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文檔簡介
1、目的:探討細(xì)胞周期調(diào)控系統(tǒng)“Cyclin D1-CDK4/CDK6-p21”在皮膚病理性瘢痕和瘢痕癌中的作用。
方法:(1)采用激光掃描共聚焦顯微技術(shù),對瘢痕癌和病理性瘢痕石蠟切片組織進行Cyclin D1和p21免疫熒光雙標(biāo)記,同時采集三維立體圖象。(2)應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色(SP)法,分別檢測瘢痕癌、病理性瘢痕和正常皮膚三組組織中Cyclin D1、CDK4、CDK6、p21蛋白的表達。(3)采用核酸分子原位雜交技術(shù)檢
2、測Cyclin D1mRNA、CDK4mRNA、CDK6mRNA、p21 mRNA在三組組織中的表達。(4)對各項指標(biāo)進行相關(guān)性分析,計算平均光密度和陽性面積,并結(jié)合圖像分析,所有數(shù)據(jù)運用SPSS17.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析。
結(jié)果:(1)免疫熒光雙標(biāo)記結(jié)果:Cyclin D1和p21在瘢痕癌癌組織中呈較強熒光,為高表達;在病理性瘢痕上皮中呈微弱熒光,為陰性表達。(2)免疫組織化學(xué)和原位雜交結(jié)果:Cyclin D1、CDK
3、4、CDK6、p21蛋白和Cyclin D1mRNA、CDK4mRNA、CDK6mRNA、p21 mRNA在瘢痕癌癌組織中呈高表達,在病理性瘢痕上皮中呈低表達,在正常皮膚表皮呈陰性表達。瘢痕癌組表達強度(平均光密度)和表達水平(陽性面積)分別與病理性瘢痕及正常皮膚組相比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);但病理性瘢痕組與正常皮膚組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。(3)相關(guān)性分析:在瘢痕癌組織中,Cyclin D1與CDK4、
4、Cyclin D1與CDK6、p21與CDK4、p21與CDK6、CDK4與CDK6的表達均呈正相關(guān)。
結(jié)論:(1)瘢痕癌的發(fā)生與Cyclin D1、CDK4、CDK6的異常表達有關(guān),Cyclin D1可能是通過與CDK4、CDK6結(jié)合形成復(fù)合物,促進細(xì)胞周期G1/S期轉(zhuǎn)化,導(dǎo)致細(xì)胞異常增生,瘢痕癌發(fā)生。(2)瘢痕癌中“Cyclin D1-CDK4和CDK6”復(fù)合物活性的抑制調(diào)控,可能是CKI家族的其它成員或者有CDK家族
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