FHL2基因在大腸癌發(fā)生與去分化中的作用.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)2003級碩士學(xué)位論文FIE2基因在大腸癌發(fā)生與去分化中的作用EffectivenessofFHL2genesinhumanColorectalCancergenesisanddedifferentiation課題來源：自選課題專業(yè)名’稱學(xué)位申請人指導(dǎo)教師內(nèi)科學(xué)(消化系病)楊洲王繼德副教授張亞歷教授答辯委員會主席陳曼湖教授答辯委員會成員張世能副教授文卓夫教授周杰教授張振書教授論文評閱人曾志榮副教授吳承堂副教授2006年5月1

2、0日廣州中文摘要blotting檢測結(jié)腸癌組織和癌旁組織中FHL2蛋白的表達(dá)。2、抑制FHL2基因?qū)Υ竽c癌細(xì)胞分化的影響：(1)用Westernblotting檢測不同大腸癌細(xì)胞株SW620、SW1I16、SW480、DLDI、HCTl5、HT29、LoVo和Coi0205中FHL2蛋白的基礎(chǔ)表達(dá)：(2)建立穩(wěn)定表達(dá)空載體LoVo細(xì)胞系(LoVo／Vector)和穩(wěn)定表達(dá)FHL2反義基因LOVo細(xì)胞系(LoVo／FHL2AS)并鑒定；(

3、3)用相差顯微鏡觀察LoVo／Vector和LoVo／FHL2ASl細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的表現(xiàn)；(4)經(jīng)n一微管蛋白抗體和Hochest22358分別標(biāo)記細(xì)胞漿和細(xì)胞核，用免疫熒光顯微鏡觀察LoVoNector和LoVo／FHL2ASI細(xì)胞骨架與細(xì)胞核的變化：(5)用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(盯pCR)檢測LoVo／Vector、LoVo柵，2一ASI和LoVo／FHL2一AS2中細(xì)胞分化指標(biāo)癌胚抗原(CEA)和上皮細(xì)胞鈣粘蛋白(E—Cadheri

4、n)的表達(dá)；(6)經(jīng)羅丹明毒肽標(biāo)記LoVoNector和LoVo／FHL2一ASI細(xì)胞中的絲狀肌動蛋白(F—actin)，用免疫熒光顯微鏡觀察其細(xì)胞核和絲狀肌動蛋白的形態(tài)變化：(7)用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)檢測LoVo／Vector、LoVo／FHI_2一ASI和LoVoq：lH_2一AS2，觀察大腸癌相關(guān)癌基因存活素(survivin)，環(huán)氧化酶；2(cox一2)，人端粒逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)和cqunmRNA的表達(dá)：(8

5、)經(jīng)不同濃度的小牛血清(FBS)培養(yǎng)的LoVo／Vector、LoVo／FHL2ASl和LoVo／FHL2一AS2細(xì)胞，用噻唑藍(lán)(M丌)法測定其對血清的增殖反應(yīng)。結(jié)果用SPSS120統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用秩和檢驗，并進(jìn)行兩兩比較，P005表明有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果：l、臨床標(biāo)本中FHL2蛋白的表達(dá)檢測：(1)用免疫組織化學(xué)法檢測FHL2蛋白的表達(dá)，F(xiàn)HL2蛋白主要定位于細(xì)胞核，細(xì)胞質(zhì)有少許表達(dá)正常大腸粘膜組織中不表達(dá)或低表達(dá)，而在大腸癌

6、組織中表達(dá)水平較高，F(xiàn)HL2蛋白表達(dá)水平與大腸癌分化程度負(fù)相關(guān)，分化程度越低其表達(dá)程度越高；(2)Westernblotting發(fā)現(xiàn)FHL2在結(jié)腸癌組織中高表達(dá)，而在結(jié)腸癌旁組織中不表達(dá)或低表達(dá)。2、抑制FHL2基因?qū)Υ竽c癌分化影響的體外細(xì)胞實驗：(1)腸癌緬胞株SW620、SWlll6、Sw480、DLDI、HCTl5、HT29、LoVo、Col0205均表達(dá)相當(dāng)量的FHL2蛋白，而在部分分化的HT29細(xì)胞幾乎不表達(dá)；(2)成功建立了