農(nóng)作物秸稈青貯飼料中耐低溫乳酸菌的篩選、鑒定及驗(yàn)證研究.pdf

1、針對(duì)西藏地區(qū)高原寒冷氣候不利于常規(guī)商品化乳酸菌制劑發(fā)揮其改善青貯發(fā)酵品質(zhì)的問(wèn)題，發(fā)掘和利用適合于西藏地區(qū)優(yōu)質(zhì)青貯飼料生產(chǎn)的乳酸菌種質(zhì)資源尤為重要。本研究以西藏主要農(nóng)作物秸稈青貯飼料為研究對(duì)象，從中分離耐低溫乳酸菌并進(jìn)行鑒定，進(jìn)而優(yōu)選出產(chǎn)酸和生長(zhǎng)能力俱佳的乳酸菌菌株。在此基礎(chǔ)上，將篩選出的乳酸菌菌株應(yīng)用于西藏地區(qū)牧草和農(nóng)作物秸稈青貯飼料中，探討其在低溫條件下對(duì)西藏地區(qū)牧草和農(nóng)作物秸稈青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響。為西藏地區(qū)優(yōu)良耐低溫青貯乳酸菌添

2、加劑的開發(fā)與應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。
　　1.西藏主要農(nóng)作物秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)的研究
　　本試驗(yàn)研究了添加葡萄糖對(duì)西藏地區(qū)不同農(nóng)作物秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響。青貯原料分別為燕麥秸稈、玉米秸稈、青稞秸稈和小麥秸稈。試驗(yàn)設(shè)置2個(gè)處理，對(duì)照組(C)和1％葡萄糖添加組(G)。分別在青貯第10d和45 d開窖取樣，測(cè)定青貯發(fā)酵品質(zhì)。結(jié)果表明:玉米秸稈和燕麥秸稈自然發(fā)酵容易獲得成功;青稞秸稈和小麥秸稈自然發(fā)酵難以獲得成功。添加葡萄糖對(duì)農(nóng)

3、作物秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)改善效果不明顯，認(rèn)為限制西藏農(nóng)作物秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)的主要因素是乳酸菌數(shù)量及活性不足。
　　2.西藏主要農(nóng)作物秸稈青貯飼料中耐低溫乳酸菌的理化特性及篩選鑒定
　　本試驗(yàn)以青稞秸稈、燕麥秸稈、小麥秸稈和玉米秸稈青貯10d和45 d的青貯飼料為研究對(duì)象，從中共分離出20株耐低溫乳酸菌菌株，均為同型發(fā)酵乳酸菌。其中乳酸球菌8株，其余均為乳酸桿菌。通過(guò)耐酸試驗(yàn)，20株乳酸菌菌株均能在pH值3.5～7.0的條件下生長(zhǎng)

4、，尤其是HG24、LH2、O7、O30、LOG5、LOG9、WG10、WG27、LW4、M1、MG26、LMG4仍可在pH3.0的條件下微弱生長(zhǎng)，表明這12株乳酸菌菌株適應(yīng)酸性環(huán)境能力更強(qiáng)。在耐鹽性上，所有乳酸菌菌株均能在3％和6.5％ NaCl條件下生長(zhǎng)良好。溫度試驗(yàn)中，所有乳酸菌菌株都能夠在5～30℃范圍內(nèi)良好生長(zhǎng)。因此，青藏高原極端環(huán)境中篩選出的20株乳酸菌菌株具有較強(qiáng)的耐酸、耐鹽和耐低溫性，對(duì)環(huán)境具有較強(qiáng)的適應(yīng)性，而且能廣泛地利

5、用碳源，更適于在極端環(huán)境下生存。經(jīng)形態(tài)、生理生化特性測(cè)定及16S rRNA序列鑒定，確定菌株LH7、LO7、LO8、W34、LW7和M35為戊糖片球菌（P.Pentosaceus），LH9和LOG9為乳酸片球菌(P.Acidilactici)，LM8為棒狀乳桿菌扭曲亞種（L.coryniformis subsp.torquens），HG24、LH2、O7、O30、LOG5、WG10、WG27、LW4、M1、MG26和LMG4均為植物乳桿

6、菌（L.Plantarum）。分離的四種乳酸菌中，植物乳桿菌與其他三種乳酸菌相比，產(chǎn)酸能力較強(qiáng)，生長(zhǎng)速率較快。植物乳桿菌的所有菌株中，M1的產(chǎn)酸能力最強(qiáng)，生長(zhǎng)速率最快;戊糖片球菌的所有菌株中，LO7的產(chǎn)酸能力最強(qiáng)，生長(zhǎng)速率最快;乳酸片球菌的所有菌株中，LOG9的產(chǎn)酸能力最強(qiáng)，生長(zhǎng)速率最快。因此將篩選出菌株M1、LM8、LO7和LOG9作為青貯添加劑研究其對(duì)青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響。
　　3.耐低溫乳酸菌對(duì)不同青貯溫度下意大利黑麥草青貯發(fā)

7、酵品質(zhì)的影響
　　本試驗(yàn)研究了篩選出的四株耐低溫乳酸菌菌株在不同青貯溫度下對(duì)意大利黑麥草青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響。試驗(yàn)設(shè)對(duì)照組(B)和4株不同乳酸菌處理組(M1，LM8，LO7，LOG9)，青貯第30d開窖取樣，測(cè)定青貯發(fā)酵品質(zhì)。結(jié)果表明:在青貯溫度為25℃，15℃，10℃時(shí)，添加篩選的乳酸菌均顯著降低了意大利黑麥草青貯飼料的AN/TN和乙酸含量，顯著提高了LA/AA、乳酸、干物質(zhì)和WSC含量，改善了青貯發(fā)酵品質(zhì)。綜合所有發(fā)酵品質(zhì)指

8、標(biāo)，青貯溫度為25℃時(shí)，添加乳酸菌M1組發(fā)酵品質(zhì)最好，青貯溫度為10℃和15℃時(shí)，添加乳酸菌LM8組發(fā)酵品質(zhì)最好。這表明棒狀乳桿菌LM8更適合用做低溫條件下的青貯添加劑。
　　4.耐低溫乳酸菌對(duì)西藏葦狀羊茅和燕麥秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響
　　本試驗(yàn)研究了篩選出的四株耐低溫乳酸菌菌株對(duì)西藏當(dāng)?shù)厝敔钛蛎┖脱帑溄斩捛噘A飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響。試驗(yàn)設(shè)對(duì)照組(B)、商品乳酸菌處理組(G)和4株篩選出的乳酸菌處理組(M1，LM8，LO7，LO