新型CDK7抑制劑對膠質瘤細胞生物學功能的影響.pdf

1、目的：膠質瘤呈浸潤性生長，具有高度侵襲性，惡性膠質瘤患者病死率高，并且缺乏有效的治療手段。新型CDK7抑制劑THZ1含有一個丙烯酰胺結構，能共價結合到傳統(tǒng)激酶區(qū)域外的半胱氨酸殘基上，是首個被報道的共價不可逆CDK抑制劑。THZ1在小細胞肺癌、三陰性乳腺癌、神經母細胞瘤、T細胞急淋和其他造血系統(tǒng)腫瘤中顯示了較好療效，其能夠抑制多種癌基因的轉錄，阻滯細胞周期進展，抑制增殖，誘發(fā)凋亡。本研究探討THZ1對人膠質瘤細胞系U87及U251的增殖、

2、凋亡、侵襲能力的影響及細胞周期的阻滯作用，進一步探索THZ1的功能及其抗膠質瘤的可能機制。
　　方法：將U87及U251細胞分成空白組、對照組及實驗組，對于U87細胞，實驗組分別采用終濃度為25nmol/L、50nmol/L、100 nmol/L、200nmol/L、400nmol/L的THZ1進行處理，對于U251細胞實驗組分別采用終濃度為5nmol/L、10 nmol/L、20nmol/L、40nmol/L、80nmol/L的

3、THZ1進行處理，空白組為加入等量的DMEM完全培養(yǎng)基，溶劑對照組（DMSO組）為含THZ1工作液中等量的DMSO的DMEM完全培養(yǎng)基。實驗組加入不同濃度的THZ1處理后，以CCK-8法及平板克隆形成試驗分析細胞增殖;Transwell侵襲試驗觀測各組侵襲能力的變化;流式細胞儀檢測各組細胞周期分布及凋亡情況;Western blot實驗檢測凋亡相關蛋白Caspase-3的表達量。
　　結果：1.THZ1抑制U87及U251的增殖，

4、72小時藥物IC50，U87細胞為83.1nmol/L、U251細胞為13.7nmol/L。平板克隆形成試驗結果顯示對照組克隆形成率為(55.26±8.81)％，5nmol/L處理組的克隆形成率為(19.34±3.41)％，與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(t=6.586，P＜0.01)，10nmol/L處理組未見明顯克隆形成，結果顯示低劑量THZ1即可明顯抑制U251細胞的單克隆形成率。
　　2.膠質瘤細胞U87具有較強的侵襲能力，

5、通過體外transwell侵襲實驗發(fā)現，對照組細胞數為134±13個，50nmol/L處理組細胞數為72±7個，與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(t=7.141，P＜0.01)，給予50nmol/L THZ1處理24小時后，其侵襲能力明顯減弱。所以，THZ1能明顯的降低膠質瘤細胞的侵襲性。
　　3.THZ1促進U251細胞凋亡，Caspase-3表達增加。對照組凋亡率為(8.3±2.5)％，THZ1處理10nmol/L組凋亡率為(15

6、.6±3.7)％，20nmol/L組凋亡率為(39.7±6.0)％，凋亡率隨著THZ1濃度的升高而增加。實驗組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(t分別為2.832和8.367，P＜0.05)。Western blot結果顯示，凋亡相關蛋白Caspase-3表達隨著THZ1濃度升高而明顯增加。
　　4.THZ1阻滯U87及U251細胞周期進展，G2期細胞顯著增加。流式細胞儀檢測結果顯示使用濃度為25、50、100nmol/L的THZ1

7、處理U87細胞24h后，G2期隨著藥物濃度的增加，細胞比例逐漸增加，(分別為31.26±1.97、34.09±2.09、41.22±2.40)與對照組(17.95±2.83)比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。同樣，使用濃度為5、10、20nmol/L的THZ1處理U251細胞24h后，G2期隨著藥物濃度的增加，細胞比例逐漸增加，(分別為9.27±2.01、41.35±0.73、56.92±0.69)與對照組(16.17±1.99)比