硫化氫對小鼠阻塞性腎損傷的保護(hù)作用.pdf

1、背景：硫化氫是在哺乳動物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的繼一氧化碳和一氧化氮之后的又一種新型氣體信號分子，硫化氫可以在哺乳動物的很多組織和器官中被檢測到表達(dá)，參與了生物體內(nèi)各種的生理和病理活動并發(fā)揮著重要作用。最近的很多研究表明，硫化氫與多種阻塞性疾病有關(guān)，并且也有實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了硫化氫對腎臟纖維化具有保護(hù)作用。然而，硫化氫在腎臟纖維化中發(fā)揮的作用的具體的作用機(jī)制還不是很清楚和明確。慢性腎病是一種影響廣泛的疾病，其主要的特點(diǎn)是腎小球?yàn)V過率逐步降低，最終會導(dǎo)致腎功能

2、的衰竭。腎小管間質(zhì)纖維化是影響慢性腎病的最為主要決定性的因素，發(fā)生的主要原因是細(xì)胞外基質(zhì)的積聚以及腎間質(zhì)肌成纖維細(xì)胞的增殖等緣故。單側(cè)輸尿管結(jié)扎模型（UUO）是梗阻性腎病腎小管間質(zhì)纖維化的一個(gè)典型的模型，這個(gè)模型再現(xiàn)了阻塞性腎病最具代表性的特征，包括細(xì)胞滲透，腎小管細(xì)胞增殖和凋亡，以及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，成纖維化積累，細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的沉積，以及腎小管萎縮等，并且這個(gè)疾病模型已應(yīng)用于多個(gè)研究以評估在這些過程中所涉及的機(jī)制。由于U

3、UO模型可以引起腎臟輸尿管的完全梗阻，但是腎臟輸尿管完全阻塞是很少發(fā)現(xiàn)在人類身上的，所以這是UUO模型的一個(gè)不足之處，但它的優(yōu)點(diǎn)是可以快速地形成阻塞性腎病。自噬是一個(gè)細(xì)胞吞噬自身胞質(zhì)內(nèi)的蛋白質(zhì)等分子或者細(xì)胞器并使其包裹進(jìn)入囊泡，然后囊泡再與溶酶體進(jìn)行融合，再利用溶酶體內(nèi)的酶類復(fù)合物來降解其內(nèi)部所包裹的內(nèi)容物的過程，自噬可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞本身的代謝需要和某些細(xì)胞器的更新。有研究表明自噬在腎臟纖維化過程中起著重要的作用。
　　目的：探討硫化

4、氫在小鼠單側(cè)輸尿管結(jié)扎手術(shù)所引起的腎纖維化過程中的具體的保護(hù)作用，以及硫化氫在腎纖維化過程中可能的機(jī)制。
　　方法：將8周齡的雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（n=5）,實(shí)驗(yàn)組（n=5）和H2S處理的實(shí)驗(yàn)組（n=5）。在無菌條件下將實(shí)驗(yàn)組和硫化氫組小鼠左側(cè)輸尿管進(jìn)行結(jié)扎處理，假手術(shù)組打開左側(cè)腎臟外皮膚和肌肉，尋找到腎臟后即進(jìn)行縫合。H2S組小鼠腹腔注射H2S供體硫氫化鈉（NaHS），劑量為50μmol/次/天，對照組小鼠和假

5、手術(shù)組小鼠注射等體積的生理鹽水，每天一次。給藥7天，建模后第7天經(jīng)腹腔注射過量2％戊巴比妥鈉麻醉劑處死小鼠。取出腎臟，從中間切開，一半用于切片做組織觀察，一半用于提取蛋白和RNA。通過組織HE染色，觀察實(shí)驗(yàn)組和硫化氫組和假手術(shù)組三組小鼠腎臟的組織結(jié)構(gòu)有無差別，使用Masson染色方法，檢測其膠原蛋白。核酸凝膠電泳檢測CBS，CSE，3-MST等產(chǎn)生硫化氫氣體的酶的RNA的表達(dá)情況；蛋白電泳檢測LC3和Beclin-1的表達(dá)情況，評估其自

6、噬水平；蛋白電泳檢測腎臟fibronectin的表達(dá)情況，評估其纖維化程度。
　　結(jié)果：⑴產(chǎn)硫化氫的酶CBS，CSE和3-MST的RNA表達(dá)量在手術(shù)后降低。⑵UUO小鼠腎臟的膠原纖維染色比硫化氫處理組要多，且UUO小鼠腎臟纖維比假手術(shù)組要多。⑶與假手術(shù)組小鼠相比，實(shí)驗(yàn)組小鼠腎臟中FN的蛋白表達(dá)增高很多；而硫化氫組小鼠的FN表達(dá)量比實(shí)驗(yàn)組小鼠的FN表達(dá)量要少。⑷與假手術(shù)組小鼠相比，實(shí)驗(yàn)組小鼠腎臟中LC3-II蛋白和Beclin-1蛋