牛磺酸調(diào)節(jié)cAMP-PKA-CREB信號(hào)通路活性促進(jìn)生長(zhǎng)受限胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞增殖的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：宮內(nèi)生長(zhǎng)受限(Intrauterine growth restriction，IUGR)是指各種因素致胎兒在宮內(nèi)的生長(zhǎng)受到限制，不能發(fā)揮最佳潛能，出生體重明顯低于正常。母親、胎兒以及胎盤(pán)等方面的多種病理因素均可導(dǎo)致IUGR的發(fā)生。IUGR可導(dǎo)致多臟器功能受累，對(duì)腦發(fā)育的不良影響尤為突出，嚴(yán)重影響遠(yuǎn)期神經(jīng)功能。?；撬嵩谀X發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要作用，但機(jī)體自身合成較少，胎兒依靠胎盤(pán)轉(zhuǎn)運(yùn)獲取足夠的?；撬帷１菊n題組前期的實(shí)驗(yàn)研究顯示:孕鼠補(bǔ)充

2、牛磺酸可改善IUGR鼠腦發(fā)育，如改善腦超微結(jié)構(gòu)、增加神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量等，這些作用可能是通過(guò)調(diào)節(jié)cAMP-PKA-CREB信號(hào)通路活性實(shí)現(xiàn)的。?；撬峥烧{(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞(Neural Stem Cells，NSC)的增殖、存活、粘附能力，但牛磺酸對(duì)IUGR胎鼠NSC增殖的影響以及機(jī)制尚未清楚。因此，本研究將通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探討IUGR對(duì)胎鼠NSC增殖的影響、產(chǎn)前補(bǔ)充?；撬釋?duì)IUGR胎鼠NSC增殖的影響以及牛磺酸調(diào)節(jié)IUGR胎鼠NSC增殖的可能機(jī)制。

3、
　　方法:采用全程限制飲食的方法建立IUGR模型，即IUGR組孕鼠自受孕之日起僅給予對(duì)照組正常飲食的40％量喂養(yǎng);體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分對(duì)照組、IUGR組、牛磺酸組（IUGR孕鼠自孕7天起加300mg/kg/d?；撬?，自然分娩后稱取體重及腦重;免疫組織化學(xué)染色法、RT-PCR、Western Blot的方法檢測(cè)各組腦組織內(nèi)NSC數(shù)量以及cAMP-PKA-CREB信號(hào)通路關(guān)鍵因子(PKA，cAMP,CREB，p-CREB，BDNF,GDNF

4、,c-fos，c-jun，CaMKⅡ)的表達(dá);體外分離對(duì)照組及IUGR組胎鼠NSC，免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)細(xì)胞FABP-7和Nestin的表達(dá)，CCK8試驗(yàn)以及細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)不同濃度?；撬釋?duì)IUGR胎鼠NSC增殖的影響，RT-PCR方法檢測(cè)不同濃度?；撬嵋约靶盘?hào)通路抑制劑H89處理NSC后各組cAMP-PKA-CREB信號(hào)通路關(guān)鍵因子的表達(dá)。SPSS20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
　　結(jié)果:全程限制飲食的方法可成功建立IUGR新

5、生鼠以及胎鼠模型;孕鼠補(bǔ)充?；撬峥擅黠@降低IUGR的發(fā)生，減少死亡率，使腦重增加;IUGR組胎鼠腦內(nèi)NSC的數(shù)量明顯減少，補(bǔ)充牛磺酸后IUGR組NSC數(shù)量明顯增加(P＜0.05);IUGR胎鼠腦內(nèi)cAMP-PKA-CREB信號(hào)通路關(guān)鍵因子的表達(dá)與對(duì)照組相比有顯著差異，牛磺酸組關(guān)鍵因子的表達(dá)較IUGR組明顯改變，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。IUGR胎鼠NSC體外增殖能力及細(xì)胞數(shù)量明顯降低，牛磺酸體外干預(yù)可使IUGR胎鼠NSC增殖能力

6、明顯增加，且與濃度有關(guān)(P＜0.05);IUGR胎鼠NSC體外培養(yǎng)條件下cAMP-PKA-CREB信號(hào)通路關(guān)鍵因子的表達(dá)受到抑制，部分因子呈代償性增加，與對(duì)照組相比有明顯差異，牛磺酸干預(yù)后相關(guān)因子的表達(dá)發(fā)生明顯變化，差異有有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:IUGR胎鼠腦內(nèi)NSC數(shù)量減少，孕鼠補(bǔ)充牛磺酸后IUGR胎鼠NSC數(shù)量增加;IUGR胎鼠NSC體外增殖能力降低，牛磺酸可促進(jìn)IUGR胎鼠NSC體外增殖;牛磺酸可能通過(guò)上調(diào)