慢性復合應激對大鼠學習記憶損傷及其機制的初步研究.pdf

1、應激是指機體在受到各種因素刺激時所出現的非特異性的全身反應。應激源可以刺激機體引發(fā)應激反應，釋放激素和其他細胞因子，促進機體適應刺激；然而，當應激過度或機體不能適應調節(jié)時，則會產生有害的病理生理學改變。大腦是應激作用的主要靶器官之一，動物研究已發(fā)現應激可以誘導腦部結構和功能的改變，如神經細胞結構的改變，動物認知、行為的改變等?，F代自然、社會環(huán)境中，個體與各種應激因素相接觸，如寒冷、酷熱、潮濕等外部環(huán)境理化因素；營養(yǎng)缺乏、感覺剝奪等個體內

2、環(huán)境因素；還有如競爭失敗、喪失親人等心理社會環(huán)境因素。因此研究慢性復合應激對機體的影響尤其是對心理和認知功能的影響則顯得極為重要。
　　以往研究表明：慢性復合應激能夠對機體多系統尤其是中樞神經系統（central never system,CNS）產生損傷作用，其可能機制包括影響下丘腦-垂體-腎上腺軸（hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA）、影響谷氨酸（glutamine,Glu）及其受體

3、的釋放、影響突觸結構及其可塑性等。
　　小膠質細胞是中樞神經系統的一個重要的免疫駐留細胞，已有文獻報道持續(xù)活化的小膠質細胞能夠產生大量的炎性因子從而對神經元的代謝、關鍵蛋白的表達以及神經元的存活產生影響。研究顯示內外部環(huán)境的微小改變即能刺激并導致小膠質細胞活化從而對中樞神經系統產生影響?；诖宋覀兺茰y，小膠質細胞活化可能也在慢性復合應激致學習記憶損傷中發(fā)揮重要作用。
　　目的：
　　通過建立大鼠慢性復合應激動物模型，研

4、究慢性復合應激對大鼠學習記憶能力的影響及其機制，重點闡明小膠質細胞活化在慢性復合應激所致學習記憶損傷中的作用和分子調控機制，為慢性復合應激損傷的防治提供一定的實驗依據。
　　方法：
　　1．建立慢性復合應激動物模型：40只斷乳的SD雄性大鼠隨機分為四組：對照組（Con）；慢性復合應激組（MStress）（禁食/禁水，晝夜顛倒，鼠籠傾斜45度，單籠孤獨飼養(yǎng)，限制活動，4℃冷應激，20℃強迫游泳）；對照給藥組（Con+Mino）

5、；慢性復合應激給藥組（MStress+Mino）。
　　2．水迷宮檢測大鼠的空間記憶能力，膜片鉗技術檢測大鼠海馬離體腦片LTP誘導水平。
　　3．免疫組織化學染色檢測小膠質細胞活化狀態(tài)；ELISA法檢測細胞因子表達；TUNEL染色檢測海馬部位神經元細胞凋亡情況；Western Blot檢測Erk1/2、GluR1等蛋白表達情況。
　　結果：
　　1．慢性復合應激能夠誘導學習記憶能力降低
　　通過給予動物7種

6、不同的應激刺激建立大鼠慢性復合應激的動物模型，隱蔽平臺實驗結果顯示，慢性復合應激組大鼠到達平臺的潛伏期和對照組相比顯著延長（P<0.05）；空間探索實驗結果顯示，慢性復合應激組大鼠在目的象限的探索時間和對照組相比顯著縮短（P<0.05）；膜片鉗技術檢測發(fā)現慢性復合應激組大鼠海馬離體腦片LTP誘導水平顯著低于正常對照組（P<0.05）。
　　2．慢性復合應激能夠誘導小膠質細胞活化和海馬神經元細胞凋亡
　　免疫組織熒光化學法觀察

7、發(fā)現，慢性復合應激組大鼠海馬部位部分小膠質細胞胞體變粗，突觸減少，呈阿米巴樣，即活化狀態(tài)，海馬神經元細胞凋亡增加。統計結果發(fā)現慢性復合應激組小膠質細胞活化數量和海馬神經元細胞凋亡數量與對照組相比顯著增加（P<0.05）。ELISA法檢測結果發(fā)現慢性復合應激組炎性因子TNF-α、IL-1β表達水平顯著高于對照組（P<0.01）。
　　3．慢性復合應激能夠誘導海馬p-Erk1/2、GluR1表達水平的降低
　　Western B

8、lot檢測結果發(fā)現，慢性復合應激可導致大鼠海馬p-Erk1/2表達水平降低，GluR1表達降低（P<0.05）。
　　4.抑制小膠質細胞活化能夠降低其相關炎性因子的表達并逆轉海馬p-Erk1/2、GluR1表達的改變。
　　給予米諾環(huán)素干預后，小膠質細胞活化水平受到顯著抑制（P<0.05），其炎性因子TNF-α、IL-1β表達水平也顯著降低；經Western Blot檢測發(fā)現p-Erk1/2、GluR1表達水平均顯著恢復（P

9、<0.05）。
　　5.抑制小膠質細胞活化能夠保護海馬神經元細胞，并提高海馬LTP誘導水平及大鼠的學習記憶能力。
　　給予米諾環(huán)素干預后，慢性復合應激大鼠海馬神經元細胞凋亡數量顯著減少；海馬離體腦片LTP誘導水平較單純慢性復合應激組顯著升高（P<0.05）；水迷宮實驗檢測大鼠空間記憶能力顯著高于慢性復合應激組（P<0.05）。
　　結論：
　　1、慢性復合應激能夠導致大鼠海馬神經元凋亡及突觸可塑性改變，并導致學習