血必凈干預重癥急性胰腺炎致肝損傷機制的實驗研究.pdf

1、第一章重癥急性胰腺炎致肝損傷機制的實驗研究
　　目的:
　　通過建立牛磺膽酸鈉誘導的重癥急性胰腺炎（SAP）大鼠模型，觀察 SAP大鼠胰腺大體及組織損傷情況、肝臟大體及組織損傷情況、肝細胞凋亡情況及肝臟 CD4 mRNA、IL-22及p-STAT3、Cleaved Caspase-3蛋白表達情況，探討上述指標在重癥急性胰腺炎大鼠肝損傷中的作用及其可能的機制。
　　方法:
　　將48只Sprague-Dawley(

2、SD)雄性大鼠隨機分為假手術組（sham operation，SHAM組）（n=24）、重癥急性胰腺炎組（SAP組）（n=24），每組再分3h、6h、12h三個亞組（n=8）。SHAM組僅翻動胰腺，不注射牛磺膽酸鈉，SAP組用5％?；悄懰徕c(Sodium Taurocholate，Na Tc)經胰膽管逆行注射制備SAP模型,分別于造模后各時間點處死大鼠，采用無菌操作法采集大鼠腹主動脈血、收集胰腺及肝臟標本待測。采用全自動生化儀檢測血清淀

3、粉酶、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）和門冬氨酸氨基轉移酶（AST）水平,采用HE染色觀察胰腺及肝臟組織損傷情況并對其進行病理評分，采用實時定量聚合酶鏈反應（Real-time PCR）法檢測肝臟CD4在mRNA水平的表達情況；采用免疫組化染色及Western blotting法檢測肝臟組織IL-22、p-STAT3、Cleaved Caspase-3的蛋白表達；采用TUNEL法觀察肝臟細胞凋亡情況。
　　結果:
　　SAP組制模

4、后各時間點血清淀粉酶、ALT和AST水平均高于相同時間假手術組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；SAP組胰腺及肝組織病理評分均明顯高于假手術組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。SAP組肝臟CD4mRNA及IL-22蛋白表達與假手術組相比明顯減弱，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。SAP組肝臟p-STAT3、Cleaved Caspase-3蛋白較假手術組表達明顯增強,差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。TUNEL法檢測肝臟細胞凋亡顯示

5、重癥急性胰腺炎組肝細胞凋亡較假手術組明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結論:
　　1、采用5%?；悄懰徕c經胰膽管逆行注射制備重癥急性胰腺炎模型,病理學證實胰腺出現(xiàn)不同程度水腫、出血、壞死及炎性細胞浸潤，表明大鼠重癥急性胰腺炎制模成功，而且模型穩(wěn)定，可重復性好。
　　2、隨重癥急性胰腺炎的發(fā)展，胰腺病理評分逐漸升高，大鼠血清 ALT與 AST逐漸升高，肝組織病理學損傷亦進行性加重，證實重癥急性胰腺炎時出現(xiàn)

6、了肝功能障礙和肝臟損傷。
　　3、隨著重癥急性胰腺炎發(fā)展，大鼠的肝細胞凋亡明顯增加，肝臟組織中 CD4 mRNA、IL-22蛋白表達進行性減弱，p-STAT3、Cleaved Caspase-3蛋白表達增強，說明以上指標可能與大鼠SAP肝損傷有關。
　　第二章血必凈干預重癥急性胰腺炎致肝損傷機制的實驗研究
　　目的：
　　通過觀察 SAP大鼠經血必凈治療后胰腺大體及組織損傷情況、肝臟大體及組織損傷情況、肝細胞凋亡

7、等的變化來了解血必凈對 SAP大鼠胰腺及肝臟損傷的干預作用；同時通過觀察大鼠肝臟組織CD4 mRNA、IL-22及p-STAT3、Cleaved Caspase3蛋白表達情況、肝細胞凋亡等的變化，來了解血必凈對 SAP合并肝損傷治療作用的可能機制。
　　方法：
　　將72只SD雄性大鼠隨機分為假手術組（SHAM組）（n=24）、重癥急性胰腺炎組（SAP組）（n=24）和血必凈干預組（XBJ組）（n=24），每組再分3h、6h

8、、12h三個亞組（n=8）。以0.1 mL/min速率向膽胰管內注入5%?；悄懰徕c（0.1 mL/100 g）制備SAP模型。XBJ組在制模后腹腔內一次性注射血必凈注射液（4 mL/kg）。SHAM組打開腹腔后僅翻動胰腺，但不注射藥物。分別于造模后各時間點處死大鼠，無菌操作法分別收集大鼠腹主動脈血、胰腺及肝臟標本待測。采用全自動生化儀檢測血清淀粉酶、ALT和AST水平,采用HE染色觀察胰腺及肝臟組織損傷情況并對其進行病理評分，采用實時定

9、量聚合酶鏈反應（Real-time PCR）法檢測肝臟CD4在mRNA水平的表達情況；采用免疫組化、Western blotting法檢測肝臟組織IL-22、p-STAT3、Cleaved Caspase-3的蛋白表達；采用TUNEL法觀察肝臟細胞凋亡情況。
　　結果：
　　SAP組、XBJ組制模后各時間點血清淀粉酶、ALT和AST水平均高于同期SHAM組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；XBJ組制模后各時間點血清淀粉酶、

10、ALT、AST水平均低于胰腺炎組同期，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。SAP組、XBJ組胰腺組織及肝組織病理評分明顯高于SHAM組，但XBJ組胰腺組織及肝組織病理評分較SAP組明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。XBJ治療組肝臟組織CD4 mRNA及IL-22蛋白表達較SAP組明顯增強，XBJ組肝臟p-STAT3及Cleaved Caspase-3蛋白表達較SAP組明顯減弱，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。XBJ組大鼠肝細胞