NYD-SP15在年齡相關性黃斑變性中的作用研究.pdf

1、在年齡相關性黃斑變性(AMD)的發(fā)病過程中，視網膜色素上皮(RPE)細胞漸進性功能障礙或凋亡起著至關重要的作用。NYD-SP15是胞苷脫氨酶家族成員之一，具有潛在地抑制細胞增殖的功能。最近發(fā)現(xiàn)該基因在RPE細胞中呈內源性低表達，但是具體功能尚不清楚。
　　目的:
　　初步研究NYD-SP15對ARPE-19細胞的功能影響及作用機制，為探求NYD-SP15在AMD發(fā)生發(fā)展的作用提供基礎。
　　方法:
　　構建慢病毒

2、穩(wěn)定轉染的NYD-SP15過表達及干擾ARPE-19細胞系，通過CCK-8法、體外創(chuàng)傷劃痕愈合實驗、流式細胞術及caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白活性水平檢測研究其增殖、遷移能力以及凋亡情況。通過基因芯片初步研究NYD-SP15過表達ARPE-19絀胞系的全基因組變化及生物學功能。利用過氧化氫誘導NYD-SP15干擾ARPE-19細胞系的氧化應激損傷模型，通過流式細胞術檢測細胞凋亡水平及細胞內ROS含量。蛋白

3、印跡實驗檢測Akt通路、MAPKs通路和Keap-1/Nrf2/HO-1通路蛋白表達水平。
　　結果:
　　成功構建并鑒定慢病毒穩(wěn)定轉染的NYD-SP15過表達及干擾的ARPE-19細胞系。NYD-SP15過表達ARPE-19細胞系的細胞增殖、遷移能力較對照組明顯減慢，細胞周期S期到G2/M期阻滯，并出現(xiàn)明顯的細胞凋亡，伴caspase-3和caspase-9通路活化增加?；蛐酒Y果發(fā)現(xiàn)，NYD-SP15過表達ARPE-1

4、9細胞與對照組相比，有254個基因下調，僅57個基因上調，呈現(xiàn)普遍全基因組表達受抑制現(xiàn)象。GO分析發(fā)現(xiàn)NYD-SP15可能影響ARPE-19細胞的基因轉錄調控功能，而信號通路分析篩選出Akt以及MAPKs通路可能是NYD-SP15行使其負調控功能的主要通路。蛋白免疫印跡結果表明NYD-SP15過表達能明顯地抑制ARPE-19細胞中Akt及MAPKs通路蛋白Erk1/2、p-38和JNK的表達水平。此外，正常培養(yǎng)的NYD-SP15干擾AR

5、PE-19細胞增殖能力及細胞周期沒有明顯變化，但是在饑餓條件下細胞增殖活性增加。而經過氧化氫誘導氧化應激損傷后，與對照組相比，干擾組細胞生存率提高，且細胞內ROS水平降低，提示細胞抗氧化應激能力增強。蛋白免疫印跡結果發(fā)現(xiàn)NYD-SP15干擾組細胞中，核Nrf2及HO-1蛋白表達明顯增加，Akt、Erk1/2及p38活化水平明顯增加，而JNK活化水平降低。
　　結論:
　　NYD-SP15能夠明顯地抑制Akt或MAPKs通路蛋