左卡尼汀對(duì)波動(dòng)性高糖處理的大鼠心肌細(xì)胞脂聯(lián)素受體表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究主要目的:本課題意研究波動(dòng)性高糖對(duì)大鼠心肌細(xì)胞脂聯(lián)素受體(AdipoR)表達(dá)的影響，并探討在補(bǔ)充了L-CN后心肌細(xì)胞AdipoR的表達(dá)變化情況。從而明確L-CN在其中的作用。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果像預(yù)期所想，那么我們可以推想左旋卡尼汀在改善糖尿病心肌能量代謝的同時(shí)，可通過增加脂聯(lián)素受體的表達(dá)水平達(dá)到降低胰島素抵抗及糖尿病相關(guān)性肥胖的作用。并可通過后續(xù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、臨床觀察驗(yàn)證此設(shè)想。從而左旋卡尼汀可為同時(shí)患有缺血性心臟疾病，糖尿病的患者帶來福音。

2、
　　 研究方法:一、大鼠心肌細(xì)胞（RMCs）的培養(yǎng)與鑒定SD大鼠心肌細(xì)胞株(購(gòu)自上海中科院)，細(xì)胞復(fù)蘇，DMEM培養(yǎng)基（6.1mmol/L）常規(guī)培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)并鑒定細(xì)胞存活率。二、波動(dòng)性高糖處理大鼠心肌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞先經(jīng)過無血清DMEM（6.1mmol/L）培養(yǎng)基預(yù)處理12h，使其處于同步化狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)分組：普通培養(yǎng)基組、高糖培養(yǎng)基組、波動(dòng)性高糖培養(yǎng)基組、L-CN 處理各組。波動(dòng)性高濃度葡萄糖(即每8h輪換加

3、入5.5mmol/L或20mmol/L葡萄糖溶液)常規(guī)培養(yǎng)5d。后用CCK8 法檢測(cè)RMCs的增殖活化情況。三、L-CN刺激波動(dòng)性高糖處理的大鼠心肌細(xì)胞（一）不同濃度L-CN刺激24h。L-CN 處理組（工作濃度分別為102μμ,2.5×102μμ,5×102μμ，103μμ，104μΜ）。（二）一定濃度L-CN 刺激不同時(shí)間L-CN工作濃度5×102μμ，L-CN處理組(5×102μμ刺激0h、4h、8h、12h、24h、36h、48

4、h)，四、檢測(cè)CCK8 法檢測(cè)RMCs增殖活化情況。ReAltime PCR 檢測(cè)AdipoR mRNA表達(dá)的改變。五、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)用x±s表示，所有統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)均用SPSS l8.0軟件處理：組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)，方差齊性用LSD方法比較；方差不齊用Dunnett’s方法比較。P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果:（一）細(xì)胞計(jì)數(shù)及存活率鑒定臺(tái)盼藍(lán)染色RMCs存活率在90％以上，能滿足實(shí)驗(yàn)需要

5、。（二）CCK8 法檢測(cè)RMCs的增殖活化情況1、CCK8 法檢測(cè)RMCs在不同濃度L-CN 刺激24h后的增殖活化情況。與普通培養(yǎng)基組相比，高糖組心肌細(xì)胞OD值降低不明顯；波動(dòng)性高糖組心肌細(xì)胞OD值減小，與普通培養(yǎng)基組比較具有顯著性差異(P<0.05)；L-CN（5×102μΜ）處理組較波動(dòng)性高糖組OD值增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；L-CN（2.5×102、103、104μΜ）處理組較波動(dòng)性高糖組OD值增加,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>

6、0.05)；L-CN（105、106μΜ）處理組較波動(dòng)性高糖組OD值下降。2、CCK8 法檢測(cè)RMCs在一定濃度L-CN刺激不同時(shí)間后的增殖活化情況。與普通培養(yǎng)基組相比，高糖組心肌細(xì)胞OD值降低不明顯；波動(dòng)性高糖組心肌細(xì)胞的OD值減小具有顯著性差異(P<0.05)；L-CN（5×102μμ刺激4h、8h、12h）較波動(dòng)性高糖組OD值增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；L-CN（5×102μμ刺激24h、36h、48h）較波動(dòng)性高糖組OD值增加(P<0

7、.05)。3、不同濃度L-CN 刺激24h后AdipoR mRNA表達(dá)情況與普通培養(yǎng)基組比較，波動(dòng)性高糖處理組AdipoR mRNA的表達(dá)顯著性下降（P<0.01）；與波動(dòng)性高糖處理組比較在加入L-CN處理的各組心肌細(xì)胞中，AdipoR1、AdipoR2mRNA的表達(dá)均顯著性升高(P<0.01)；且L-CN的工作濃度在5×102μμ時(shí)AdipoR mRNA升高最明顯(P<0.01)。4、一定濃度L-CN 刺激不同時(shí)間后AdipoR mR

8、NA表達(dá)情況與波動(dòng)性高糖組比較，在加入L-CN（5×102μΜ）處理的各時(shí)相心肌細(xì)胞中，AdipoR1mRNA的表達(dá)均有升高，且在藥物作用24h時(shí)升高最明顯(P<0.05)。與AdipoR1相比AdipoR2 mRNA的表達(dá)表現(xiàn)出不穩(wěn)定的特點(diǎn)。與波動(dòng)性高糖組比較，在加入L-CN（5×102μΜ）處理4h時(shí)AdipoR2 mRNA的表達(dá)不升反而下降；12h時(shí)與波動(dòng)性高糖組比較升高但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意（P>0.05）；作用在24h、36h、48h時(shí)

9、AdipoR2 mRNA的升高與作用時(shí)間成正相關(guān)(P<0.01)。
　　 結(jié)論:波動(dòng)性高糖與單純高糖相比對(duì)細(xì)胞的損害作用更強(qiáng)，左卡可在一定程度上降低波動(dòng)性高糖引起的細(xì)胞損害作用，藥物有效濃度在102-104μμ之間，且左卡對(duì)波動(dòng)性高糖處理的大鼠心肌細(xì)胞的這種促增值作用表現(xiàn)出時(shí)間依賴性的特點(diǎn)。L-CN處理后RMCs AdipoR1mRNA、AdipoR2 mRNA均明顯增高（P<0.01），當(dāng)L-CN工作濃度在5×102μμ時(shí)，A