的海馬組織進行免疫共沉淀發(fā)現(xiàn),RARα與Src有結(jié)合,說明兩者有相互作用,而RARα與NR1無相互作用;

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