miRNA-331在大腸癌中生物學(xué)功能研究.pdf

1、目的：
　　將人大腸癌細(xì)胞株HCT116進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，再進(jìn)行miRNA-331mimics轉(zhuǎn)染，采用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、MTT法和Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miRNA-331對(duì)人大腸癌細(xì)胞 HCT116的增殖能力、克隆形成、遷移能力、侵襲能力的影響。闡明miRNA-331對(duì)大腸癌的發(fā)生、發(fā)展的影響，探討miRNA-331作為腫瘤基因標(biāo)記物對(duì)大腸癌診斷的價(jià)值，為大腸癌的早期診斷、早期治療提供理論和依據(jù)。
　　方法：
　

2、　1、選取中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)生命科學(xué)院分子病理實(shí)驗(yàn)室提供的大腸癌細(xì)胞株HCT116進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
　　2、將 HCT116細(xì)胞進(jìn)行 miRNA-331mimics轉(zhuǎn)染，設(shè)實(shí)驗(yàn)組（轉(zhuǎn)染miRNA-331mimics組）和對(duì)照組（negative control，NC）。
　　3、應(yīng)用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察轉(zhuǎn)染miRNA-331mimics后HCT116細(xì)胞集落形成情況。
　　4、采用MTT法觀察轉(zhuǎn)染miRNA-331mimi

3、cs后第1天、第2天、第3天、第4天、第5天分別檢測(cè)5個(gè)同一時(shí)段的OD值，并繪制細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。
　　5、通過(guò)Transwell小室實(shí)驗(yàn)觀察HCT116細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNA-331mimics后其遷移能力及侵襲能力的變化。
　　6、采用SPSS20.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)對(duì)比分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間配對(duì)樣本采用配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組間獨(dú)立樣本采用非配對(duì)t檢驗(yàn)，均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：

4、r>　　1、在平板克隆形成實(shí)驗(yàn)中，兩組間細(xì)胞集落形成的數(shù)量和體積均有明顯差異，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞集落形成數(shù)量較對(duì)照組減少，集落形成體積明顯小于對(duì)照組。
　　2、HCT116細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNA-331mimics后第1天、2天、3天、4天、5天，采用MTT比色分析法檢測(cè)OD值，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組結(jié)果分別為第1天：（0.08±0.07、0.10±0.08），（t=-3.42,P<0.05）；第2天：（0.11±0.01、0.16±0.04），（t

5、=-3.33,P<0.05）；第3天：（0.39±0.10、0.62±0.21），（t=-2.49,P<0.05）；第4天：（0.75±0.10、1.20±1.94），（t=-5.05,P<0.05）；第5天：（1.13±0.23、2.23±0.30），（t=-7.19,P<0.05）。通過(guò)對(duì)比發(fā)現(xiàn)隨著HCT116細(xì)胞中miRNA-331mimics的含量增多可抑制細(xì)胞的增殖，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、HCT116細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR

6、NA-331mimics后，通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞進(jìn)入下方培養(yǎng)液數(shù)量減少，表明轉(zhuǎn)染后的HCT116細(xì)胞的遷移能力減弱。
　　4、HCT116細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNA-331mimics后，通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)觀察實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞進(jìn)入下方培養(yǎng)液中，兩組結(jié)果為陰性，表明轉(zhuǎn)染后的 HCT116細(xì)胞的侵襲能力無(wú)明顯變化。
　　結(jié)論：
　　miRNA-331mimics有抑制大腸癌HCT116細(xì)胞