慢性溫和非預期應激加重斑禿模型小鼠脫毛及其機制的探討.pdf

1、目的：斑禿是一種常見的脫發(fā)疾病，其發(fā)病機制尚未完全闡明，但研究表明斑禿疾病的發(fā)生發(fā)展可能涉及免疫、微循環(huán)、精神心理等多種因素。本實驗第一部分是運用人工合成的小分子干擾素誘導劑咪喹莫特，利用其免疫修飾的作用來制備斑禿小鼠模型。實驗的第二部分是在斑禿模型的基礎上，對實驗小鼠進行慢性溫和非預期性應激，并采用擴血管藥前列地爾，利用其改善微循環(huán)的作用來干預慢性溫和非預期性應激的影響。目的是探討慢性溫和非預期應激在咪喹莫特誘導斑禿模型過程中的作用及

2、其分子機制，為斑禿疾病的心理干預提供新思路和實驗依據(jù)。
　　方法：1．采用咪喹莫特乳膏涂抹法建立C3H/HeJ小鼠斑禿模型，與空白對照組（Control組）比較，觀察咪喹莫特對小鼠皮膚組織的影響。2．將小鼠隨機分為空白對照組（Control組）、咪喹莫特組（M組）、咪喹莫特+慢性溫和非預期應激組（MS組）、咪喹莫特+慢性溫和非預期應激+前列地爾組（MSAL組）。選取實驗開始前1天和第7、14、21天對小鼠體重進行測量和拍照，實驗結

3、束后，對4組小鼠進行行為學評估、采集標本及檢測血中促腎上腺皮質激素（ACTH）的含量；采用ELISA試劑盒檢測小鼠皮膚中干擾素γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）的含量；采用血管內(nèi)皮細胞標記物CD31標記血管，并計算微血管密度（MVD）；采用免疫組織化學法檢測小鼠皮膚中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維細胞生長因子（BFGF）的表達變化。
　　結果：1．以咪喹莫特涂抹法造?？梢娦∈箜棽科つw脫毛現(xiàn)象明顯，呈斑片狀，檢

4、測其皮膚組織的免疫因子顯示IFN-γ和TNF-α因子的含量增高，皮損特點與人類斑禿具有相似性，可成功誘導斑禿模型。2．（1）MS組和MSAL組小鼠體重顯著低于 Control組和 M組小鼠（P<0.05），運動總距離和修飾行為次數(shù)顯著少于Control組和M組小鼠（P<0.05），而中央格停留時間顯著多于Control組和M組小鼠（P<0.05），MS和MSAL組小鼠血清ACTH含量顯著高于M組（P<0.05），提示慢性溫和非預期應激成

5、功模擬應激反應。（2）實驗結束時，同Control組相比， M組、MS組和MSAL組小鼠毛發(fā)均發(fā)生不同程度的脫落，MS組與MSAL組嚴重程度近似，M組較輕；M組、MS組和MSAL組小鼠皮膚組織中出現(xiàn)大量炎性細胞聚集，Control組小鼠只有少量或者沒有出現(xiàn)。（3）與Control組相比，M組、MS組和MSAL組小鼠皮膚組織中IFN-γ與TNF-α含量顯著增高（P<0.05），MS組和MSAL組小鼠皮膚組織中IFN-γ與TNF-

6、α含量顯著高于M組（P<0.05）。（4）和Control組小鼠相比，M組、MS組和MSAL組小鼠皮膚組織中的血管密度顯著降低（P<0.05）；和M組小鼠相比，MS組皮膚組織中的血管密度顯著降低（P<0.05）；和MS組相比，MSAL組小鼠皮膚組織中的血管密度顯著增高（P<0.05）。（5）和Control組小鼠相比，M組、MS組和MSAL組小鼠皮膚組織中VEGF和BFGF的免疫組織化學染色得分顯著降低（P<0.05）；和M組小鼠相比，

7、MS組小鼠皮膚組織中VEGF和BFGF的免疫組織化學染色得分顯著降低（P<0.05）；和MS組相比，MSAL組小鼠皮膚組織中VEGF的免疫組織化學染色得分顯著增高（P<0.05）。
　　結論：1．外用咪喹莫特可以引起毛發(fā)脫落，顯示成功建立小鼠斑禿模型。2．慢性溫和非預期應激能較好地模擬機體應激反應。3．慢性溫和非預期應激加重斑禿模型小鼠的毛發(fā)脫落，促進了小鼠皮膚組織免疫的進一步紊亂。4．慢性溫和非預期應激導致了小鼠的微循環(huán)變化，造