原位雜交檢測三個新基因在大腸癌中的表達.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文原位雜交檢測三個新基因在大腸癌中的表達姓名：葉鋒申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：方士昌2000.5.1f的探針與細胞內(nèi)RNA進行雜交以觀察特定基因RNA表達水平；與分裂中期染色體DNA雜交以研究染色質(zhì)中特定核酸序列在染色體中的精確的定位：此外，還可用特異性的細菌、病毒的核酸作為探針對組織、細胞進行雜交，以確定有無該病原體的感染，等等Es。由于ISH能在復(fù)雜的組織中進行單一細胞的研究而不受同一組織中其他成分的影

2、響，因此對于那些細胞數(shù)量少且散在于其他組織中的細胞內(nèi)DNA或RNA研究更為方便。同時由于ISH不需要從組織細胞中提取核酸，對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性，并可完整地保持組織與細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，更能準(zhǔn)確地反映組織與細胞的相互關(guān)系及功能代謝狀態(tài)。2基本步驟ISH是一個多步驟的工程，包括：1)生物材料的制備2)核酸探針的選擇和制各3)與標(biāo)記探針進行雜交4)信號檢測5)微鏡觀察和影像分析21生物材料的制備ISH細胞和組織切片的制備涉及到

3、最大限度的保持靶核酸序列和維持良好形態(tài)的原則。為了防止細胞和組織在雜交過程中從玻片上流失，一些物質(zhì)被添加到玻片上。如多聚賴氨酸或aminopropyltriethoxysilane。22探針的選擇和制備目前常用的探針有四種：DNA、cDNA、RNA、寡核苷酸探針。根據(jù)不同的雜交實驗要求，應(yīng)選擇不同的核酸探針。在人多數(shù)情況F，可以選擇克隆的DNA或cDNA雙鏈探針。但是在有些情況下，必須選用其他類型的探針，如RNA或寡核苷酸探針。例如，在

4、檢測靶序列上的單個堿基改變時應(yīng)選用寡核苷酸探針，在檢測單鏈靶序列時應(yīng)選用與其互補的DNA單鏈探針或RNA探針，寡核苷酸探針亦可。長的雙鏈DNA探針特異性較強，適宜檢測復(fù)雜的靶核苷酸序列和病原體，但不適宜于組織ISH，因為它不易透過細胞膜進入胞內(nèi)或核內(nèi)，此時，寡核苷酸探針和PCR標(biāo)記探針(80～150bp)具有較大的優(yōu)越性。為增加ISH的特異性和進一步提高信噪比，PNA(Peptidenucleicacid，多肽核酸)和Padlock探針