硫化氫對大鼠致痛作用的研究.pdf

1、目的:硫化氫(hydrogensulfide，H2S)是一種臭雞蛋氣味的氣體，常常被用作是化學(xué)用品。然而人體內(nèi)亦可產(chǎn)生微量的H2S。在體內(nèi)H2S可以由5-磷酸吡多醛依賴性酶—胱硫醚-β-合成酶(cystanthionine-β-synthetase，CBS)及胱硫醚-γ-裂解酶(cystanthionine-γ-lyase，CSE)和非5-磷酸吡多醛依賴性酶—3-巰基丙酮酸轉(zhuǎn)硫酶（3-mercaptopyruvatesulfurtran

2、sferase，3-MST）催化L-半胱氨酸產(chǎn)生。許多研究表明H2S參與體內(nèi)多種生理病理反應(yīng)如血壓調(diào)節(jié)，痛覺調(diào)制，炎癥反應(yīng)等。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，H2S可以作為一種神經(jīng)調(diào)質(zhì)而發(fā)揮作用，它可以通過增加N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-asparticacid，NMDA)受體介導(dǎo)的電流而誘導(dǎo)海馬長時程增強(long-termpotentiation，LTP)效應(yīng)。
　　 NMDA受體是興奮性谷氨酸受體。而脊髓NMDA受體在

3、疼痛的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。目前越來越多研究表明H2S與疼痛反應(yīng)之間有著密切聯(lián)系。無論是內(nèi)源性還是外源性的H2S均在痛覺中扮演者重要角色。但是H2S在痛覺調(diào)制中是否涉及到脊髓NMDA受體的參與目前尚未有研究報道。因此本研究旨在觀察H2S對大鼠行為學(xué)及脊髓NMDA受體表達的影響，以探討H2S參與疼痛的機制，為臨床治療疼痛提供新的策略。
　　 方法:
　　 1、采用鞘內(nèi)置管技術(shù)，32只正常Sprague-Dawley(SD

4、)大鼠通過髓鞘給予H2S的供體硫氫化鈉(sodiumhydrosulfide，NaHS)和（或）NMDA受體拮抗劑美金剛(memantine)，觀察大鼠機械縮足閾值(pawwithdrawalthreshold，PWT)的變化，并采用westernblot方法測定給予NaHS后脊髓背角NR1和NR2B蛋白表達情況。
　　 2、經(jīng)大鼠足底給予NaHS5天，觀察大鼠PWT變化，并利用RT-PCR及westernblot方法測定脊髓背

5、角和背根神經(jīng)節(jié)(dorsalrootganglion，DRG)中NR2BmRNA和蛋白的表達變化，并同時與足底注射福爾馬林作對比。另外在足底注射NaHS大鼠中，髓鞘內(nèi)預(yù)先給予H2S清除劑高鐵血紅蛋白(methemoglobin)及CBS抑制劑羥胺(Hydroxylamine，HA)，觀察大鼠PWT變化，并測定脊髓背角NR2B蛋白表達變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、鞘內(nèi)注射NaHS對大鼠PWT及脊髓背角NMDA受體表達的影

6、響
　　 鞘內(nèi)給予NaHS15分鐘后大鼠PWT出現(xiàn)明顯降低(P＜0.05)，PWT可由（14.40±1.83）g降至（5.76±1.82）g。而預(yù)先鞘內(nèi)給予美金剛可以完全取消此效應(yīng)(P＜0.05)。
　　 鞘內(nèi)注射NaHS后大鼠脊髓背角NR1蛋白表達上調(diào)(P＜0.05)，NR2B蛋白未見明顯變化。
　　 2、連續(xù)足底給予NaHS或福爾馬林對大鼠PWT及脊髓背角和DRGNR2B表達的影響
　　 大鼠足底給予

7、NaHS后對側(cè)足底PWT出現(xiàn)明顯持續(xù)性降低(P＜0.05)，PWT可由（13.50±2.30）g降至(4.20-1.86)g;而足底注射福爾馬林PWT未見明顯變化。
　　 大鼠足底注射NaHS后脊髓背角NR2BmRNA及蛋白明顯上調(diào)(P＜0.05)，而DRGNR2B未見變化;足底給予福爾馬林大鼠脊髓背角和DRGNR2BmRNA及蛋白均明顯上調(diào)（P＜0.05）。
　　 3、鞘內(nèi)預(yù)先給予高鐵血紅蛋白或羥胺對NaHS誘發(fā)疼痛的

8、緩解作用及對脊髓背角NR2B蛋白表達的影響
　　 鞘內(nèi)預(yù)先給予高鐵血紅蛋白可以完全逆轉(zhuǎn)足底注射NaHS誘發(fā)PWT的下降(P＜0.05)，并伴隨脊髓背角NR2B蛋白表達下調(diào)(P＜0.05)。
　　 鞘內(nèi)預(yù)先給予羥胺可以部分逆轉(zhuǎn)NaHS誘發(fā)PWT的下降(P＜0.05)，并伴隨脊髓背角NR2B蛋白表達部分下調(diào)(P＜0.05)，但仍未恢復(fù)至正常水平。
　　 結(jié)論:
　　 1、鞘內(nèi)給予NaHS可以誘發(fā)大鼠痛覺過敏，