N-乙酰半胱氨酸保護(hù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性及其分子機(jī)制探討.pdf

1、目的：
　　觀察N-乙酰半胱氨酸（N-Acetyl-cysteine，NAC）預(yù)處理對內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）活性的影響，探討其減輕血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）和飽和脂肪酸棕櫚酸（Palmitic acid，PA）刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）損傷eNO

2、S活性的作用機(jī)制。
　　方法:
　　SABC法進(jìn)行HUVECs細(xì)胞鑒定后分別予以AngⅡ（1.0×10-7M、1.0×10-6M作用12h）和PA（25μM、50μM、100μM、200μM作用24h及100μM作用12h、24h、36h）刺激。此外，給予活性氧（reactive oxygen species，ROS）清除劑 NAC預(yù)處理，隨機(jī)分為正常對照（Control）組、AngⅡ組、單純NAC組和NAC+AngⅡ組（1

3、.0×10-3M NAC預(yù)處理1h后給予AngⅡ處理）以及溶媒對照（vehicle control）組、PA（50μM、100μM作用24h）組、單純NAC組和NAC+PA組（1.0×10-3M NAC預(yù)處理1h后給予PA處理）。采用Western Blot方法檢測eNOS蛋白的表達(dá)、eNOS Ser1177磷酸化水平、PP2A-Cα蛋白表達(dá)、PP2A C亞基Tyr307磷酸化水平以及PP2A內(nèi)源性抑制蛋白I2PP2A的表達(dá)水平；化學(xué)比

4、色法檢測細(xì)胞結(jié)構(gòu)型一氧化氮合酶（constitutive NOS，cNOS）的活性以及培養(yǎng)基中一氧化氮（nitric oxide，NO）的含量。
　　結(jié)果：
　?。?）與Control組相比，AngⅡ刺激后eNOS蛋白表達(dá)無明顯變化、eNOS Ser1177磷酸化水平明顯降低（p<0.05），PP2A-Cα蛋白表達(dá)無明顯變化、PP2A-c Y307磷酸化水平、I2PP2A蛋白表達(dá)水平明顯降低（p<0.05），cNOS活力、N

5、O含量明顯降低（p<0.05）；與vehicle control組相比，PA刺激后eNOS蛋白表達(dá)無明顯變化、eNOS Ser1177磷酸化水平明顯降低（p<0.05），PP2A-Cα蛋白表達(dá)、PP2A-c Y307磷酸化水平及I2PP2A蛋白表達(dá)水平均無明顯變化，cNOS活力、NO含量明顯降低（p<0.05）。（2）NAC預(yù)處理后，與同濃度AngⅡ組相比，eNOS蛋白表達(dá)無明顯變化、eNOS Ser1177磷酸化水平顯著升高（p<0.

6、05），PP2A-Cα蛋白表達(dá)無明顯變化、PP2A-c Y307磷酸化水平、I2PP2A蛋白表達(dá)水平均顯著升高（p<0.05），cNOS活力、NO含量明顯增加（p<0.05）；NAC預(yù)處理后，與同濃度 PA組相比，eNOS蛋白表達(dá)無明顯變化、eNOS Ser1177磷酸化水平顯著升高（p<0.05），PP2A-Cα蛋白表達(dá)、PP2A-c Y307磷酸化水平及 I2PP2A蛋白表達(dá)水平仍無明顯變化，cNOS活力、NO含量增加（p<0.05