HACE1在肝癌中的生物學特性與其臨床病理學特征及預后的關系.pdf

1、肝細胞肝癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）（以下簡稱肝癌）是目前世界上最常見的惡性腫瘤之一，在全球，肝癌的發(fā)病率不斷攀升。流行病學和實驗研究均表明病毒性肝炎與原發(fā)性肝癌的發(fā)生有著特定的關系，其中以乙型肝炎與肝癌關系最為密切。中國肝癌患者中約90％都存在乙型肝炎病毒(HBV)感染背景，加上其惡性程度高和預后差等特點，我國面臨的肝癌形勢日益嚴峻。截至目前，傳統(tǒng)外科手術和肝移植依然是肝癌治療的最佳方案，但由于肝癌起

2、病隱匿，特異性臨床表現(xiàn)缺乏，大多數(shù)病人就診時已錯過最佳的手術時機，預后極差。因此，為探索肝癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉移的機制，改善患者長期預后，針對肝癌相關分子的研究已成為當前的研究熱點。
　　HACE1基因是屬于 HECT家族的E3泛素連接酶(HECT E3)，位于染色體6q21，是多種惡性腫瘤中頻繁發(fā)生突變的一個位點。HACE1基因最早發(fā)現(xiàn)與腎母細胞瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關，進一步研究發(fā)現(xiàn)該基因的低表達或突變與人類多種惡性腫瘤相關，如乳腺

3、癌，結直腸癌和淋巴瘤等。目前，HACE1基因對肝癌的作用未有明確報道。因此，本實驗主要探討HACE1基因在肝癌細胞中的生物學特性，研究其對肝癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉移的作用及其與肝癌患者臨床病理特征及預后的關系。
　　第一部分：HACE1基因在肝癌細胞系和肝癌組織中的表達研究
　　目的：研究 HACE1基因在肝癌細胞株 Huh7。MHCC97H。HCCLM3。MHCC97L。HepG2。SMCC7721以及肝正常細胞株L02和肝癌

4、組織及相應癌旁組織中的表達，初步探討其與肝癌發(fā)生的關系。
　　方法：采用RT?PCR和western blot方法檢測HACE1基因在肝癌細胞系、肝正常細胞株L02和40組肝癌及其相應癌旁組織中mRNA和蛋白的表達水平。
　　結果：在不同的肝癌細胞株Huh7。MHCC97H。HCCLM3。MHCC97L。HepG2。SMCC7721中，HACE1基因表達水平明顯低于肝正常細胞株 L02，其中 Huh7細胞中的HACE1基因相

5、對表達水平最高，SMCC7721細胞中HACE1基因相對表達水平最低，因此選擇這兩株細胞進行后續(xù)功能實驗；在肝癌及相應癌旁組織中，HACE1在肝癌中的表達明顯低于癌旁組織。
　　結論：HACE1是一種重要的腫瘤抑制基因，其突變對肝癌的發(fā)生具有重要作用。
　　第二部分：HACE1基因表達水平與肝癌細胞增殖與遷移的關系
　　目的：探討HACE1基因對Huh7和SMCC7721肝癌細胞株增殖與遷移的作用。
　　方法：通

6、過轉染HACE1 siRNA脂質體與pcDNA3.1-HACE1質粒分別沉默和過表達Huh7與SMCC7721細胞中的HACE1基因，從而構建穩(wěn)定轉染HACE1 siRNA、pcDNA3.1-HACE1的Huh7和SMCC7721肝癌細胞株；RT?PCR和western blot檢測 HACE1基因的沉默和過表達效率；CCK-8實驗檢測沉默或過表達HACE1基因對肝癌細胞增殖能力影響；Transwell和細胞劃痕實驗檢測對肝癌細胞遷移能

7、力的作用。
　　結果：成功建立穩(wěn)定轉染 HACE1 siRNA和 pcDNA3.1-HACE1的Huh7和SMCC7721細胞株；CCK-8、Transwell和細胞劃痕實驗表明HACE1基因表達下調能夠明顯促進Huh7細胞的增殖和遷移（P<0.01）；過表達HACE1基因能夠明顯抑制SMCC7721細胞的增殖和遷移能力（P<0.05）。
　　結論：HACE1基因與肝癌的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉移有關。
　　第三部分：HACE

8、1基因表達與肝癌患者臨床病理特征及預后的關系
　　目的：探討HACE1基因在肝癌組織中的表達差異與肝癌臨床病理特征及預后的關系。
　　方法：采用免疫組化方法檢測102例肝癌組織中HACE1基因的表達情況，探討HACE1基因的不同表達水平與肝癌患者臨床病理特征及預后的關系。
　　結果：在所有102例患者中，其中75例患者HACE1基因呈低表達，27例患者HACE1基因呈高表達，且HACE1基因低表達的肝癌患者其腫瘤惡性程

9、度更高。肝癌組織中HACE1基因表達水平的高低與患者血清AFP水平(P<0.001)，腫瘤分期(P<0.05)和血管侵犯密切相關(P<0.05)，且HACE1基因高表達的患者5年總體生存率明顯高于低表達組(P<0.05)。單因素和多因素回歸分析表明血清 AFP水平、腫瘤分期和 HACE1表達水平不僅能夠影響肝癌患者的總體生存率，同時也是獨立的預后因素。
　　結論：HACE1基因在肝癌組織中的表達差異與肝癌的惡性程度和預后密切相關。