硫化氫對(duì)慢性應(yīng)激誘導(dǎo)海馬神經(jīng)損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：長(zhǎng)期慢性應(yīng)激導(dǎo)致下丘腦-垂體-腎上腺軸(hypothalamic-pituitary-adre nocorti-cal, HPA)軸功能亢進(jìn)、興奮性氨基酸(excitatoryaminoacid, EAA)生成過多等，引起氧化應(yīng)激，誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡，最終引起抑郁、焦慮樣等癥狀出現(xiàn)。如何防止慢性應(yīng)激所致海馬神經(jīng)的損傷，對(duì)防治慢性應(yīng)激所致精神情感異常具有重要意義。硫化氫(hydrogen sulphide, H2S)作為一種新型氣體

2、信號(hào)分子具有神經(jīng)調(diào)節(jié)功能和神經(jīng)保護(hù)作用。本研究擬建立慢性非預(yù)期溫和型應(yīng)激(Chronic Unpredictable Mild Stress，CUMS)模型，探討H2S對(duì)慢性應(yīng)激導(dǎo)致海馬神經(jīng)損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　方法：⑴將大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、CUMS組、CUMS+低濃度NaHS(1.68mg/kg)組、CUMS+高濃度 NaHS組(5.6mg/kg)；建立慢性非預(yù)期溫和型應(yīng)激(Chronic Unpredictable M

3、ild Stress，CUMS)模型；⑵亞甲基藍(lán)法檢測(cè)海馬組織內(nèi)源性H2S的生成；⑶HE染色觀察海馬CA3區(qū)細(xì)胞排列情況及細(xì)胞形態(tài)；⑷利用Tunel法檢測(cè)海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況；⑸應(yīng)用Elisa法測(cè)海馬組織 Klotho蛋白表達(dá)情況；⑹Brdu免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)大鼠海馬神經(jīng)元再生。
　　結(jié)果：①慢性應(yīng)激四周及腹腔注射 NaHS兩周后，灌流，固定腦組織，將腦組織進(jìn)行石蠟切片(5um)，進(jìn)行 HE染色，結(jié)果顯示，CUMS組大鼠海馬

4、CA3區(qū)細(xì)胞較對(duì)照組排列紊亂，細(xì)胞間隙增大，有神經(jīng)細(xì)胞的缺失；CUMS+低濃度NaHS組、CUMS+高濃度 NaHS組海馬 CA3區(qū)較 CUMS組細(xì)胞排列緊密、整齊，表明外源性 H2S能減 CUMS引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷。②慢性應(yīng)激四周及腹腔注射 NaHS兩周后，灌流，固定腦組織，將腦組織進(jìn)行石蠟切片(5um)，進(jìn)行 Tunel染色，結(jié)果顯示，CUMS組大鼠海馬 CA3區(qū)凋亡細(xì)胞較對(duì)照組增多(電鏡下凋亡細(xì)胞胞核呈深棕色)，CUMS+低濃度N

5、aHS組、CUMS+高濃度 NaHS組海馬 CA3區(qū)凋亡細(xì)胞較 CUMS組明顯減少，結(jié)果表明外源性 H2S可抑制 CUMS誘導(dǎo) CA3區(qū)細(xì)胞凋亡。③慢性應(yīng)激四周及腹腔注射 NaHS兩周后，斷頭取腦組織，分離出海馬，對(duì)海馬組織進(jìn)行勻漿，制成10％腦組織勻漿。Elisa法測(cè)海馬 Klotho蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示，CUMS組 Klotho蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯降低，CUMS組經(jīng)外源性 H2S處理后，海馬 Klotho蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，表明 CUM

6、S可抑制海馬 Klotho蛋白的表達(dá)，外源性 H2S可逆轉(zhuǎn) CUMS對(duì) Klotho蛋白表達(dá)的下調(diào)。④慢性應(yīng)激四周及腹腔注射 NaHS兩周后，斷頭取腦組織，分離出海馬，對(duì)海馬組織進(jìn)行勻漿，制成10％腦組織勻漿，亞甲基藍(lán)法檢測(cè)海馬內(nèi)源性 H2S的生成。結(jié)果顯示 CUMS可顯著抑制內(nèi)源性 H2S的生成，外源性 H2S可逆轉(zhuǎn) CUMS對(duì)海馬內(nèi)源性 H2S生成的抑制作用。⑤慢性應(yīng)激四周及腹腔注射 NaHS兩周，并在應(yīng)激的最后一周腹腔注射 Brd