胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定和HGF體外誘導(dǎo)分化的研究.pdf

1、目的1.建立昆明種胚胎小鼠神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)、鑒定技術(shù)。 2.探討肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞分化的誘導(dǎo)作用。 方法將孕14天小鼠引頸處死，分離取出胚鼠大腦皮層，制成單細(xì)胞懸液，采用無(wú)血清培養(yǎng)法，在表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)作用下培養(yǎng)，觀察不同階段的神經(jīng)干細(xì)胞生長(zhǎng)情況。連續(xù)傳代，傳至第三代后，加入不同濃度的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)，觀察神經(jīng)干細(xì)胞的分化情況。用免疫熒光技術(shù)對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞及分化

2、情況進(jìn)行鑒定，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果從胚胎小鼠大腦皮層中分離培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞能快速增殖形成懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞團(tuán)。經(jīng)免疫熒光技術(shù)鑒定，細(xì)胞團(tuán)Nestin抗體標(biāo)記陽(yáng)性且原代及傳代細(xì)胞團(tuán)Nestin抗體標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞比例無(wú)明顯變化(P＞0.05)，誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞NSE和GFAP標(biāo)記陽(yáng)性。 去除表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)，加入不同濃度HGF，并誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化。用免疫熒光技術(shù)對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的分化情況進(jìn)行

3、檢測(cè)，計(jì)算NSE和GFAP陽(yáng)性細(xì)胞率。實(shí)驗(yàn)表明隨著HGF濃度逐漸增高，NSE陽(yáng)性細(xì)胞率也逐漸增高，HGF組NSE陽(yáng)性細(xì)胞率與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(P＜0.05)，且同一濃度組中的NSE陽(yáng)性細(xì)胞率較GFAP陽(yáng)性細(xì)胞率有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(P＜0.05)。 結(jié)論證實(shí)從胚胎小鼠大腦皮層分離培養(yǎng)出的細(xì)胞是神經(jīng)干細(xì)胞，表明體外培養(yǎng)體系中培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)傳代培養(yǎng)后仍保持能干細(xì)胞的特性。HGF能誘導(dǎo)胚胎小鼠神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元方向分化，且具