骨橋蛋白與乳腺癌臨床病理學特征關系的研究.pdf

1、研究背景與目的: 骨橋蛋白（Osteopontin，OPN）是一種磷酸化糖蛋白趨化因子，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)骨橋蛋白在多種癌組織中過度表達，因此被認為是一種能夠有效監(jiān)測腫瘤發(fā)展的標記物。有研究認為OPN是一種腫瘤轉移相關蛋白，其在乳腺癌患者腫瘤組織中的高表達與乳腺癌的預后有關。本次實驗我們分別通過RT-PCR和免疫組織化學法在基因和蛋白兩個水平檢測乳腺癌組織中OPN的表達，研究骨橋蛋白與乳腺癌臨床病理學特征之間

2、的關系，以期為進一步研究OPN的作用及乳腺癌的發(fā)展提供支持。 研究方法: 收集2006年4月至2007年7月期間在山東大學附屬濟南中心醫(yī)院治療乳腺疾病的病例94例。其中66例原發(fā)性乳腺癌患者均經乳腺癌改良根治術治療，其他則行乳腺腫塊單純切除術等治療。94例患者的平均年齡為49歲（33-72歲）。本實驗采用反轉錄-多聚酶鏈反應（RT-PCR）方法和免疫組織化學染色方法分別在基因和蛋白水平檢測66例乳腺癌，37例正常乳腺組織

3、（距離癌組織>5cm）和28例良性乳腺腫瘤中OPN的表達。其中免疫組化的--抗采用山羊抗人單克隆抗體（mab53，Santa Cruz，美國）。OPN免疫組化染色結果判定根據Tuck等的半定量方法，對蛋白表達陽性細胞數(shù)占同類細胞的百分比（E）和陽性細胞染色強度（Ⅰ）分別進行評分。E：0=無；1=<1/100；2=1/100～1/10；3=1/10～1/3；4=1/3～2/3；5=>2/3。Ⅰ：0=無；1=輕度；2=中度；3=強染色，對染

4、色范圍和染色強度相加（I+E）作為總評分，0表示OPN陰性表達，2～8表示陽性表達應用腫瘤細胞染色強度（I）和染色范圍（E）來決定。乳腺鉬靶中的鈣化評價分別由三位對患者資料全無知曉的影像學專家進行閱片。 研究結果: 用RT-PCR法檢測乳腺癌組織及乳腺良性腫瘤中的OPNmRNA表達指數(shù)分別為0．47±0．15和0．33±0．09，兩者之間的差異有統(tǒng)計學意義（P<0．01）。乳腺癌組織中c-erbB-2陽性組和淋巴結轉移組

5、的OPNmRNA表達指數(shù)分別高于c-erbB-2陰性組和淋巴結轉移陰性組（P=0．015，P=0．004）。但是，乳腺癌組織學類型、腫瘤分級以及TNM分期均與OPNmRNA無關（P=0．14，P=0．073，P=0．47）?；颊甙l(fā)病的年齡、腫瘤大小以及腫瘤淋巴結轉移數(shù)目與OPNmRNA表達亦無相關關系（P>0．05）。42例伴有微鈣化的乳腺癌組織的OPNmRNA電泳條帶的亮度明顯大于無鈣化組。以β-actin作內對照計算相對系數(shù)，鈣化組

6、和無鈣化組分別為0．52±0．15和0．40±0．14，其表達差異有統(tǒng)計學意義（P=0，014）。鈣化數(shù)量和鈣化形態(tài)之間的OPNmRNA表達差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0．05）。 用免疫組化方法分析95例腫瘤的OPN表達。乳腺癌組織中OPN的表達水平（4．83）明顯高于正常乳腺組織（1．86）和乳腺良性腫瘤（2．18）（P<0．01）；乳腺癌淋巴結轉移陽性組與淋巴結轉移陰性組之間OPN表達的差異有統(tǒng)計學意義（P=0．048）。同樣

7、，乳腺癌原發(fā)灶中OPN的表達明顯高于相應轉移淋巴結的OPN表達（P=0．03）。OPN的表達與腫瘤組織學類型、腫瘤分級以及TNM分期無關（P=0．50，P=0．41，P=0．80）。乳腺癌c-erbB-2陽性表達組OPN表達水平（5．22）高于c-erbB-2陰性組（4．00），但它們之間的差異無統(tǒng)計學意義（P=0．056）。鈣化組OPN平均評分為5．24，較無鈣化組（4．11）明顯要高，且差異有統(tǒng)計學意義（P=0．032），但是OPN

8、與鈣化的數(shù)量和類型無關（P>0．05）。 結論: 1、研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者的OPN表達在基因和蛋白水平均與淋巴結轉移和鈣化關系密切，而與腫瘤的組織學類型、腫瘤分級、TNM分期無關?；颊甙l(fā)病年齡、原發(fā)腫瘤大小以及腋窩轉移淋巴結數(shù)目與OPN的表達亦沒有相關性。 2、OPN因其較好的靈敏度和特異性可能成為乳腺癌腫瘤標志物。在乳腺癌患者中，OPN可以反映腫瘤負荷。我們需要進行另外的前瞻性和回顧性研究，以便讓我們更好的了解