褐飛虱類(lèi)酵母共生菌不同抗性菌株的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、本文在測(cè)定褐飛虱類(lèi)酵母共生菌不同抗性菌株對(duì)不同濃度吡蟲(chóng)啉的敏感性的基礎(chǔ)上，通過(guò)篩選褐飛虱類(lèi)酵母共生菌菌體蛋白質(zhì)的最佳提取方法，利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究了褐飛虱類(lèi)酵母共生菌在吡蟲(chóng)啉脅迫下的蛋白質(zhì)表達(dá)譜變化以及差異蛋白質(zhì)的功能分析，并推測(cè)出類(lèi)酵母共生菌在褐飛虱對(duì)吡蟲(chóng)啉抗性發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制。其研究結(jié)果如下:
　　(1)通過(guò)比較褐飛虱類(lèi)酵母共生菌不同抗性菌株在含不同濃度(500mg/L、1000mg/L、2000mg/L)吡蟲(chóng)啉的固體培

2、養(yǎng)基上的菌落數(shù)和液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)量差異，發(fā)現(xiàn)馴化后的抗性菌株在長(zhǎng)期低溫保存中對(duì)吡蟲(chóng)啉的抗性有所下降，但仍保持較高抗性水平。確定了28℃，180r/min下培養(yǎng)72h方能收集到適量的不同抗性菌株的菌絲體，可用于蛋白質(zhì)提取和雙向電泳分析。
　　(2)在明確超聲波破碎法是褐飛虱類(lèi)酵母共生菌菌體蛋白質(zhì)最佳提取方法的基礎(chǔ)上，利用2-D電泳和圖像分析方法研究了褐飛虱類(lèi)酵母共生菌抗吡蟲(chóng)啉菌株和敏感菌株在吡蟲(chóng)啉脅迫下的蛋白表達(dá)譜。結(jié)果表明，敏感

3、菌株與其500mg/L吡蟲(chóng)啉處理菌株相匹配的蛋白點(diǎn)為1063個(gè)，有150個(gè)顯著性差異蛋白點(diǎn)。敏感菌株與抗性菌株相匹配的蛋白點(diǎn)為1142個(gè)，有33個(gè)顯著性差異蛋白點(diǎn)。抗性菌株與其500mg/L吡蟲(chóng)啉處理菌株相匹配的蛋白點(diǎn)為987個(gè)，有134個(gè)顯著性差異蛋白點(diǎn)。抗性菌株與其2000mg/L吡蟲(chóng)啉處理的菌株相匹配的蛋白點(diǎn)為1079個(gè)，有97個(gè)顯著性差異蛋白點(diǎn)。研究結(jié)果闡明了褐飛虱類(lèi)酵母共生菌在吡蟲(chóng)啉脅迫下的蛋白質(zhì)表達(dá)譜及其變化規(guī)律。
　

4、　(3)采用膠內(nèi)酶解、質(zhì)譜技術(shù)及網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定了表達(dá)量差異2倍以上的蛋白點(diǎn)70個(gè)，其中55個(gè)蛋白點(diǎn)成功鑒定。利用國(guó)際蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，預(yù)測(cè)這些蛋白質(zhì)的可能功能，涉及到合成與代謝、細(xì)胞抗逆與防御、信號(hào)傳導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄和翻譯、膜及運(yùn)輸、調(diào)控作用、解毒作用及未知功能蛋白等功能類(lèi)別。經(jīng)過(guò)分析推測(cè)出褐飛虱共生菌中與抗藥性相關(guān)的蛋白質(zhì)可能有細(xì)胞色素P450、乙酰輔酶A脫氫酶和細(xì)胞色素C過(guò)氧化物酶等。研究結(jié)果為進(jìn)一步分析基因功能，篩選與殺蟲(chóng)劑解毒/降解相關(guān)的關(guān)