高血壓表觀遺傳學(xué)調(diào)控機制研究及高血壓并發(fā)癥--腦卒中的遺傳危險因素研究.pdf

1、博士學(xué)位論文學(xué)校代碼：10023學(xué)號：B2011002003高血壓表觀遺傳學(xué)調(diào)控機制研究及高血壓并發(fā)癥一一腦卒中的遺傳危險因素研究所院：阜外心血管病醫(yī)院姓名：藺亞暉指導(dǎo)教師：惠汝太教授導(dǎo)師小組：陳敬洲教授樊曉寒教授張偉麗教授汪一波教授學(xué)科專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向：心血管疾病的基礎(chǔ)與臨床研究完成日期：2014年4月北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士研究生畢業(yè)論文第一部分高血壓表觀遺傳學(xué)調(diào)控機制研究第一分題DNA甲基化在高血壓發(fā)生發(fā)展中的表觀調(diào)控

2、機制研究中文摘要目的：心腦血管病是人類健康的最主要威脅之一，高血壓是心腦血管病的最大危險因素，并己成為我國沉重社會負(fù)擔(dān)。因此闡明高血壓的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸規(guī)律仍是高血壓防治的關(guān)鍵。研究表明，高血壓是一種遺傳和環(huán)境因素相互作用的復(fù)雜疾病。候選基因策略和全基因組關(guān)聯(lián)研究獲得的所有易感位點均未顯示出與高血壓的較強關(guān)聯(lián)性，高血壓的病因問題仍然沒有確定解釋。近年來，高血壓表觀遺傳學(xué)研究已經(jīng)找到一些線索，可能在環(huán)境因素與核基因組間起到溝通橋梁作用，在

3、沒有發(fā)生基因組變異的情況下影響基因表達水平，從而影響疾病的易感性。DNA甲基化是4個表觀遺傳調(diào)控的重要方式之一。但是在高血壓領(lǐng)域，DNA甲基化的研究還有很多問題亟待解答，關(guān)于人類高血壓全基因組的甲基化研究還鮮有報道。本論文的第一分題從全基因組水平在極端高血壓和完美對照組之間，高血壓前期未轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化組之間比較了外周血DNA甲基化譜的差異，并從兩者的交集中找到了兩個可能與高血壓發(fā)病機制相關(guān)的DNA甲基化差異位點，并做了初步功能研究。同時，選

4、取與中國人群高血壓相關(guān)的GWAS陽性位點，初步探索了DNA甲基化修飾作用對表型的影響。方法：選取來自于山東省日照社區(qū)的44例完美對照，44例極端高血壓患者，44例前期高血壓樣本，采用Illumina450KBeadChip甲基化芯片檢測所有個體的外周血DNA甲基化狀態(tài)。采用焦磷酸測序技術(shù)重復(fù)第一人群芯片結(jié)果，隨后在擴大的70例完美對照和133例高血壓病例中驗證陽性的CpG甲基化位點。經(jīng)兩階段的篩選找出與高血壓相關(guān)的OVGPl基因。ELI

5、SA檢測高血壓與對照組間的血漿OVGPl蛋白水平。實時熒光定量PCR、Westernblot和免疫熒光實驗用于檢測OVGPl在內(nèi)皮細(xì)胞的表達。進一步用pulldown實驗捕獲與OVGPl相互作用的蛋白，并用慢病毒轉(zhuǎn)染HUVEC和THPl細(xì)胞，高表達OVGPl，檢測高血壓相關(guān)分子的mRNA水平變化。另一方面，用SNPshot法對第一階段的高血壓和對照人群分析rsl842896和rs7136259兩個位點的基因型，結(jié)合DNA甲基化數(shù)據(jù)，分析