丙戊酸對百草枯-脂多糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎性極化的作用.pdf

1、目的:急性百草枯（Paraquat，PQ）中毒和膿毒癥(Sepsis)是急診科常見的急危重癥。無論是急性PQ中毒的氧化損傷，還是膿毒癥的病原體感染，均可引發(fā)過度炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致多臟器功能不全甚至死亡，目前尚無特效的治療手段。組蛋白的乙?；揎検茄芯恳呻y復(fù)雜疾病發(fā)病機(jī)制及治療的重要路徑，組蛋白去乙?；?histone deacetylase，HDAC)是維持組蛋白乙?；癄顟B(tài)的關(guān)鍵酶，參與免疫細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞）的激活、促炎及抗炎信號(hào)的轉(zhuǎn)

2、導(dǎo)等過程，影響巨噬細(xì)胞的功能表型或者極化狀態(tài)(M1/M2)之間的轉(zhuǎn)換。本研究分別用PQ和脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)作為刺激因素，分析HDAC抑制劑丙戊酸(Valproicacid，VPA)對二者誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞炎性極化的作用及異同點(diǎn)，進(jìn)而探索損傷和感染誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)可能機(jī)制及治療靶點(diǎn)。
　　方法:將小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7置于37℃、5％CO2飽和濕度的孵箱中培養(yǎng)，經(jīng)過穩(wěn)定傳代后，細(xì)胞生長約80％接觸率

3、時(shí)，進(jìn)行如下兩部分實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)一:分別以不同濃度的HDACⅠ（VPA、Apicidin及MC1568）處理巨噬細(xì)胞，并于1h、2h和8h檢測細(xì)胞存活率，選擇不導(dǎo)致巨噬細(xì)胞死亡的HDACⅠ最佳濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)二;實(shí)驗(yàn)二:分別給予巨噬細(xì)胞如下處理因素:PQ、PQ+VPA（HDACⅠ和Ⅱa類抑制劑）、PQ+Apicidin（HDACⅠ類抑制劑）、PQ+MC1568(HDACⅡa類抑制劑)、LPS、LPS+VPA、LPS+Apicidin及LPS+M

4、C1568，于8h后收集以上各組細(xì)胞上清及細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行如下檢測:ELISA檢測巨噬細(xì)胞M1型標(biāo)志物(TNF-α)和M2標(biāo)志物(IL-10)的表達(dá);RT-PCR檢測巨噬細(xì)胞M1型標(biāo)志物(CD16 mRNA及iNOSmRNA)和M2型標(biāo)志物(CD206 mRNA及Arg-1mRNA)的表達(dá);流式細(xì)胞檢測巨噬細(xì)胞M1型標(biāo)志物(NOS2)及M2標(biāo)志物(Arg-1)的表達(dá)。
　　結(jié)果:通過實(shí)驗(yàn)一選擇3mM的VPA，0.01μM的Apicidi

5、n和10μM的MC1568用于實(shí)驗(yàn)二。通過實(shí)驗(yàn)二，我們發(fā)現(xiàn)PQ和LPS皆升高全部4個(gè)M1型標(biāo)志物（CD16 mRNA、iNOS mRNA、TNF-α及iNOS）和M2型標(biāo)志物（Arg-1）的表達(dá)，此外，PQ和LPS還分別增加M2型標(biāo)志物(CD206 mRNA)和(IL-10)的表達(dá)。與PQ作用的巨噬細(xì)胞相比，PQ+VPA降低2個(gè)M1型標(biāo)志物（iNOS mRNA及TNF-α）和1個(gè)M2型標(biāo)志物(IL-10)水平;PQ+Apicidin降低

6、3個(gè)M1型標(biāo)志物（CD16 mRNA、iNOS mRNA及TNF-α）和1個(gè)M2型標(biāo)志物（Arg-1 mRNA）水平，同時(shí)還升高1個(gè)M2型標(biāo)志物（Arg-1）水平;PQ+MC1568降低3個(gè)M1型標(biāo)志物（CD16 mRNA、iNOS mRNA及TNF-α）和3個(gè)M2型標(biāo)志物(CD206mRNA、Arg-1 mRNA及Arg-1)水平，三者的總體效應(yīng)均是抑制M1極化，由強(qiáng)到弱依次為Apicidin＞VPA＞MC1568。與LPS作用的巨噬

7、細(xì)胞相比，LPS+VPA降低全部4個(gè)M1型標(biāo)志物和1個(gè)M2型標(biāo)志物（Arg-1）水平，同時(shí)還升高1個(gè)M2型標(biāo)志物（IL-10）水平;LPS+Apicidin降低全部4個(gè)M1型標(biāo)志物和2個(gè)M2型標(biāo)志物（IL-10及Arg-1）水平;LPS+MC1568降低全部4個(gè)M1型標(biāo)志物水平，同時(shí)還升高2個(gè)M2型標(biāo)志物（Arg-1及IL-10）水平，三者的總體效應(yīng)均是抑制M1極化，由強(qiáng)到弱依次為MC1568＞VPA＞Apicidin。
　　結(jié)論