芹菜葉酚類物質(zhì)的分離純化、鑒定及抗氧化活性研究.pdf

1、芹菜是一種二年生的傘型花科草本植物，具有抗氧化、抗癌、抗炎、降血壓、降血脂、鎮(zhèn)痛等作用，其中，抗氧化活性是眾多生物活性的基礎(chǔ)。芹菜中的酚類化合物是發(fā)揮上述功效的重要成分，其中芹菜葉是酚類物質(zhì)含量最多的一個(gè)部位。然而，目前對(duì)芹菜酚類物質(zhì)的研究主要集中在粗提物或芹菜素等個(gè)別單體的活性上，針對(duì)芹菜中主要酚類物質(zhì)的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定研究報(bào)道較少，對(duì)芹菜酚類單體種類的研究不夠徹底，無法全面闡述單體物質(zhì)在抗氧化活性中發(fā)揮的作用以及構(gòu)效關(guān)系。因此，本

2、研究以芹菜葉為原料，采用柱層析、制備型高效液相色譜對(duì)芹菜葉醇提物進(jìn)行分離純化，制備出高純度芹菜葉酚類單體化合物;通過多種儀器分析手段對(duì)芹菜葉酚類單體化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析;最后通過化學(xué)抗氧化試驗(yàn)和肝癌細(xì)胞抗氧化試驗(yàn)，對(duì)芹菜葉酚類物質(zhì)的抗氧化活性進(jìn)行研究，篩選出具有高抗氧化活性的成分，并探究芹菜葉酚類物質(zhì)抗氧化能力與結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系，闡明芹菜葉各酚類單體化合物在抗氧化中發(fā)揮的作用，結(jié)果如下:
　　(1)通過高效液相色譜(HPLC)測定芹

3、菜葉酚類物質(zhì)粗提液，分析芹菜葉中主要存在17種酚類化合物。然后，采用D101大孔樹脂、制備型高效液相、Sephadex LH-20葡聚糖凝膠色譜對(duì)芹菜葉粗提物進(jìn)行分離純化與制備，共獲得14種單體，HPLC檢測純度均大于96％。
　　(2)通過液相色譜-電噴霧離子阱串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-ESI-MS/MS)、紫外光譜(UV)、紅外光譜（IR）和核磁共振技術(shù)(NMR)對(duì)芹菜葉酚類提取液與制備分離組分進(jìn)行物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定，共鑒定出17種化合物

4、，分別為:綠原酸、對(duì)香豆奎寧酸、木犀草素-7-O-葡萄糖-2-O-芹糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、芹菜苷、3’-甲氧基芹菜苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、6-丙二?；?木犀草素-7-O-葡萄糖-2-O-芹糖苷、柯伊利素-7-O-葡萄糖苷、6-丙二?；?木犀草素-7-O-葡萄糖苷、6-丙二?；鄄塑铡?-丙二?；?柯伊利素-7-O-葡萄糖-2-O-芹糖苷、6-丙二?；?芹菜素-7-O-葡萄糖苷、6-丙二?；?柯伊利素-7-O-葡萄糖苷、

5、木犀草素、芹菜素、柯伊利素。芹菜葉的酚類成分主要為芹菜素、木犀草素、柯伊利素及它們的衍生物以及一些酚酸類物質(zhì)。
　　(3)通過化學(xué)抗氧化試驗(yàn)(DPPH、ABTS、ORAC)與細(xì)胞抗氧化(CAA)試驗(yàn)對(duì)芹菜葉酚類物質(zhì)的抗氧化活性進(jìn)行研究。四種方法結(jié)果表明木犀草素、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖-2-O-芹糖苷、6-丙二酰基-木犀草素-7-O-葡萄糖苷均具有較高的抗氧化活性，并存在一定的量效關(guān)系;綠原酸、芹菜素、

6、柯伊利素及其衍生物在體外抗氧化實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出較好的抗氧化能力，但細(xì)胞抗氧化能力較低;DPPH和ABTS法的試驗(yàn)結(jié)果均表明，B環(huán)具有3'，4'-鄰二羥基的木犀草素的抗氧化活性顯著高于僅含4'-OH的芹菜素(P＜0.05)，A環(huán)O-連黃酮苷的抗氧化性低于其苷元，而ORAC法則顯示出芹菜素的抗氧化活性顯著高于木犀草素(P＜0.05);CAA法結(jié)果顯示，當(dāng)C環(huán)無羥基時(shí)，B環(huán)只有一個(gè)4'-OH的芹菜素及其黃酮苷無細(xì)胞抗氧化活性，但B環(huán)有兩個(gè)羥基的木