萍鄉(xiāng)紅鯽ZP3蛋白組織差異性表達及其在卵母細胞中免疫熒光定位.pdf

1、萍鄉(xiāng)紅鯽(Pingxiang red—transparent crucian carp,Carassius auratusvar.Pingxiangnensis)主要分布于江西省萍鄉(xiāng)地區(qū),是三倍體野生鯽魚的一種突變種。因其通體呈肉紅色、透明而得名肉紅鯽,是一種集食用和觀賞價值于一體的鯽魚品種,在2008年被國家水產(chǎn)原良種委員會審定為新的養(yǎng)殖品種-萍鄉(xiāng)紅鯽。萍鄉(xiāng)紅鯽可以行雌核發(fā)育和兩性生殖兩種生殖方式。
　　 本論文主要包括以下三

2、部分:
　　 一、利用RACE-PCR技術克隆得到萍鄉(xiāng)紅鯽ZP3基因cDNA全長序列,該序列全長1385bp,有一個1308bp的完整開放閱讀框,編碼435個氨基酸,經(jīng)過氨基酸序列比對,121-376位氨基酸殘基屬于ZP家族domain超家族結(jié)構(gòu)域。
　　 二、利用熒光定量PCR的方法檢測了ZP3基因在萍鄉(xiāng)紅鯽卵巢、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、腦等組織中的差異性表達,相對定量分析結(jié)果顯示ZP3基因在肝臟中表達量最低,在卵巢組

3、織中的表達量顯著多于其他五個組織,約是肝臟中的26656倍,除卵巢組織外,ZP3基因在所檢測的其他五個組織中都有微量的表達。
　　 三、將純化好的ZP3蛋白作為抗原免疫白兔,制備得到了多克隆兔抗魚ZP3蛋白血清。用Elisa間接法檢測了抗血清的效價。將得到的抗血清用于卵母細胞冰凍切片免疫熒光定位實驗。Elisa實驗結(jié)果顯示:抗血清效價約為25600且抗血清的特異性良好。免疫熒光實驗結(jié)果顯示:在早期發(fā)育的卵母細胞中,就有少量的ZP