釀酒酵母菌重要蛋白質(zhì)HMO2的初步晶體學(xué)研究.pdf

1、背景：高速泳動(dòng)族蛋白(HMGB)是一類廣泛存在于真核生物的非組蛋白家族，有著高度保守的三維結(jié)構(gòu)，在轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA修復(fù)、基因重組、細(xì)胞分化和胞外信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等過程中扮演著重要的角色。作為HMGB蛋白質(zhì)超家族的成員之一，HMO2在進(jìn)化上高度保守且分布廣泛提示該蛋白質(zhì)具有重要的生物學(xué)功能，如ATP依賴性染色體重建、DNA損傷修復(fù)等。目前，釀酒酵母菌HMO2蛋白的三維結(jié)構(gòu)還沒有得到解析，其具體的功能機(jī)制也尚不清楚。
　　目的：解析釀酒酵母菌

2、重要蛋白質(zhì)HMO2的三維結(jié)構(gòu)，并基于其結(jié)構(gòu)研究功能，進(jìn)而了解其具體的功能機(jī)制，為進(jìn)一步的染色體重建和DNA損傷修復(fù)研究打下基礎(chǔ)。
　　方法：將HMO2基因重組到pET22b載體上，構(gòu)建pET22b-HMO2重組表達(dá)質(zhì)粒，用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)該蛋白，通過金屬離子親和層析柱(Ni-NTA)、陰離子交換層析(Resource Q)和凝膠排阻層析（分子篩Superdex200）進(jìn)行純化，得到足夠純度的目的蛋白。用分子篩分析蛋白在溶液

3、中的聚集狀態(tài)。通過氣相擴(kuò)散法，培養(yǎng)蛋白質(zhì)晶體，用X-射線衍射儀收集晶體衍射數(shù)據(jù)，再進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理以解析晶體三維結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果：通過分子克隆技術(shù)成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET22b-HMO2;通過蛋白表達(dá)純化相關(guān)技術(shù)成功獲得了純度達(dá)98％的目的蛋白質(zhì)HMO2;凝膠排阻層析(Superdex200)結(jié)果顯示HMO2蛋白質(zhì)在溶液中以二聚體形式存在。培養(yǎng)出晶型好、偏光能力強(qiáng)的母體蛋白質(zhì)單晶。在上海同步輻射光源收到晶體的衍射數(shù)據(jù)以供結(jié)構(gòu)解析使