乳腺癌脈管浸潤的檢測及其臨床病理學(xué)意義.pdf

1、乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅女性的身心健康。在許多國家，乳腺癌發(fā)病率呈升高趨勢，是導(dǎo)致女性腫瘤患者死亡的第二大原因，患者多死于乳腺癌的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，而淋巴道轉(zhuǎn)移是其最常見的轉(zhuǎn)移途徑，是判斷乳腺癌分期、預(yù)后和選擇治療方案最重要的因素，往往成為評價乳腺癌患者預(yù)后和選擇治療方式的主要標(biāo)準(zhǔn)之一。 癌細(xì)胞通過淋巴管或血管最終轉(zhuǎn)移至區(qū)域淋巴結(jié)和遠(yuǎn)隔器官，而腫瘤淋巴管浸潤和血管浸潤的發(fā)生在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中扮演著重要角色。但是，長期

2、以來人們并沒有對乳腺癌的淋巴轉(zhuǎn)移進(jìn)行更深入的研究，其主要原因是因?yàn)檎也坏教禺愋暂^好的淋巴管內(nèi)皮標(biāo)記物來識別淋巴管，而腫瘤血管生成及浸潤研究較多，大多學(xué)者認(rèn)為其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明確相關(guān)。直到近幾年，特異性較強(qiáng)的淋巴管標(biāo)記物單克隆抗體D2-40的出現(xiàn)才使淋巴管的研究得到重視。目前以D2-40做為標(biāo)記物的淋巴管相關(guān)研究還剛剛起步。本研究擬以D2-40和CD34分別標(biāo)記淋巴管和血管，檢測癌組織中淋巴管和血管受癌細(xì)胞浸潤的情況，探討淋巴管浸潤和血管

3、浸潤的臨床病理學(xué)特點(diǎn)以及其在乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移過程中的意義，希望對乳腺癌臨床分期及預(yù)后的評估有所助益。 目的: 探討以D2-40和CD34分別做為淋巴管和血管標(biāo)記物的可行性，觀察其標(biāo)記的乳腺癌組織中淋巴管和血管的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)和分布特點(diǎn)以及它們受癌細(xì)胞浸潤的病理學(xué)特征；分析淋巴管浸潤和血管浸潤與乳腺癌臨床病理各參數(shù)間的關(guān)系，探討其在乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移過程中的價值及其臨床意義。 方法: 通過電腦病案數(shù)據(jù)庫檢索2007年

4、4月至2008年12月間南方醫(yī)院住院并經(jīng)手術(shù)治療的乳腺癌病例，共計191例。從中選擇臨床資料和病理診斷資料完善的病例，選取浸潤性導(dǎo)管癌做為研究對象。剔除臨床資料不完整、少數(shù)民族、術(shù)前曾接受放化療等輔助性治療、乳腺癌復(fù)發(fā)、腋窩淋巴結(jié)清掃數(shù)目較少（小于10個）病例。通過電腦隨機(jī)抽取其中72例。另隨機(jī)抽取同期的乳腺良性病變10例作為對照。 所選取的乳腺癌病例全部行HE染色、ER、PR、Her-2、VEGF及EGFR免疫組化染色，從病理

5、科獲得所選病例的病理切片以及石蠟塊，選擇合適的石蠟塊制作免疫組化病理白片。采用Envision試劑盒行二步法免疫組化染色。石蠟切片脫蠟至水，檸檬酸緩沖液微波高檔抗原修復(fù)25分鐘，雙蒸水沖洗3次，PBS沖洗3次，每次3分鐘；過氧化氫酶阻斷液微波低檔孵育3分鐘，清除內(nèi)源性過氧化物酶活性，雙蒸水沖洗3次，PBS沖洗3次，每次3分鐘；滴加D2-40或CD34一抗，電熱恒溫培養(yǎng)箱37℃孵育1小時，PBS沖洗3次；滴加酶標(biāo)羊抗鼠IgG聚合物二抗試劑

6、，培養(yǎng)箱中37℃孵育30分鐘，PBS漂洗3次；室溫下DAB試劑顯色約5分鐘（3-10分鐘），自來水沖洗后蘇木素輕度復(fù)染約1分鐘，鹽酸酒精分化約6秒，酒精脫水、二甲苯透明后中性樹膠封固切片。染色可疑者即行重新標(biāo)記染色。以PBS取代一抗作陰性對照，以已知陽性反應(yīng)片作陽性對照。 根據(jù)陽性和陰性對照的顯色情況，在確定無假陽性和假陰性的前提下。淋巴管內(nèi)皮標(biāo)記物D2-40免疫組化染色以胞漿和（或）胞膜呈清晰棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，包括被染成棕

7、黃色的微管、單個內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞叢；血管內(nèi)皮標(biāo)記物CD34染色陽性標(biāo)準(zhǔn)：每一個染成棕黃色的，可與周圍血管、腫瘤細(xì)胞和其他結(jié)締組織區(qū)分開的管腔封閉的內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇，不論管腔和紅細(xì)胞出現(xiàn)與否，均作為一個單一的、可計數(shù)的血管。D2-40和CD34陽性的淋巴管和血管內(nèi)有癌細(xì)胞浸潤即可判定淋巴管浸潤或血管浸潤。 采用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，組間差異性比較采用四格表或行列表卡方檢驗(yàn)，兩因素相關(guān)性分析采用Spearma

8、n相關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)用r表示，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果: 1.D2-40和CD34在所有乳腺癌組織中均有陽性表達(dá)，D2-40在4例乳腺良性病變組織中出現(xiàn)陽性表達(dá)，乳腺癌組和良性病變組D2-40陽性表達(dá)率有顯著差異（x2=46.611，P=0.000），CD34在所有良性病變組織中有陽性表達(dá)。乳腺癌組織血管可隨機(jī)分布于腫瘤中央或周邊，淋巴管多分布于癌瘤周邊間質(zhì)組織內(nèi)，尤其出現(xiàn)在癌與正常組織交界部位。癌組

9、織中央部位淋巴管多為狹窄，甚至為閉鎖狀或缺如狀態(tài)，外周淋巴管常表現(xiàn)為擴(kuò)張狀。與CD34標(biāo)記的血管相比，D2-40標(biāo)記的陽性脈管管壁較薄，多數(shù)不完整，形態(tài)不規(guī)則、管腔大小不一，管壁為單層扁平上皮，無肌層，較薄，無紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞填充，且鄰近可見腔內(nèi)不著色的血管。CD34標(biāo)記的血管不僅血管陽性表達(dá)，間質(zhì)成分亦常見CD34陽性著色，需要結(jié)合形態(tài)學(xué)綜合判定。良性對照組患者乳腺組織中血管和淋巴管數(shù)量較稀少，淋巴管多為閉鎖狀。 2.乳腺浸

10、潤性導(dǎo)管癌組織淋巴管內(nèi)癌細(xì)胞浸潤標(biāo)記陽性率（LVI）為69.4%，癌組織血管內(nèi)癌細(xì)胞浸潤標(biāo)記陽性率（BVI）為52.8%，LVI陽性率高于BVI，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=4.208，P=0.040）。良性組未發(fā)現(xiàn)有淋巴管或血管內(nèi)瘤性細(xì)胞浸潤。癌栓浸潤脈管的形式可表現(xiàn)為單個癌細(xì)胞或數(shù)個癌細(xì)胞或癌細(xì)胞團(tuán)，癌細(xì)胞團(tuán)甚至可全部填充整個脈管，且癌細(xì)胞浸潤脈管大多表現(xiàn)為貼附于管壁；淋巴管浸潤與淋巴管的分布特點(diǎn)一致，癌組織周邊部位淋巴管分布較密集，L

11、VI較多見，癌巢中央淋巴管浸潤較周邊部位少見，周邊正常脂肪組織和癌周淺筋膜組織亦可見癌細(xì)胞淋巴管浸潤。血管內(nèi)癌細(xì)胞浸潤分布于癌組織中央或癌組織周邊正常組織，無一定規(guī)律。不成熟的內(nèi)皮細(xì)胞形成的不完全性血管腔浸潤容易發(fā)現(xiàn)，但尚不能判定為血管內(nèi)癌細(xì)胞浸潤陽性。 3.乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組LVI陽性率85.7%，未轉(zhuǎn)移組LVI陽性率54.1%，轉(zhuǎn)移組高于陰性組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=8.496，P=0.004）；與患者腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯

12、著正相關(guān)關(guān)系（r=0.382，P=0.001），在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目大于10個患者中，LVI陽性率最高（100%），淋巴結(jié)陰性組LVI陽性率最低（54.1%），各組間陽性率差異顯著（x2=10.700，P=0.013）。BVI陽性率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為68.6%，未轉(zhuǎn)移組為37.9%，轉(zhuǎn)移組高于未轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=6.817，P=0.009）； BVI與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)（r=0.332，P=0.004），隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目

13、的增多，BVI陽性率明顯升高，各組間陽性率有顯著性差異（x2=8.125，P=0.043）。LVI和BVI與年齡大小無關(guān)（r=-0.042，P=0.729； r=0.220，P=0.854），陽性率在各組間無顯著差異（x2=0.657，P=0.720； x2=0.043，P=0.979）；與腫瘤大小、組織學(xué)分級顯著正相關(guān)（r=0.407，P=0.000，r=0.334，P=0.004），各組間陽性率差異顯著（x2=13.192，P=0.

14、001； x2=8.698，P=0.013）；LVI與臨床分期無關(guān)（r=0.102，P=0.393），各組間陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（x2=2.089，P=0.352），BVI與臨床分期顯著相關(guān)（r=0.543，P=0.000），各組間陽性率差異顯著（x2=22.614，P=0.000）；LVI與ER、PR顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.406，P=0.000； r=-0.341，P=0.003），各組間陽性率差異顯著（x2=17.369，P=0.

15、001； x2=9.280，P=0.026），與Her-2、VEGF和EGFR顯著正相關(guān)（r=0.357，P=0.002； r=0.435，P=0.000；r=0.267，P=0.024），各組間差異顯著（x2=9.912，P=0.019；x2=16.102，P=0.000；x2=6.261，P=0.100）； BVI與VEGF顯著正相關(guān)（r=0.405，P=0.000），各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=13.219，P=0.004），與

16、ER、PR、Her-2及EGFR均無關(guān)（r=-0.156，P=0.192；r=-0.143，P=0.232； r=0.074，P=0.534； r=0.160，P=0.180），各組間陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（x2=2.300，P=0.512； x2=4.812，P=0.186； x2=3.996，P=0.262；x2=7.534，P=0.057）。 結(jié)論: 1.D240標(biāo)記淋巴管特異性較強(qiáng)，染色效果較好，可做為可靠的淋巴

17、管標(biāo)記物，CD34染色效果較好，特異性不強(qiáng)，不僅血管染色，周圍間質(zhì)亦陽性染色。 2.在乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移過程中，癌細(xì)胞可能先浸潤淋巴管，血管浸潤較淋巴管浸潤晚，癌細(xì)胞浸潤的血管可能是腫瘤中已存在的血管，侵入血管的癌細(xì)胞可進(jìn)一步誘導(dǎo)新生血管的形成。 3.LVI和BVI與乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可早于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移出現(xiàn)，與大多乳腺癌不良預(yù)后指標(biāo)相關(guān)，提示其可能為一個不良預(yù)后指標(biāo)，是估計病情進(jìn)展，判斷預(yù)后，并制定有針對性的治療方