2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:2型糖尿?。═ype2 diabetes mellitus,T2DM)的遺傳背景與基因多態(tài)性密切相關(guān)。Caveolin-3(Cav-3)是肌肉特異性蛋白,它可以調(diào)節(jié)胰島素信號通路。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)T2DM病人Cav-3基因外顯子存在多處變異位點。為了觀察Cav-3基因突變是否影響胰島素受體信號途徑,改變骨骼肌細(xì)胞糖代謝,從而參與T2DM的發(fā)病機制,我們將Cav-3 K15N突變基因?qū)隒2C12細(xì)胞,對其表達的突變蛋白進行相關(guān)功

2、能研究。
  方法:利用生物信息學(xué)預(yù)測Cav-3第一外顯子K15N(KU971296)、D16H和N33N三個突變點蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu),然后選擇二級結(jié)構(gòu)改變明顯的K15N突變進行研究。分別構(gòu)建陰性對照組、野生型組以及Cav-3 K15N突變組表達載體轉(zhuǎn)染C2C12細(xì)胞。G418篩選后,胰島刺激30min,運用Western Blot技術(shù)和IF技術(shù)鑒定Cav-3、AKT、pAKT以及GLUT-4等蛋白的表達情況;在12h、24h測定C

3、2C12肌細(xì)胞對葡萄糖的攝取量和36h細(xì)胞內(nèi)糖原合成量。
  結(jié)果:1.分析發(fā)現(xiàn)K15N、D16H屬于錯義突變,N33N屬于同義突變。生物信息學(xué)預(yù)測Cav-3蛋白質(zhì)二級無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)變?yōu)槁菪Y(jié)構(gòu)的有K15N和D16H兩個位點。
  2.經(jīng)400μg/ml的G418篩選后,得到穩(wěn)定表達的細(xì)胞系。Westernblot鑒定證實篩選成功,組間轉(zhuǎn)染效率沒有統(tǒng)計學(xué)差異。
  3.與野生型組相比,K15N突變使骨骼肌細(xì)胞Cav-3

4、蛋白總體表達降低,而且富集在細(xì)胞核周圍,細(xì)胞膜分布減少。其下游信號分子AKT磷酸化減少,但總AKT蛋白表達水平無明顯變化。細(xì)胞GLUT-4蛋白不僅總體表達水平下降,而且在細(xì)胞膜上聚集成團。
  4.Cav-3 K15N突變蛋白導(dǎo)致C2C12細(xì)胞對葡萄糖攝取減少。在12h,K15N突變組與陰性對照組和野生型組相比,p值分別等于0.042和0.000;在24h,K15N突變組與野生型組比較p=0.010,有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異,但是與陰性

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