不同時程慢性應(yīng)激對大鼠中樞損傷與抗損傷效應(yīng)的研究.pdf

1、應(yīng)激(stress)是指個體在受到外界環(huán)境的刺激時出現(xiàn)的綜合性應(yīng)答狀態(tài)，包括精神、神經(jīng)、內(nèi)分泌和免疫等方面的反應(yīng)。應(yīng)激對健康具有雙重意義，適度的應(yīng)激能提高機體的適應(yīng)能力，但慢性、長期應(yīng)激則會對機體造成不同程度的損傷，嚴(yán)重時出現(xiàn)抑郁癥、學(xué)習(xí)記憶障礙、應(yīng)激性精神紊亂、癡呆、免疫力低下等多系統(tǒng)疾患。 下丘腦．垂體．腎上腺皮質(zhì)(HPA)軸激活及由此引起的糖皮質(zhì)激素(GCs)分泌增加，是應(yīng)激反應(yīng)的最重要特征。過度的，尤其是慢性的應(yīng)激引起H

2、PA軸持續(xù)激活，造成慢性GCs血癥，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)可造成危害。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，海馬、杏仁核、下丘腦、前額葉皮層及紋狀體等部位是與應(yīng)激關(guān)系密切的腦區(qū)。慢性應(yīng)激或皮質(zhì)醇處理可導(dǎo)致海馬與前額葉皮層細(xì)胞壞死、樹突萎縮等改變，并可導(dǎo)致紋狀體單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量下降。 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)屬于神經(jīng)營養(yǎng)素(NTs)家族，廣泛分布于大腦皮層、海馬、基底前腦、紋狀體和隔區(qū)，對多種神經(jīng)元具有促進(jìn)生存、分化，以及營養(yǎng)、保護(hù)的作用。動物實驗

3、證實，BDNF與應(yīng)激密切相關(guān)，慢性應(yīng)激可導(dǎo)致大鼠海馬CA3區(qū)以及前額葉皮層的BDNF表達(dá)明顯降低。在腦缺血再灌注損傷及帕金森病等動物模型中也發(fā)現(xiàn)皮層和紋狀體區(qū)BDNF水平的明顯下調(diào)。 雌激素除影響生殖功能外，對中樞神經(jīng)元還具有保護(hù)作用。雌激素可調(diào)節(jié)部分腦區(qū)BDNF及其受體的表達(dá)，而BDNF也可以調(diào)節(jié)雌激素受體在不同神經(jīng)細(xì)胞群的表達(dá)，雌激素可通過與BDNF這種“共調(diào)節(jié)”發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)作用。由于在慢性應(yīng)激時，下丘腦．垂體．性腺(HP

4、G)功能也會受到損傷。雌激素與BDNF均降低，因此通過外源性手段提高應(yīng)激時的雌激素與BDNF的水平，可起到應(yīng)激保護(hù)效應(yīng)。臨床已證實，雌激素替代治療(ERT)可以明顯改善產(chǎn)后精神障礙、絕經(jīng)后婦女的認(rèn)知功能；對于老年性癡呆病(AD)、缺血性腦損傷等都有治療作用。 但長期使用雌激素易引發(fā)乳腺、子宮或卵巢腫瘤，其應(yīng)用受到一定限制。中藥千金婦寶是基于補腎疏肝、益氣養(yǎng)血的治療原則研制而成，臨床觀察已經(jīng)證實其對女性內(nèi)分泌功能失調(diào)有肯定療效。本

5、實驗采用慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激模型(CUMS)，以行為學(xué)、各腦區(qū)(海馬、皮層、紋狀體)細(xì)胞形態(tài)及BDNF的表達(dá)、血清雌二醇(E<,2>)水平為指標(biāo)，探討：(1)慢性應(yīng)激過程中大鼠的行為、血清雌二醇水平與BDNF表達(dá)的動態(tài)變化：(2)藥物千金婦寶對慢性應(yīng)激損傷的保護(hù)作用。 實驗結(jié)果如下： 1．應(yīng)激前大鼠的各項行為學(xué)指標(biāo)無明顯差異。應(yīng)激14天和21天組，中央格停留時間較對照組明顯延長，水平跨格數(shù)、直立次數(shù)、洗臉次數(shù)較對照組顯

6、著減少。應(yīng)激第2天與基礎(chǔ)值相比，水平跨格、直立和修飾次數(shù)均降低。應(yīng)激時程是影響行為的重要因素。 2．應(yīng)激前，各組大鼠的液體消耗指標(biāo)均無差異。應(yīng)激第2天，CUMS組大鼠糖水消耗與糖水偏愛度降低，與對照差異顯著，其差異在應(yīng)激第7天組消失，應(yīng)激第14天，糖水消耗各項指標(biāo)均較對照組明顯降低，并持續(xù)至應(yīng)激第21天。應(yīng)激時程明顯影響糖水消耗和糖水偏愛度。 3．對照組大鼠各腦區(qū)的細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞排列整齊，核仁清晰可見。應(yīng)激組大鼠應(yīng)激

7、第7天，細(xì)胞體積腫脹、細(xì)胞淡染；應(yīng)激第14天，細(xì)胞萎縮、細(xì)胞間隙增大；應(yīng)激第21天，細(xì)胞明顯萎縮、細(xì)胞核固縮、破裂。大腦皮層及紋狀體神經(jīng)細(xì)胞也出現(xiàn)了程度不一的細(xì)胞損傷，表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)量減少，變性、死亡細(xì)胞增多。 4．對照組大鼠各腦區(qū)均可見棕黃色陽性表達(dá)，免疫陽性細(xì)胞主要見于神經(jīng)元的胞漿和突起。CUMS組大鼠各腦區(qū)的BDNF表達(dá)呈降低趨勢，在應(yīng)激的第7、14、21天與對照組比較均有顯著差異。應(yīng)激時程也是影響不同腦區(qū)BDNF表達(dá)的重要

8、因素。 5．慢性應(yīng)激組大鼠的E<,2>在應(yīng)激第2天較對照組降低，差異顯著；應(yīng)激7天，E2水平回升；應(yīng)激14天后，E<,2>水平再次降低，與對照組比較有顯著性差異，其差異持續(xù)至21天。 6．應(yīng)激21天后，藥物組與慢性應(yīng)激組比較，其血清E<,2>水平顯著升高；曠場實驗評分明顯改善，液體消耗實驗中糖水消耗與糖水偏愛度升高；各腦區(qū)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)明顯改善，細(xì)胞數(shù)目增多；各腦區(qū)BDNF免疫反應(yīng)陽性物增多。 研究結(jié)論：

9、1．慢性不可預(yù)見性應(yīng)激導(dǎo)致大鼠行為抑制出現(xiàn)在應(yīng)激第7至14天，且持續(xù)至21天。 2．慢性不可預(yù)見性應(yīng)激導(dǎo)致大鼠糖水消耗和血清E<,2>水平降低，其顯著性變化出現(xiàn)在應(yīng)激第14天和21天。 3．慢性不可預(yù)見性應(yīng)激導(dǎo)致的大鼠各腦區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)變化和BDNF表達(dá)于應(yīng)激第2至7天出現(xiàn)，并持續(xù)至21天。中樞神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)和BDNF表達(dá)的持續(xù)性改變早于行為和血清E<,2>的改變。 4．千金婦寶可顯著提高慢性應(yīng)激大鼠的自主行為和對