PDCD5基因在大腸癌中的表達及其對藥敏的影響.pdf

1、PDCD5 基因是北京大學人類疾病基因中心從白血病細胞系TF-1細胞中克隆得到的、具有自主知識產(chǎn)權的新功能基因。PDCD5 基因在多種腫瘤如宮頸癌、肝癌、多發(fā)性骨髓瘤、胃癌、肺癌等疾病中表達下降，可能與其發(fā)生有關，但其在腫瘤癌變過程中所起的作用并不十分清楚。大腸癌是常見的消化道腫瘤，在腫瘤疾病發(fā)生發(fā)展過程中具有典型多階段性。為了明確 PDCD5 基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程的作用，我們選取在大腸癌變過程中的不同階段的組織，以及大腸癌細胞系，分

2、別從組織水平、細胞蛋白水平及 mRNA 水平明確 PDCD5 基因在大腸癌疾病不同階段的表達，初步探討其在癌變過程中的作用；同時對其臨床預后做了隨訪調查，明確其臨床意義。為了進一步探討 PDCD5 基因在治療方面的作用，我科成功構建了攜帶 PDCD5 基因的重組慢病毒載體；在本研究中，將上述重組載體轉染結腸癌細胞系 HCT116，使PDCD5基因過表達，進而檢測轉染前后 HCT116細胞增殖能力和凋亡細胞比例的變化，期望能為腫瘤治療提供

3、新的方法。
　　 方法：
　　 選取2007年12月-2008年12月經(jīng)我院病理科確診的46例大腸癌、20例腺瘤性息肉及28例慢性炎癥患者的組織應用S-P免疫組化方法檢測PDCD5基因在其中的表達，并與臨床資料比較，對其中46例大腸癌患者進行電話隨訪預后。選取大腸癌細胞HCT116、HT29及人臍靜脈內(nèi)皮細胞Huvec，應用免疫細胞化學方法檢測各細胞中PDCD5在蛋白水平的表達；RT-PCR方法檢測其在mRNA水平的表達

4、。在PDCD5的功能性研究方面，選擇慢病毒作為載體，應用本室保存的攜帶PDCD5基因的重組慢病毒L-PDCD5及對照慢病毒空載體L-null，穩(wěn)定轉染大腸癌細胞系HCT116，并常規(guī)傳代培養(yǎng)?；熕幬?-fu設定5個濃度誘導轉染前后細胞凋亡，利用MTT法測定各組細胞增殖能力改變，計算出5-fu的半數(shù)抑制濃度；根據(jù)MTT結果，5-fu選定高低兩個濃度誘導HCT116細胞凋亡，應用AnnexinV/PI雙染色流式
　　 結果：

5、>　　 PDCD5在慢性炎癥組織中表達最高，明顯高于腺瘤性息肉及癌組織中的表達（x2=10.495，P<0.05），但在腺瘤性息肉和癌組織、以及不同分級的大腸癌之間的表達無明顯差異（P=0.552）；隨訪病例中PDCD5表達高的患者，生存評分較高。PDCD5在人臍靜脈內(nèi)皮細胞株Huvec中表達高于結腸癌細胞株中的表達。目的基因PDCD5能被重組慢病毒L-PDCD5高效地導入靶細胞結腸癌HCT116細胞，轉染率達80-90％，轉染后細胞

6、可以傳代培養(yǎng)，熒光顯微鏡下能直接觀察到綠色熒光存在，即PDCD5達到穩(wěn)定的表達。RT-PCR能檢測到轉染后的靶細胞中PDCD5的表達明顯高于未轉染的細胞。MTT法結果顯示L-PDCD5組細胞的抑制率在各個濃度顯著高于L-null空載體組及單純細胞組（P<0.05）。流式結果示，低濃度組中，L-PDCD5組細胞凋亡率（24.74％）明顯高于正常細胞組（13.25％）和L-null組（24.74％）：高濃度組中，L-PDCD5 組的細胞凋亡