大腸癌致病基因篩選及KIT基因在大腸癌中的生物學(xué)功能研究.pdf

1、大腸癌是發(fā)病率及致死率皆高的常見(jiàn)惡性腫瘤，轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是患者死亡的主要原因。雖然大腸癌的診療技術(shù)隨著輔助化療和多學(xué)科協(xié)作治療的發(fā)展取得了長(zhǎng)足的進(jìn)展，但伴有轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)大腸癌患者的預(yù)后并不理想。隨著基因技術(shù)的發(fā)展，利用高通量技術(shù)探尋大腸癌發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中的關(guān)鍵致病基因，尋找能為臨床診斷及用藥帶來(lái)價(jià)值的生物標(biāo)記物，研究相關(guān)基因的生物學(xué)功能，為大腸癌的治療提供理論依據(jù)為目前研究的熱點(diǎn)。
　　本論文由以下三個(gè)部分內(nèi)容組成:
　　1、大腸

2、癌的分子診斷及分子頻譜研究
　　本研究共收集36例Ⅲ、Ⅳ期大腸癌患者的組織及外周血樣本，將樣本的DNA提取后利用Ion Proton高通量測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行靶向捕獲測(cè)序及生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)在77.27％的患者中，基因突變?cè)诮M織類(lèi)型間表現(xiàn)相對(duì)一致，通過(guò)血液樣本進(jìn)行的捕獲測(cè)序結(jié)果有可能作為精準(zhǔn)診斷或者用藥指導(dǎo)的依據(jù)。在捕獲測(cè)序中，我們發(fā)現(xiàn)突變頻率較高的基因?yàn)門(mén)P53、KRAS、APC和KIT。接著，我們?cè)u(píng)估了外周血KRAS突變狀態(tài)與腫瘤分

3、期的相關(guān)性，外周血KRAS突變組與KRAS野生型組相比，伴隨更多的突變位點(diǎn)，與腫瘤分期存在一定的相關(guān)性，相比傳統(tǒng)臨床指標(biāo)CEA、CA199等更有臨床診斷價(jià)值。
　　2、大腸癌中原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶差異SNP與CNV的比較研究
　　收集3名患者的大腸癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移共計(jì)6例樣本。通過(guò)芯片檢測(cè)和生物信息學(xué)方法分析差異SNPs與CNVs。通過(guò)GO與KEGG分析，我們發(fā)現(xiàn)大腸癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶在細(xì)胞粘附和血管生成的生物學(xué)功能與信號(hào)

4、轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上存在一定的差異，同時(shí)，發(fā)現(xiàn)大腸癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶間差異SNP引起編碼改變的基因有KIT、gHR，IL3和TSLP等基因。另外，我們發(fā)現(xiàn)并驗(yàn)證了大腸癌原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶上的三個(gè)差異CNVs(chr13:65798303-65883830;chr19:58540860-58570697; chr22:19966749-19985507)，這三個(gè)CNVs在大腸癌的原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中存在顯著差異，且這三個(gè)差異CNVs可能成為評(píng)估大腸癌發(fā)

5、展階段的生物標(biāo)志物。
　　3、KIT基因在大腸癌中的生物學(xué)功能研究
　　在前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)KIT基因的突變與大腸癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，故而我們選擇KIT基因進(jìn)行了細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證其與大腸癌的關(guān)系。首先，我們利用qPCR比較了大腸癌組織和癌旁組織中的KIT的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)大腸癌組織KIT的表達(dá)量顯著高于癌旁組織。接著我們?cè)诩?xì)胞水平，利用siRNA載體敲除KIT基因，通過(guò)CCK-8和克隆形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大腸癌細(xì)胞的增殖能力